FLAGELADOS

Ceratium

Eudorina

Euglenophytas hinchada con materia orgnica

ALGAS QUE OBSTRUYEN FILTROS

Algas verde azuladas o Cianobacterias: Anabaena flos-aquae, Chroococcus trugidis, Oscillatoria ornata, Oscillatoria amphibia, Oscillatoria princeps, Oscillatoria pseudogeminata, Oscillatoria rubescens, Oscillatoria splendida Algas verdes: Chlorella pyrenoidosa, Closterium moniliferum, Cladophora aegagropila, Palmella mucosa, Spirogyra porticales, Ulothrix variabilis, Mougeotia sphaerocarpa, Hydrodictium reticulatum, Tribonema bombycinum Diatomeas: Aulacoseira sp, Cyclotella mengehiniana, Diatoma vulagare, Melosira granulata, Melosira varians, Navcula graciloides, Navcula lanceolata, Nitzschia palea, Synedra acus, Synedra delicatissima, Synedra pulchella, tabellaria fenestrata, Tabellaria flocculosa Flagelados pigmentados: Dinobryon sertularia, Peridinium wisconsinense, Trachelomas crebea

Segn Reynolds (1988), la comunidad fitoplanctnica se y Relacin con Factores Ambientales estructura en relacin a la luz disponibilidad de nutrientes En ambientes con disponibilidad de nutrientes, predominan organismos oportunistas, de rpido crecimiento y reproduccin de pequeo tamao y alta relacin superficie/volumen, denominadas C-estrategas (fitoflagelados) En ambientes con limitacin de nutrientes, predominan los organismos tolerantes a este stress o S-estrategas.(cianobacterias) En ambientes con cambios frecuentes en la calidad de luz debido a turbulencias, predominan los R-estrategas (diatomeas)

Sucesin Estacional de estrategas C-R-S

Algunas especies tienen un desarrollo abrupto exponencial cuando se dan las condiciones fisicoqumicas El alga en curso de proliferacin emite sustancias extracelulares que inhiben las otras especies algales por heteroantagonismo La sustancia heteroantagnica va a ver aumentada su concentracin hasta ser autoantagonista es decir, inhibida por el alga misma que la secreta En los medios eutrficos el obstculo es el autoantagonismo que provoca la muerte de las algas que son degradas por detrvoros y saprfitos consumiendo el O2 volviendo el medio anaerbico continuando con la formacin de metano y derivados reducidos del S de olores nauseabundos Los agrupamientos masivos de cianobacterias se han ganado el trmino colectivo de floraciones de agua, las cuales se pueden diferenciar de acuerdo a brotes masivos generales de clulas en toda el agua y espumas flotantes en la superficie

FLORACIONES

Bloom de Cianobacterias (Anabaena y Microcystis)

Las algas producen sustancias (metabolitos) producto de su anabolismo o catabolismo algunas son extracelulares y se liberan al medio y otras son intracelulares que alcanzan el medio luego de la lisis celular Los metabolitos algales son responsables de : toxicidad, gustos y olores y coloracin Gustos y olores: se incluyen los Actinomycetes , algunas especies son ms frecuentes que otras: Anabaena (cianobacteria). Los metabolitos ms hallados son geosmina y MIB olores de tierra y humedad Geosmina: Anabaena, Lyngbya, Oscillatoria, Phormidium, Metil isoborneol (MIB): Oscillatoria, Pseudoanabaena, Synechococcus

METABOLITOS ALGALES

METABOLITOS ALGALES
Metabolitos coloreados: son endocelulares, pigmentos cloroflicos o carotenoides liberados por lisis celular Son destruidos por los saprfitos aparecen en el final de una floracin donde los consumidores son impulsados a eliminar la totalidad de productores Metabolitos txicos: concierne a las cianobacterias y son endotoxinas neurotxicas o hepatotxicas La generacin de las toxinas est relacionada con la aparicin del bloom algal productor de las mismas. Entre un 40-70% de los casos de blooms se caracterizan como txicos. La produccin de toxina es muy importante durante la fase de crecimiento del bloom, en este perodo es intracelular en casi un 90%. No toda la especie es constantemente txica slo unas cepas y pueden producir ms de una toxina y en ciertas condiciones fisicoqumicas La liberacin de la toxina se produce por mortalidad de las clulas o procesos tales como aplicacin de alguicidas como el sulfato de cobre o la cloracin.

CYANOBACTERIAS

Se han hallado fsiles de ms de 30000 millones de aos. Al carecer de orgnulos celulares (cloroplastos) sitan el trasporte de electrones en los tilacoides donde se asientan los fotosistemas que trasportan los e- procedentes de la oxidacin del agua No presentan demasiadas exigencias nutricionales poseen una gran capacidad de adaptacin y han colonizado casi todos los rincones del planeta Microcystis es ms comn en su distribucin mundial que cualquier otra cianobacteria toxigncia. Es un gnero que no fija N y puede vivir en condiciones pobres de alimentacin Las Cianobacterias poseen vesculas intracelulares especializadas en gas lo que le permite regular su capacidad de flote y adpatarse a las condiciones de luz ms adecuadas Cuando las condiciones del agua pasan de turbulentas a estratificadas varias clulas o colonias flotantes se acumulan en la superficie y los vientos las trasportan hacia las orillas y bahas donde forman espumas Las floraciones persisten en aguas con adecuados niveles de nutrientes inorgnicos (N y P) temperaturas 15-30C y niveles de pH 6 - 9 Los dos factores principales que afectan la produccin de toxina son la luz y temperatura (20-25C) son ms txicas durante perodos de temperaturas clidas y en reas tropicales

FACTORES QUE DETERMINAN LAS CAUSAS DE LAS FLORACIONES Y LOS EFECTOS SOBRE LOS SISTEMAS ACUATICOS

CIANOBACTERIAS TOXICAS

CLASIFICACION DE LAS TOXINAS

Grupo Nombre
Anatoxina-a

Estructura qumica

Efecto

Mecanismo de Accin
Agonista de la acetilcolin Excitacin muscular Inhibidor de la acetilcolinesterasa Bloqueo de la conduccin nerviosa Parlisis Aumento de la fosforilacin. Destruccin de las conexiones entre hepatocitos y clulasendoteliales Son menos txicas que las anteriores

Neurotoxinas

Anatoxina-a (s) Saxitoxinas (PSPs) Microcistina Nodularina

Alcaloides

Toxinas Neuromusculares de efecto agudo o de corto trmino

Citolisis heptica, hemorragia e insuficiencia heptica
Gastroenteritis Alergias , irritacin de la piel

Ciclopptidos

Hepatotoxinas
---------Lipopolisacridos

Endotoxinas

Produccin de Toxina segn el gnero de Cyanophitas

Cyanophytas Toxina
Nivel gua de calidad de agua (ug/l)

LD 50 ug/kg ratn (LR) 50-60

Anabaena Oscillatoria Microcystis Nodularia Nostoc Cylindropermopsis

Microcistina

Saxitoxina (PSPs)
Microcistina Saxitoxina (PSPs) Microcistina

3
1 3 1

10
(LR) 50-60 10 (LR) 50-60

Saxitoxina (PSPs)
Nodularina Microcistina Cylindropermopsina

3
2 1 1-3

10
50 (LR) 50-60 2000 (1d) 500 (5d)

La produccin de toxina durante un bloom algal oscila 10-14 a 10-13 g/cel

ESTRUCTURA MICROCISTINAS

Formadas por 7 aa (heptapptido cclico) con una cadena lateral especfica que slo se encontr en microcistinas y nodularinas Cinco de los aa no pertenecen a protenas mientras que los otros dos s y son los que permiten reconocer los distintos tipos aprox 50 especies de microcistinas mientras que los dems aa son ms o menos constantes entre las variantes de mcirocistinas Cada microcistina se designa usando las iniciales de los dos aa distintivos Estas variaciones en los aa afectan la estrutura terciaria de la molcula y resultan en diferencias pronunciadas en la toxicidad as como en las propiedades hidrofbicas/hidroflicas

Estructura general de una microcistina,se muestran las posiciones donde se encuentran los aa variables (X y Z)

ESTRUCTURA MICROCISTINAS

La ms comn y potencialemnte txica es la Microcistina L-R la que contiene los aa Leucina (L) y Arginina (R) en las dos posiciones variables Las microcistinas son degradadas por el agua luego de cierto perodo (10 ug/l de MC-LR tiene un perodo de vida de poco menos de una semana Microcistina LR es muy estable en el agua resiste pH extremos y temperaturas de hasta 300C La biodegradacin y la fotlisis son los medios por los cuales esta microcistina puede degradarse en forma natural en el agua

Estructura de microcistina L-R con los aa variables Leucina y Arginina en azul y fuscia

El primer registro es un trabajo realizado en 1954 en la laguna de San Miguel del Monte, donde se produjo la mortandad masiva de peces en concordancia con una floracin de Anabaena circinalis y Microcystis flos-aquae. (Ringuelet 1955) En 1984, la muerte de 72 vacas de un total de 170 que haban entrado a un campo, y resultaron ser el total de los que haban consumido agua de un charco conteniendo Anabaena flos-aquae, Nodularia spumigena y Microcystis aeruginosa. (Odriozola et al., 1984)
Otros episodios en Argentina se registraron en : Chubut, laguna Willimaco (Pizzolon, 1996). Santa Fe, Ro Salado (Emiliani, 1997). San Luis, en embalses (Gonzlez, 1999). Ros Limay, Neuquen y Negro, en embalses y sectores de sus cuencas (Echenique,1999). Provincia de Buenos Aires varios cuerpos de agua (Echenique & Gonzlez,1998y1999; 2001 ;2003). Tierra del Fuego, en el lago Fagnano (Bleta , 2003); Puerto Madero y Punta Lara (2003); Salta, embalse Cabra Corral. Entre Ros (Argentina) y Uruguay, embalse Salto Grande.Corrientes, Ro Paran (2004); Ro Santiago en Isla Paulino

Cianobacterias en la Repblica Argentina Episodios nocivos

(2004)

Cianotoxicidad algal en el Ro de la Plata

Teniendo como antecedente los fenmenos de floraciones ocurridos en el Ro de la Plata veranos de 2001 al 2003, el 19 de diciembre de 2003 se llev a cabo la toma de una muestra de agua en el canal del Puerto La Plata. El anlisis microscpico de dicha muestra revel la presencia de Microcystis aeruginosa. Se efectuaron estudios de toxicidad aguda (ensayos ratn). La muerte de los ratones inyectados intraperitonealmente con el extracto liofilizado de la muestra, se produjo 40 minutos despus de la intervencin. Al efectuar la diseccin de los animales, se observaron variaciones en las caractersticas de los hgados de los ratones inyectados con el extracto (aumento de volumen y cambio en la coloracin). Con esos resultados se verific la presencia de hepatotoxinas. El 9 de enero se realiz la toma de otra muestra de agua en el canal de acceso al Puerto La Plata, en la zona del destacamento de Prefectura Naval Argentina. El anlisis microscpico, de la muestra de agua, revel nuevamente la presencia de Microcystis aeruginosa.

ENSAYOS DE IDENTIFICACION

HPLC (cromatografa lquida de alta performance): las toxinas son separadas usando una columna en fase reversa de C18 y una fase mvil conteniendo metanol o acetonitrilo que determinar que tipo de microcistina se trata. El lmite de deteccin que se obtiene es de 0.02ug/l para muestras de agua de 5litros HPLC con detector PDA (arreglo de diodo): permite ver el espectro tpico de las microcistinas que absorben en el UV a 238nm o a 222 nm en caso que tengan aa aromticos es confiable a altas cc de microcistinas dando un espectro bien definido y los lmites de deteccin son < a 1ug/l a altas cc LC/MS (espectrometra de masas): se usa luego de la separacin por HPLC para identifiacacin de las diferentes microcistinas debido a que c/u porduce iones caractersticos en su espectro de masa, da un lmite de deteccin de 0.02ug/l de microcistinas individuales para muestras de 5 l de agua ELISA (enzimoinmunoensayo): es el ms difundido para muestras ambientales se basa en el ataque de anticuerpos a microcistinas en general, no es muy sensible a algunos tipos como MC- RR o MC-LA, es semicuantitativo ya que no detectan cc muy bajas de microcistinas Extraccin y purificacin de la muestra: se realiza un paso de filtracin, la muestras se somete a ultrasonicado, congelacin-descongelacin para romper el alga y obtener las toxinas libres, la extraccin de fase slida (cartucho SPE) es con metanol 75% a pH 10

Microcystis sp en Agua Cruda Superficial - Niveles de alerta

Considerando : la produccin de toxina durante un bloom algal 10-14 a 10-13 g/cel concentracin toxina/l clulas/l x concentracin de toxina/cel org/l (unidades /l) 20 clulas/l
Clulas/l 10 7 10 9 Org/l Cc de toxina produccin moderada 10-14 g/cel (unidades/l) 5x105 5x107 0.1 ug/l 10 ug/l Cc de toxina produccin fuerte 2x10-13 g/cel 2 ug/l 200 ug/l

Teniendo en cuenta: Valor Gua OMS para agua potable de 1ug/l en el que no se observan efectos adversos, implicara en el peor de los casos un agua cruda superficial con 2.5x105 org/l (5x106clulas/l) Segn bibliografa se puede considerar un nivel de alerta 50.000 cel/ml = 2.5 106 Org/l Se ha propuesto fijar para agua de captacin toma superficial Ro de la Plata un nivel de alerta temprano de 100.000 org/l (unidades/l) o bien 2x106 clulas/l

LEGISLACION-NIVELES DE RIESGO Y DE SEGURIDAD

En 1998 la OMS estableci el nivel mximo aceptable para el consumo diario de MC-LR en 1 ug/l, es un valor provisional de referencia debido a la poca informacin disponible No existe legislacin en cuanto a aguas recreacionales la OMS sugiere prohibir el acceso a la zona recreativa en presencia de ms de 20.000 cl/ml Australia que se dedica intensamente al estudio de Cianobacterias y en especial Microcystis establece un lmite de 1.3ug/l ya que el peso corporal es de 70kg y para la OMS 60kg 1.3 ug/l = (40 ug/kg de peso corporal x 70 kg x 0.9) / (2 l / da x 1000) 40ug/kg de peso corporal por da = nivel mximo donde no se observan daos hepatolgicos sobre estudio de ingestin en ratones durante 13 semanas con MCLR 70kg = peso del adulto y 0.9 es la proporcin afectada del total de agua de bebida 2 l / da = consumo medio de agua de un adulto 1000 factor de seguridad a partir de la extrapolacin de animales a humanos Deberan definirse una serie de valores gua asociados con la severidad y probabilidad elevada de los efectos sobre la salud en tres niveles de riesgo (leve, moderado y elevado) y considerar que el riesgo aumenta en personas susceptibles (hepatitis B crnica, lesiones renales, alcoholismo)

Australia

Alemania

Microcistina total: 1,3 g/l como MC-LR TE (toxicidad equivalente) para una densidad de 6500cel/ml (0,2 pg MC total /cel).Es una medida ms racional teniendo en cuenta que la toxina que produce M aeruginosa posee Sudeste Australia: ms de 75 variantes y en general, el nmero Microcystis de variantes presentes en una muestra aeruginosa Australia individual va de unas pocas hasta 20 y es la tropical y subtropical: toxicidad acumulativa de microcistina en total Cylindrospermopsis la que representa el riesgo potencial por raciborskii ingestin del agua de bebida. Saxitoxina (PSPs): nivel de alerta de 3g/l , Cylindrospermopsina: 1 g/l , Nodularina:sin nivel gua La concentracin de clorofila a y la biomasa de cyanobacterias del fitoplancton total son las Planktothrix agardhii, mediciones ms comunes, aplicacin del radio Planktothrix microcistina/clorofila a. No hay valor gua rubescens, regulado, en ocasiones se emplea el valor Mycrocystis spp gua de OMS de 1 g/l de MC-LR

1983-dao heptico en poblacin expuesta en la red de distribucin por bloom de Mycrocystis en la fuente 1979: C raciborskii severa intoxicacin asociado a un bloom en reservorio de agua potable

En 1991 cadetes de la armada practicando canotaje se expusieron a Mycroystis txicas experimentado neumona atpica.

Mycrocystis, Planktothrix y Anabaena son los gneros dominantes. Blgica- Microcistina: valor gua provisorio de OMS de Mycrocystis domina No hay casos reportados Luxemburgo 1 g/l de MC-LR en aguas con baja conductividad y Planktothrix con alta conductividad.

Brasil

Desde el 2000 la regulacin incluye monitoreo de cyanobacteriasy microcistina en agua cruda y tratada. La biomasa de cyanobacterias se monitorea mensualmente estableciendo un primer nivel de alerta de 10000 cel/ml (o 1mm3 /l de biovolumen). Entre 10000 a 20000 cel/ml el monitoreo se realiza semanalmente y por encima de ese nivel es requerido el anlisis cuantitativo de la toxina. Se adopta el valor estandar mandatorio de 1 g/l para microcistina, de 3g/l para equivalentes de saxitoxinas y 15 g/l para cylindrospermopsina, estos ltimos como valores gua.

1996- el incidente ms serio sucedi en la ciudad de Caruaru, Microcystis y estado de Pernambuco , 130 Anabaena son los pacientes en hemodilisis gneros ms experimentaron sntomas de comunes con intoxicacin relacionados con incidencia de hepatotoxinas, 100 pacientes Cylindrospermopsi desarrollaron fallas agudas en s en la ltima hgado causadas por intoxicacin dcada por microcistina y 70 de ellos murieron .

Desde el 2002 se establece una mxima concentracin aceptable (MAC) para MC-LR de 1,5 g/l . Se la considera protectora contra la exposicin a otras variantes de Canad microcistina que pueden estar presentes, es conservativo y deriva de la base de un consumo diario de microcistina-LR durante un ao completo.

Mycrocystis, Anabaena, 1993-un intenso evento en Oscillatoria, reservorio ciudad de Winnipeg sin Aphanizomenon y consecuencias en la poblacin. Nodularia

Se utiliza el valor gua provisional de OMS Dinamarca de 1g/l de MC-LR cuando se necesita, no hay valor gua oficial

Blooms txicos masivos ocurren Mycrocystis, cada ao . Desde 1987 se Anabaena, implement un Plan de accin para Planktothrix, el ambiente acutico reevaluado en Aphanizomenon y 1998 y 2004, debido a esas Nodularia acciones se redujo el aporte de fsforo de 5,5 t/ao a 2 t/ao.

Se utiliza el valora gua de OMS de 1 g/l para MC-LR slo cuando la eutroficacin es evidente en el cuerpo de agua. La nueva legislacin incluir este valor gua como lmite para agua de bebida, no as para agua cruda. Se objeta dicha legislacin por Espaa Mycrocystis spp. no haber incluido el concepto de MC-LR equivalentes dado que se refiere a microcistina en singular y no tiene en cuenta las posibles variantes presentes y tampoco define la metodologa para el anlisis de microcistina.

El 25% de los reservorios para agua de bebida se encuentran afectados por cyanobacterias

No hay una regulacin federal al respecto. Los estados usan el valor gua de la OMS Estados de 1g/l para MC-LR. Las cyanobacterias Unidos estn propuestas en la USEPA en la Lista de Contaminantes Candidatos para establecer futuras regulaciones.

En 1974 se reportaron sntomas de gastroenteritis en el 62% de la poblacin conectada a la red de agua por bloom de Lyngbya entre otras cyanobacterias. En Nebraska 50 personas reportaron sntomas de Mycrocystis spp., exposicin a cyanobacterias txicas Lyngbya, presentes en lagos y reservorios. En Cylindrospermopsis el 2001 el estado de Florida report concentraciones de MC en el rango de 0,1 g/l a 12 g/l, cylindropermopsis hasta 90 g/l y anatoxina -a hasta 8 g/l en agua de bebida. Tres casos en el 2005 con efectos adversos en nios (fiebre, irritacin ojos y piel, dolores abdominales) fueron relacionados con muestras conteniendo altas concentraciones

Anabaena Red de monitoreo visual de cyanobacterias lemmermannii es la en cuerpos de agua como primer alerta Finlandia especie dominante clasificndolas en cuatro clases (0-3). adems de Recuento de biomasa de cyanobacterias Mycrocystis

Desde el 2003 un decreto fija un lmite mximo de 1 g/l de MC-LR en agua de bebida. Se aconseja el monitoreo de la Francia Mycrocystis spp. toxina en agua tratada cuando hay proliferacin en agua cruda (10000 cel/ml) . No hay lmites en agua cruda. Anabaena, No hay regulacin al respecto, se usa como Aphanizomenon, referencia el valor gua de OMS de 1g/l de Planktothrix MC-LR rubescens, Mycrocystis spp

Casos de dermatitis reportados por nadadores. No se reportaron casos por agua de bebida. Como acciones en las reas urbanas se introdujeron sistemas de desfosforizacin en plantas de tratamiento de lquidos cloacales

Italia

No hay casos reportados

Para aguas recreacionales, nivel de accin por encima de 20 g/l de MC-LR. Para Holanda agua de bebida se usa el nivel gua de OMS de g/l de MC-LR

Planktothrix, Mycrocystis spp, Limnothrix, Aphazinomenon

Si bien no hay casos reportados por exposicin en agua de bebida, se han detectado concentraciones de MC-LR equivalentes de hasta 68g/l en reservorios y en el 2004 un caso extremo de 52000 g/l medida en la espuma superficial. En el peor escenario terico se ha demostrado que el valor gua de OMS podra excederse en valores cercanos a 2,9 g/l para el agua de consumo en Holanda. Se han reportado niveles de hasta 9,8 g/l MC-LR en agua de toma superficial y en agua de bebida de hasta 0,8 g/l

Mycrocystis siendo Desde el 2002 para agua de bebida se usa MC-LR, MC-RR y Polonia el valor gua provisorio de OMS de 1 g/l MC-YR las de MC-LR variantes detectadas

El 73% del suministro proviene de fuentes de agua superficial. Las guas actuales (2000) establecen valores mximos aceptables (MAV) provisionales para cyanobacterias y cyanotoxinas, las nuevas guas del 2005 revisionan dichos MAV y agregan medidas Nueva preventivas y evaluacin de riesgos. Los MAV Mycrocystis spp Zelanda provisionales para cyanotoxinas son: Anatoxina = 0,006 mg/l, Anatoxina-a (S) = 0,001 mg/l, cylindropermpsina = 0,001 mg/l, Homoanatoxina -a = 0,002 mg/l, MicrocistinaLR equivalentes de toxicidad = 0,001 mg/l, Nodularina = 0,001 mg/l, Saxitoxinas (como STX equivalente) = 0,003 mg/l En el 2004 se implement el valor gua provisional de OMS de 1g/l de MC-LR y el monitoreo en agua de bebida. En el 2005 se Repblica agrega cuantificacin de la biomasa de Checa cyanobacterias en agua cruda por pigmento fluorescente o la combinacin de ensayos ecotoxicolgicos con recuentos celulares (20000 cel/ml es el primer nivel de alerta)

Se han reportado numerosos incidentes que involucran cyanotoxinas y fuentes superficiales para agua de bebida.

Mycrocystis siendo MC-LR la variante detectada en el 90% de los casos

Entre 1999-2000 numerosas plantas de agua se cerraron temporalmente por el incremento en los niveles de microcistina

La eutroficacin Microcystis y Anabaena han Se incorpor el valor gua de la OMS de 1 g/l constituye la principal sido durante dcadas los para MC-LR en agua de bebida y un rango de amenaza de las gneros ms comunes con Sudfrica calidad como objetivo de 0 - 0,8 g/L. Estos fuentes de agua incidencia de valores gua se completan con mediciones de actuales libres de Cylindrospermopsis spp y clorofila a y recuento de cyanobacterias cyanobacterias y/o sus Planktothrix en la ltima dcada metabolitos y toxinas

Consecuencias de las Floraciones o Blooms y Medidas de control

Inconvenientes : Potabilizacin: aumenta el riesgo de liberacin de toxinas con la cloracin Suministro de agua potable: al ingerir o inhalar agua o el consumo de suplementos dietarios algales contaminados con toxinas es considerado un riesgo Usos recreativos del cuerpo de agua: contato directo con partes expuestas del cuerpo (odos, ojos, garganta, boca) o areas cubiertas del traje de bao (acumulan algas y foementan el rompimiento celular y liberacin de contenidos) Medidas de control: Acciones en la planta potabilizadora Reducir las fuentes de N y P, mantener las cc de P por debajo de 0.01ug/l y la transparencia ( > a 2m) Evitar el uso de alguicidas (sulfato de cobre)