La palabra Cromatografa significa: Escribir en Colores

La fase estacionaria puede ser un: slido lquido soportado en un slido o en un gel La fase estacionaria puede encontrarse empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una pelcula u otras.

En cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que circula a travs de una columna en la que est contenida la fase estacionaria. La fase mvil no slo arrastra al analito, sino que existen interacciones intensas entre el analito y la fase mvil.

La cromatografa lquida se clasifica segn el lecho cromatogrfico:

Cromatografa Lquida Clsica: La columna es de vidrio y se usa para mezclas complejas. Cromatografa de alta resolucin o HPLC: La columna es de acero inoxidable.

Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidrio. La fase mvil se encuentra formada por la solucin que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.

La eficiencia de la columna en la cromatografa de lquidos esta determinada por el tamao de la partcula de relleno y el tamao de la muestra que se utiliza. Actualmente se utilizan rellenos de tamao de partcula del orden De 3-10m. Este tamao de partcula requiere la utilizacin de instrumentos mas sofisticados como la Cromatografa liquida de alta eficiencia (HPLC).

Es actualmente la herramienta ms poderosa en qumica analtica. Permite separar, identificar y cuantificar los compuestos presentes en cualquier muestra que pueda disolverse en un lquido.
Las razones de la popularidad de esta tcnica son: Sensibilidad. Determinaciones cuantitativas exactas Separacin de especies no voltiles y termolbiles.

Las columnas para HPLC se construyen normalmente con acero Inoxidable. La mayora tiene una longitud de 10 a 30 cm. Los tipos bsicos de relleno utilizados son: Pelicular: Consiste en bolas de vidrio de polmero, no porosas y esfricas recubiertas de una fina capa porosa de slice, almina o de una resina de intercambio inico. Este tipo de relleno se utiliza normalmente en as precolumnas.

Partcula porosa: formados por macropartculas porosas con dimetros de 3 a 10m de slice, almina o de una resina de Intercambio inico. Las de slice son las mas comunes.

Constituye el sistema de suministro de fase mvil al sistema. Debe cumplir con los siguientes requisitos: Generacin de presiones por encima de 6000 psi (~410 atmsferas) Proveer un flujo constante, libre de pulsos Constancia en la velocidad de flujo ( 0.1 10 mL/min ) Componentes resistentes a la corrosin por diversos disolventes (acero inoxidable o PEEK olyEtherEtherKetone)

Es imprescindible evitar la presencia de partculas que puedan obstruir los canos y la formacin de burbujas que puedan deteriorar el relleno de las columnas y que produzcan inestabilidad en la seal del detector. Para evitar las obstrucciones, los solventes y las muestras a inyectar se filtran con membranas de 0,45 a 0,22 m.

Son los encargados de introducir la muestra en la cabeza de la columna de forma reproducible y adecuada. Hay dos tipos de inyectores: Septum: Inyecta la muestra mediante una jeringa. Se usa poco y no permite mucha presin. Bucle de muestreo: Este dispositivo normalmente se encuentra integrado en el equipo cromatogrfico y existen bucles intercambiables que permiten la eleccin de tamaos de muestra.

 Se colocan delante de la columna para eliminar la materia en suspensin y los contaminantes de los disolventes. La composicin del relleno debe ser semejante al de la columna. Aunque el tamao de partcula es mayor para minimizar la cada de presin. En muchas ocasiones se usan para aumentar la vida de la columna. Se reemplaza cuando se contamina.

Tubos de acero inoxidable Longitud: 10-30cm Dimetro interno: 2-5 mm Partculas para empaquetamiento de la columna: 3 a 10 m

Longitud: 3-7.5cm Dimetro interno: 1-4.6 mm Partculas para empaquetamiento de la columna: 3 a 5 m Ventaja: Velocidad y mnimo consumo de fase mvil.

La funcin bsica de un detector es que debe producir respuestas muy rpidas a pequeas concentraciones de soluto.

En HPLC existen dos tipos bsicos de detectores: Los basados en una propiedad de la disolucin: Que corresponden a una propiedad de la fase mvil, como el ndice de refraccin, la constante dielctrica, la densidad... Los basados en una propiedad del soluto: Es decir, responden a alguna de las propiedades del soluto, como la absorbancia UV, fluorescencia, intensidad de difusin, que no son propias de la fase mvil.

Hay cinco mtodos cromatogrficos: Cromatografa de Reparto. Cromatografa inica. Cromatografa de Exclusin. Cromatografa de adsorcin.

La cromatografa inica se usa para separar y determinar especies inicas. La fase mvil es un lquido acuoso y salino que contiene un disolvente orgnico como metanol o acetonitrilo y un compuesto inico que aporta un contraion de carga opuesta al analito. La fase estacionaria es una resina de intercambio inico.

 Es una tcnica que se aplica particularmente a especies de alto peso molecular. La fase estacionaria est compuesta de partculas de slice o polmeros en forma de gel. La retencin est basada en el tamao de las molculas. Si las molculas son ms grandes que los poros, no pueden penetrar en ellos (slo pasan las partculas). Si las molculas son ms pequeas que los poros, penetran en ellos recorriendo caminos mucho ms largos. Si las molculas tienen un tamao intermedio, podrn penetrar en los poros ms grandes (camino recorrido intermedio).

 Su fase estacionaria en apolar, y la fase mvil polar. Los compuestos ms retenidos son los ms apolares.

A diferencia de en fase reversa, la fase estacionaria es polar y la mvil apolar. Donde el analito menos polar ser el primero que se eluye y el ms polar el ltimo en eluir.

Se elige la polaridad de la fase estacionaria bastante similar a la de los analitos y para la elucin se utiliza una fase mvil de polaridad considerablemente distinta

La fase estacionaria es la superficie de un slido polar finamente dividido. El analito compite con la fase mvil por los sitios sobre la superficie del empaquetamiento y la retencin se debe a las fuerzas de adsorcin. Fase estacionaria: Slice o alumina Fase mvil: Solvente orgnico o mezcla.

CAMPO
Frmacos Bioqumica Alimentos

Mezclas Tpicas
Antibiticos, Sedantes, Esteroides, analgsicos Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos Edulcorantes, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos, colorantes, aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos Pesticidas, herbicidas, fenoles Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos

Contaminantes Qumica forense

Separacin de cidos grasos, determinacin de glucosa fructosa y sacarosa en zumos enlatados.