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Laboratorio de Microbiologa Medicina

Ma. Fernanda Rosales, Mgst.

BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICA # 1

Objetivos:
Conocer los aspectos bsicos de bioseguridad y reglas generales de trabajo para el desarrollo de actividades en el laboratorio de microbiologa. Reconocer las metodologas existentes para la desinfeccin de superficies e implementos del laboratorio. Aplicar algunos de los mtodos utilizados para la esterilizacin de medios de cultivo, materiales y accesorios utilizados en el laboratorio de Microbiologa.

La bioseguridad en el laboratorio se refiere al conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de las personas que all trabajan. El propsito bsico es obtener un ambiente de trabajo seguro y ordenado.

Normas generales para el trabajo de laboratorio.


1. El ingreso a los laboratorios, debe estar regulado por el responsable del mismo y limitado al personal autorizado. El personal que ingresa a las instalaciones debe responsabilizarse del cumplimiento de las normas de bioseguridad. El laboratorio siempre debe permanecer LIMPIO Y ORDENADO, durante la ejecucin de los procedimientos, revelado o lectura de pruebas y dems espacios de tiempo. Todas las reas deben estar rotuladas con la seal de riesgo biolgico y el nivel de contencin. No pipetee con la boca, utilice para ellos bombas pipeteadoras o el dispositivo adecuado. 6.

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Evite hablar en tono alto y el movimiento innecesario en el laboratorio. Ingrese al laboratorio con bata manga larga, abotonada y limpia; Los libros y dems pertenencias personales deben ser ubicados en el lugar dispuesto para ello dentro del laboratorio. NO coloque sus pertenencias sobre las sillas o mesones de trabajo. Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la sesin de laboratorio para evitar el ingreso de agentes contaminantes por las corrientes de aire. Al INICIO y FINAL del procedimiento realizado en el laboratorio, limpie la superficie de trabajo con una solucin desinfectante y ubique adecuadamente las sillas y materiales/equipos utilizados.

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Lave correctamente sus manos al entrar y al terminar cada sesin prctica. Las personas con cabello largo deben recogerlo al inicio de las actividades, as como utilizar: bata, cofia, tapabocas, guantes (si es necesario), y los equipos de proteccin segn el nivel de riesgo biolgico. Prcticas no aceptadas dentro del laboratorio: Comer, beber, fumar, aplicarse cosmticos (en especial rmel que, acelera el deterioro de los oculares del microscopio); el uso lentes de contacto cosmticos es una actitud prohibida dentro del laboratorio. Siempre utilice zapatos cerrados y mantenga las uas cortas, limpias y sin esmalte.

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Emplee los equipos segn las instrucciones disponibles en el laboratorio, as como, los protocolos o guas correspondientes a las prcticas. No manipule equipos sin la autorizacin respectiva y menos si no posee las destrezas para hacerlo. Realice el transporte de muestras en los contenedores apropiados (cajas hermticas o neveras transportables), con los cuales se eviten salpicaduras y sean de fcil desinfeccin. Al final de cada procedimiento, disponga el material contaminado o limpio en sus respectivos lugares pero NO sobre los mesones. Evitar el contacto de la piel con materiales infecciosos o con potencialidad de serlo. El uso de guantes es adecuado para la manipulacin de muestras o cultivos de patgenos. Si a utilizado guantes, deber desecharlos antes de salir del rea de trabajo y NO tocar implementos, puertas, equipos o materiales con ellos puestos.

19. Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente al profesor. 20. Se usarn gafas protectoras y mscaras faciales si existe riesgo de salpicaduras y/o aerosoles. Debe evitarse al mximo la formacin de aerosoles durante el trabajo de laboratorio. 21. Cada estudiante o unidad de trabajo dentro del laboratorio debe contar con su equipo bsico de trabajo (lminas portaobjetos, lminas cubreobjetos, jabn, tijeras, cinta de enmascarar, lpiz o marcador de vidrio permanente, toallas de papel, algodn, etanol, asas bacteriolgicos y/o micolgicas, guantes, pipeteador, etc.).

Desinfeccin
Desinfeccin, describe la destruccin de microorganismos presentes en la superficie de implementos, equipos y manipuladores, utilizando sustancias qumicas denominadas desinfectantes (o antispticos de acuerdo al uso).

Los desinfectantes son sustancias qumicas aplicadas sobre objetos y superficies; los antispticos son sustancias qumicas aplicadas sobre la piel y mucosas.

Todo buen mtodo de desinfeccin deber cumplir las siguientes condiciones:


(i) Eliminar el mayor nmero de microorganismos (al menos todos los patgenos), (ii) ser econmico (iii) no debe ser corrosivo, txico o irritante para los tejidos y (iv) al menos ser soluble en agua.

Tabla 1

Para un proceso de desinfeccin correcta, tenga en cuenta las siguientes recomendaciones:


Prepare la solucin desinfectante diariamente para su uso. No utilice recipientes metlicos. Mantenga el producto desinfectante en un lugar seco y protegido de la luz. Emplee la concentracin recomendada por la casa comercial. No mezcle el desinfectante con otras sustancias. Utilice guantes para su empleo.

NIVELES DE CONTENCIN O DE SEGURIDAD BIOLGICA.


Nivel de contencin 1 Es el nivel de seguridad requerido para los agentes que no producen enfermedad en el ser humano o animales. Es el utilizado comnmente en los laboratorios de prcticas de las universidades o donde se emplean cepas no patognicas (ej.: microorganismos utilizados en la industria alimentaria).

Nivel de contencin 2. Es de riesgo individual moderado y riesgo comunitario bajo. Agentes patgenos que pueden causar enfermedades en humanos y animales, pero con pocas probabilidades de entraar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la comunidad, los animales o el medio ambiente (ej.: Staphylococcus spp, Salmonella spp., Toxoplasma spp., etc.).

Nivel de contencin 3. Se debe aplicar este nivel, cuando se trabaja con microorganismos que ocasionan patologas graves, de tratamiento complicado y, que pueden ocasionar la muerte. Las principales medidas en este caso son la manipulacin correcta dentro de cabinas de seguridad (ej.: Mycobacterium tuberculosis, Brucella abortus, Coxiella burneti, etc.). En estos casos, los procedimientos solo pueden ser desarrollados por personal calificado.

Nivel de contencin 4. De elevado riesgo individual y comunitario. Es el nivel requerido cuando se procesa o se sospecha de la presencia de un agente patgeno infectocontagioso, que produce alta mortalidad y para el que no existe tratamiento (o es poco fiable); para microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad (ej.: patgenos humano y animales).

ESTERILIZACIN.
La esterilizacin es la eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, por lo general se acondicionan de tal forma que no puedan contaminarse nuevamente. Existen varios mtodos de esterilizacin, los agentes fsicos (Calor seco, calor hmedo, radiaciones) y agentes qumicos (Cloro y compuestos clorados, aldehdos, xido de etileno, compuestos fenlicos, cidos y lcalis).

Conceptos
Esterilizacin. Proceso de destruccin de toda vida microbiana. El trmino estril es absoluto; un material est estril despus de un proceso o no lo est. Antisptico. Compuesto que evita la sepsis (putrefaccin por desnaturalizacin de protenas). Son agentes antimicrobianos de baja toxicidad que se utilizan sobre los tejidos o tpicamente.

Desinfeccin. Proceso de destruccin de agentes infecciosos, que no corresponde a un proceso de esterilizacin (eliminacin de formas vegetativas de los microorganismos, pero no necesariamente sus estructuras de resistencia).

Agente antimicrobiano. Compuesto qumico que inhibe el crecimiento o elimina totalmente los microorganismos presentes. De acuerdo a su espectro de accin puede ser antibacteriano y/o antifngico. De acuerdo a su actividad o efecto sobre los microorganismos, pueden ser:

Esttico. Que inhibe el crecimiento, pero no elimina los microorganismos (Bacteriostticos, fungiestticos). Cida. Que elimina totalmente los microorganismos (Bactericida, fungicida).

Calor seco.
El calor seco produce desnaturalizacin de protenas, efectos txicos por desecacin de la clula alcanzando niveles elevados de solutos, procesos oxidativos irreversibles, fusin y desorganizacin de las membranas.

Ventajas:
No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, as como, de sustancias viscosas no voltiles. Desventajas: Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Calor hmedo.
El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (ARN, ADN, protenas, etc.) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto reacciones inversas podran daar a la clula por causar generacin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin protenas se estabilizan mediante puentes de hidrgeno intramoleculares de protenas. Estos efectos se que pueden ser reemplazadas y rotos deben principalmente a dos por el agua a altas temperaturas. razones (Tabla 2): El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que los materiales hmedos conducen el calor ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada durante la condensacin.

Autoclave
Ventajas: Rpido calentamiento y penetracin. Destruccin de formas vegetativas y esporas en corto tiempo. No deja residuos txicos. Hay un bajo deterioro del material expuesto. Es posible por este mtodo esterilizar materiales que no resisten el calor seco (material plstico).

Desventajas:
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua. Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

Radiaciones
Radiaciones Ultravioleta (UV). La luz ultravioleta presenta algunas limitaciones para su uso, a saber: no penetracin de vidrio, suciedad, papel, etc. Su efecto destructor se cumple cuando los rayos UV tienen contacto directo con los microorganismos. Se usa para reducir la poblacin microbiana del aire de los quirfanos, pabellones hospitalarios, laboratorios, servicios de alimentos y maquinaria etc. En microbiologa es usada en cmaras de flujo laminar, previo al procesamiento de muestras.

La radiacin UV ocasiona un dao letal y mutagnico, que depende de la longitud de onda, por la absorcin selectiva de longitudes de onda por parte de ciertas molculas.

Radiaciones ionizantes.
Como los rayos X y rayos , que producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se utilizan para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles), como jeringas descartables, sondas, guantes de ltex, suturas de nylon, agujas, bistures, catteres, prtesis, etc. No son utilizados para la esterilizacin de medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.

Filtracin.
En algunas ocasiones es necesario esterilizar soluciones como medios de cultivo lquidos, soluciones de sustancias sensibles al calor como azcares, aminocidos, antibiticos, sales y similares, sin someterlos a temperaturas de esterilizacin. Para esto se utiliza la tcnica de filtracin, que consiste en pasar las soluciones por filtros con poros de dimetros a escala de micras que retienen por tamao a los microorganismos. Este mtodo permite obtener productos solubles como toxinas, antgenos, antibiticos, etc.

ACTIVIDAD PRACTICA A TRABAJAR!!!