Ncleo celular

Dra. Mara Beatriz Ruiz Velazco

Facultad de Medicina - USMP

ncleo
Organela limitada por la envoltura nuclear. Se encuentra en todas las clulas eucariotas. Aprox 10% vol celular. Alberga casi todo el material gentico de la clula. Contiene:
cidos nuclicos (DNA y RNA) protenas nucleares (histonas y no histonas)

Centro de control.

Componentes estructurales

ncleo
Funciones: Lugar de duplicacin del DNA. Lugar de control gentico de las actividades celulares. Lugar donde se inicia el ensamblaje de los ribosomas a partir de RNA y protenas especficas.

Apoptosis

Replicacin y reparacin

Transcripcin Empalme

Envoltura nuclear, membrana externa se continua con RE

Lamina nuclear es una malla de protena filamentosa que reviste cara nuclear de membrana interna

Complejo de poro nuclear, penetra envoltura nuclear en puntos de fusin de m interna y m externa

Composicin:
Envoltura nuclear Lmina nuclear Matriz nuclear Cromosomas Cuerpos subnucleares:
Nucleolo

Organizacin del ncleo celular (mamfero)

Composicin:
Envoltura nuclear Lmina nuclear Matriz nuclear Cromosomas Cuerpos subnucleares:
Nucleolo Cuerpos de Cajal (CB) y gemas Dominios PIKA y PTF Cuerpos PML Manchas de empalme (splicing speckles) Manchas paralelas (paraspeckles) o espacios intercromatina

Organizacin del ncleo celular (mamfero)

Lanctt C et al. "Dynamic genome architecture in the nuclear space:regulation of gene expression in three dimensions". Nature Reviews Genetics (2007) :8; 2. 104-115 .

Envoltura nuclear
Membrana externa nuclear Membrana interna nuclear Espacio intermembrana (1050nm) Poros nucleares
-100nm dimetro total -9nm dimetro del canal -3 000 a 4 000 poros -Complejo de poro nuclear (NPC)

Estructura del complejo de poro nuclear (NCP)

Complejo molecular de simetra octogonal. 30 veces ms grande que ribosoma. Funcin: portero del ncleo media intercambio de molculas entre nucleoplasma y citoplasma.
-Iones y metabolitos pequeos difunden a travs del NCP. -Molculas con masa >40kDa requieren transporte activo (carioferinas).
Filamentos citoplsmicos

Anillo citoplsmico

Andamio

Canal central

Anillo nuclear

Canastilla nuclear

Intercambio de molculas a travs del complejo de poro nuclear

Intercambio de molculas a travs del complejo de poro nuclear Importacin de protenas:

protenas cargo contienen secuencia especfica de aa seal de localizacin nuclear (NLS). intervienen:
Ran (GDPGTP) Factor de transporte nuclear 2 (NTF2) Importina (se une a prot cargo) Importina (interacta con nucleoporinas-FG)

Exportacin de protenas, tRNAs y subunidades ribosomales:

contienen secuencia especfica de aa seal de exportacin nuclear (NES). Contienen NLS si ha de retornar al ncleo. Intervienen:
Ran (GDPGTP) Factor de transporte nuclear 2 (NTF2) Exportina 1 Exportina-t (exporta tRNAs)

IMPORTACIN A TRAVES DEL PORO NUCLEAR

4 3 5 9

8 6

EXPORTACIN A TRAVES DEL PORO NUCLEAR

7

4 5

Estructura del complejo de poro nuclear (NCP)

Funciones: Media el intercambio de molculas entre el nucleoplasma y el citoplasma. Participa en la regulacin de la arquitectura del genoma. Participa en la regulacin de la expresin gnica.

Raices M & D'Angelo M. Nuclear pore complex composition: a new regulator of tissue-specific and developmental functions. Nature Reviews Molecular Cell Biology 13, 687-699 (November 2012)

Heterocromatina perifrica es excluida desde el NCP En mamferos, la nucleoporina TPR se requiere para el establecimiento de las zonas de exclusin de heterocromatina asociadas al poro nuclear (+TPR).

NCP especializado en transporte nuclear y organizacin del genoma

Lamina nuclear
Malla protica delgada (2050nm). Cubre cara nuclear de MIN. Se relaciona con protenas integrales especficas de MIN y con cromatina. Indispensable en mantenimiento de integridad estructural de envoltura nuclear. Principales componentes:
-Lamina nuclear tipo A -Lamina nuclear tipo B

Lamina nuclear: Laminopatas

Enfermedades humanas asociadas con defectos en protenas de envoltura nuclear.
-Distrofia muscular de Emery-Dreifuss -Cardiomiopata dilatada -Lipodistrofia parcial familiar -Distrofia muscular cinturaextremidades -Charcot-Marie-Tooth tipo 2 -Displasia mandibulo-acral -Progeria

Mutacin ms comn en gen de lamina tipo A (normalmente,mayora de

cells adultas la expresan).

Organizacin de la envoltura nuclear

Protenas de la membrana interna nuclear: -Polipptidos asociados a lamina 1 y 2 (LAP1 y LAP2). -LBR -Sun1 -Sun2 Protenas reguladoras de genes: -HP1 -BAF Protenas de la membrana externa nuclear: - Nesprin
ONM: membrana externa nuclear, INM: membrana interna nuclear , NCP: complejo de poro nuclear, ER: retculo endoplasmico.

Stewart C et al. Blurring the boundary: the nuclear envelope extends its reach. Science (2007); 318:1408-1412.

Complejo LINC (unin de nucleoesqueleto con citoesqueleto)

Integra componentes nucleares, incluyendo dominios de cromatina, con estructuras de la superficie celular y extracelulares (en clulas de vertebrados). Formado por:
Protena nesprina (m
externa nuclear).

Protenas SUN (m
interna nuclear).

Stewart C et al. Blurring the boundary: the nuclear envelope extends its reach. Science (2007); 318:1408-1412.

Nucleolo
rea dedicada a la produccin de ribosomas. Se forma alrededor de repeticiones de DNA ribosomal (rDNA), que codifica RNA ribosomal. NO est rodeado por membrana.

Produccin de subunidades ribosomales

1

1. Transcripcin de rRNA precursor 2. Empaquetamiento con protenas ribosmicas citoplasmticas

3. Formacin de subunidades 40S y 60S

4. Salida de subunidades a travs de poros nucleares

5

5. Ensamblaje ribosoma maduro

Cromatina, cromosoma
Cromatina: complejo fibroso formado por DNA y protenas. (interfase) Cromosoma: cromatina altamente condensada. (divisin celular)

Cromatina condensada cerca de envoltura nuclear, se fija a lamina nuclear

Cromatina difusa

Cromatina
Complejo fibroso formado por DNA y protenas.

Territorio de los 24 cromosomas humanos en el ncleo celular en interfase

Cromatina
Eucromatina:
-DNA menos compacto -porcin ms activa del genoma (genes frecuentemente expresados).

Heterocromatina:
-DNA ms compacto. -contiene DNA infrecuentemente transcrito. -Tipos: -Constitutiva: en estado condensado en toda clula y en todo
momento (DNA silencioso).

-Facultativa: cromatina especficamente inactivada durante

ciertas fases de la vida del organismo (cromosoma X inactivo).

Cromosoma eucaritico
Cromosoma eucaritico = molcula nica DNA ms protenas asociadas. DNA extendido de un cromosoma = 3-4cm. Cada clula diploide tiene 46 cromosomas (2m de DNA aprox.) Cuerpo humano tiene 25 000 millones de kilmetros de DNA.

Cromosoma humano

Fibra de cromatina , constiituida por DNA y protenas

Cromosoma: cromatina condensada, estructura visible durante divisin celular.

Centrmero, regin de visible estrechamiento

Clasificacin de los cromosomas por la localizacin del centrmero:

Metacntrico: centrmero central. Submetacntrico: centrmero cerca del centro. Acrocntrico: centrmero cerca al extremo. Telocntrico: centrmero al final de las cromtides.

 En cromosomas no metacntricos: Brazo corto es denominado brazo p (petit). Brazo largo es denominado brazo q

El centrmero ocupa posiciones caractersticas en los cromosomas homlogos

Cariotipo humano: 23 pares de cromosomas (incluyendo cromosomas sexuales.

Estructura del cromosoma

Conjunto de DNA y protenas (cromatina = hebras teidas): DNA (cargada negativamente). Protenas histnicas y no histnicas.

Estructura del cromosoma

Histonas: Slo en eucariotas Ricas en aminocidos bsicos (lisina y arginina) cargadas positivamente. Se sintetizan en la fase S del ciclo celular.

Histonas: Responsables del plegamiento y empaquetamiento del DNA (nucleosoma). Intervienen en regulacin de genes. Tipos:
H1 (30 millones de molculas) H2A (60 millones de molculas) H2B H3 H4

 Nucleosoma:
146-150 pares de bases (bp) de DNA alrededor de octmero de histonas. Primer nivel de compactacin del genoma en eucariotas. DNA unido a nucleosoma es menos accesible a factores reguladores que DNA libre de nucleosoma. (Skipper M. Eucariotic genomes in complete control. Nat Rev Mol
Cell Bio 2006 (7):709.

150 pares de bases

50 pares de bases

H2A

H2B

H3

H4 H4

H3

H2B

H2A

H1

Octmero de histona

H1 H1 octmero octmero (80 pares de base por vuelta) H1

octmero octmero

Ensamblaje de nucleosomas
Paso 1
H4 H3 H3 H4

H3 H4

H4 H3

DNA

Paso 2 X H2A H2B H3 H4 H4 H3

H2A H2B

X DNA

Paso 3

H2A H2B

H3 H4 H4 H3

H2B H2A

DNA

Estructura del cromosoma

Protenas asociadas al DNA no histnicas: N1 Nucleoplasmina Protena x Protenas de esqueleto o armazn protico

armazn protico no histnico

Armazn protico no histnico

Solenoide

2do nivel de empaquetamiento

1er nivel de empaquetamiento

Empaquetamiento

HISTONA H1 SE UNE A REGIONES ESPECFICAS DEL NUCLEOSOMA

EMPAQUETAMIENTO DEL NUCLEOSOMA ES MEDIADO POR LA HISTONA H1

COLAS DE HISTONAS: extremos NH2 y el extremo COOH (slo H2A) intervienen en formacin de solenoide

Empaquetamiento del DNA en cromosoma mittico

Molcula de DNA se une a histonas formando gran nmero de nucleosomas.

Nucleosomas forman cuentas en la cuerda de DNA.

Grupos de nucleosomas se enrollan en vueltas cada vez ms grandes hasta fibras de comatina supercondensada y superenrollada

Las vueltas se unen para formar lazos.

Los lazos se enrollan mucho ms, formando un cromosoma

Ciclo celular
Profesora: Dra. Mara Beatriz Ruiz Velazco
Facultad de Medicina - USMP

Ciclo celular
Secuencia regular y repetitiva de crecimiento y divisin celular. Fases:
Interfase: proceso preparatorio
G1 S G2 G0

Divisin celular:
Mitosis: divisin del ncleo. Citocinesis: divisin del citoplasma.

Interfase

Durante la interfase: Duplica su DNA. Sintetiza histonas y otras protenas asoc a DNA. Produce reserva adecuada de organelas para 2 clulas hijas. Ensambla estructuras necesarias para divisin celular.

Interfase
G1:
Actividad bioqumica intensa. Clula aumenta de tamao. Aumento de protenas, lpidos y organelas. Centrosomas inician separacin y duplicacin

Interfase
G1:
Duracin variable, depende del tipo de clula. Algunas clulas ingresan a:

G0:
quiescente ? Ausencia de seales para mitosis Represin activa de genes necesarios para mitosis. Re-ingreso depende de seales internas y externas.

Interfase
S:
Replicacin de DNA. Sntesis de histonas y otras protenas asociadas a DNA.

Interfase
G2:
Preparativos finales para divisin celular. Inicia condensacin de cromosomas recin duplicados. Duplicacin completa de centrosomas. Inicio de ensamblaje de huso mittico

Divisin nuclear (cariocinesis) ocurre en mitosis. Divisin de citoplasma (citocinesis) ocurre al final de la fase M.

Ciclo celular de clula eucariota

Clulas que no se dividen usualmente quedan retenidas en fase G1

DNA es replicado durante la fase S (entre fases G1 y G2)

Regulacin del ciclo celular

Regulacin del ciclo celular

Influyen en crecimiento y divisin celular:
Falta de nutrientes. Cambios en T y pH. Contacto con clulas vecinas (inhibicin dependiente de la
densidad).

Hormonas Factores de crecimiento Interaccin clula-clula Interaccin clula matriz extracelular.

La clula decide si va a dividirse o no.

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular:

Punto de restriccin (punto R)

Punto de control en fase S Punto de control en la fase G2 Punto de control en la fase M

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de restriccin (punto R):
En fase G1 tarda A veces antes de punto R, pasan de G1 a G0 Pasado el punto R la clula est obligada a seguir el resto de las fases del ciclo y dividirse.

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de control en la fase S:
Asegura que duplicacin slo ocurra una vez por ciclo. Evala dao de DNA y presencia de fragmentos de Okasaki.

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de control en la fase G2:
Clula evala si est lista para entrar en mitosis.

Mecanismo de seguridad, slo entra en mitosis si ha duplicado correctamente su material gentico.

Evala dao de DNA.

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de control en la fase M:
Durante metafase.

detecta fallas en unin de fibras del huso al cinetocoro.

Regulacin del ciclo celular

Sistema de control de ciclo celular:
Ciclinas Kinasas dependientes de ciclina (Cdk) Complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C)

Pone en marcha el mecanismo de la mitosis Factor promotor de la fase M ciclina mittica

M
G2
Cdk

Control del ciclo celular

G1

ciclina D P La quinasa empieza a actuar Pone en marcha el mecanismo de replicacin del DNA

Regulacin del ciclo celular

Kinasas dependientes de ciclina (Cdk):
Activan otras protenas por fosforilacin. Se encuentran en niveles casi constantes durante el ciclo celular. En clulas eucariotas en todo el ciclo celular. Tipos:
Cdk de G1 (Cdk4, Cdk6) Cdk de Fase S (Cdk2) Cdk de Fase M (Cdk1)

Regulacin del ciclo celular

Ciclinas:
Protenas activadoras que se unen a quinasas y regulan su actividad. Nivel vara a lo largo del ciclo celular.

Tipos:
Ciclinas de G1 (ciclina D) Ciclinas de fase S (ciclinas E y A)

Ciclinas mitticas (ciclinas B y A).

Regulacin del ciclo celular

Ciclinas:
Ciclina mittica:
Se acumula gradualmente en fase G2. Se une a quinasa formando el complejo Cdk-ciclina (FPM). Fosforila protenas especficas e induce cambios estructurales que inducen mitosis:
Condensacin de cromosomas (fosforilacin H1). Desensamblado de la envoltura nuclear. Organizacin de los microtbulos en el huso mittico.

Regulacin del ciclo celular

Complejo promotor de anafase/ciclosoma (APC/C):
En ncleo de clulas en interfase y en todo el citoplasma durante divisin celular.
Degrada germinina (protena que protege DNA recin
sintetizado de re-replicacin).

Sin APC/C las clulas:

no podran separar sus cromtidas hermanas en anafase. no podran salir de la mitosis y dividirse en dos clulas hijas. No podran iniciar los pasos necesarios para la replicacin del DNA en la fase S.

Ciclinas y kinasas dependientes de ciclinas (CDK)

Segregacin de cromosomas durante la mitosis

Ciclinas y kinasas dependientes de ciclina en el ciclo celular

Seales mitognicas estimulan sntesis de ciclina D Supresores tumorales pueden bloquear actividad de ciclina D

Cdk1 inicia mitosis

Ciclina D, ciclina E, Cdk4 y Cdk2 fosforilan RB, inactivndola

Cdk2 estimula replicacin de DNA

Punto R debe ser pasado para que contine el ciclo celular

Regulacin del ciclo celular en neurona post mittica

Protenas que activan ciclo celular. Protenas que inhiben ciclo celular.

Gracias