Qumica Forense

Mg. Rinaldi, Diego S.

Delitos contra la integridad sexual

Aspecto legal
Delitos contra la Integridad Sexual (Cdigo Penal- Titulo III del Libro segundoLey 25.087 y modificatorias). Dentro de este grupo estn los siguientes delitos: abuso sexual simple (art. 119 1 prrafo) abuso sexual gravemente ultrajante (art. 119 2 prrafo) violacin -tambin llamado abuso sexual agravado por acceso carnal violento (art.119 3 prrafo) estupro (art. 120).

Delitos sexuales

Primer Objeto de estudio: LA VCTIMA, el acto delictivo se realiz sobre ella y slo sobre ella se puede probar sobre ella.

Determinacin de presencia de semen

De relevante importancia el informe mdico sobre la vctima, ya que la sola presencia de semen en la misma o en los objetos secuestrados en la causa no demuestra el delito, sino tan slo la realizacin del acto. As como la ausencia del indicio buscado no descarta la violencia, el abuso deshonesto o el acceso carnal, sino la falta de eyaculacin por parte del autor.

SE REQUIERE INMEDIATEZ ENTRE EL HECHO, LA DENUNCIA, Y LA REVISACIN MDICA DE LA VCTIMA

EN EL LABORATORIO

ANLISIS DE INTERS EN DELITOS SEXUALES:

Determinacin de la Presencia de Semen Manchas de Sangre Drogas de Abuso Estudios Genticos

TIPOS DE MUESTRAS :
Hisopados vaginales , anales y orales. Ropas, telas. Pelos, uas. Sangre. Hgado para estudio toxicolgico.

El objetivo principal del examen biolgico es detectar la presencia de semen en las muestras recogidas, como prueba de actividad sexual. El semen tiene dos fracciones: La porcin celular o esperma (5% del volumen), y la porcin lquida o plasma seminal (95% de volumen), el semen en conjunto es de aspecto lechoso, opalescente, ligeramente amarillo, posee un ph. de 7.27.3 y est compuesto por el plasma seminal y los espermatozoides que pueden ser separados por centrifugacin. El rango de conteo normal de espermatozoides est entre 20 millones/ml y 200 millones/ml. El volumen se considera normal cuando es entre 2 y 6 ml.

Plasma Seminal
BIOQUMICAS: Fructosa, ribosa, inositol, sorbitol, aa, aminas (colina, espermina y etanolamina)

ANTIGNICAS: Albmina, 2-3 alfaglobulinas, 2 betaglobulinas, 1 gammaglobulina. De los antgenos descriptos 4 son especficos.
ENZIMTICAS: Fibrinolisina, aminooxidasa, F.A.P, F. Alcalina, 5nucleotidasa. LPIDOS: Lecitinas y cidos grasos

MINERALES: Zn Y Ca

Recomendaciones para el anlisis

La persistencia de semen despus de una supuesta agresin sexual vara entre vctimas y esta influenciada por las actividades que realiza la vctima despus del hecho (ducha, higiene genital, otros). Evidentemente, constituye solo una evidencia en la investigacin de agresin sexual. El semen se puede detectar en muestras vaginales tomadas hasta aproximadamente cuatro das despus del coito; En la mayora de los casos, sin embargo, no se detecta en muestras tomadas ms all de las 48 horas despus del coito. La literatura refiere que se puede recuperar evidencia de semen hasta una semana despus En el recto y la boca el semen se mantiene durante perodos mucho ms cortos de tiempo. Por lo general, no se encuentra en hisopados anales despus de 24 horas del supuesto incidente, pero las muestras se analizan hasta 72 horas despus. En las muestras de cavidad oral se raramente despus de las 6 horas del supuesto incidente. Sin embargo, se recomienda tomar hisopados de la cavidad oral hasta las 24 horas posteriores a la supuesta agresin sexual con sexo oral.

Sitios y tiempo lmite para toma de muestra en la investigacin de presencia de Semen

Sitio
Vagina Recto Boca Piel

Tiempo Limite
5 das 2 das 1 da Puede persistir hasta el lavado

Manchas secas en ropa

Persiste hasta lavado

TOMA DE MUESTRA:
Sobre la vctima :
EXCLUSIVAMENTE POR UN MDICO.

1. Genitales Femeninos
Se introduce un espculo vaginal apropiado en los dos tercios inferiores de la vagina, se abre el espculo y con dos hisopos secos se toman muestras del tercio superior de la vagina, incluyendo el fondo de saco posterior, los que se rotulan como Hisopado vaginal superior. Se debe evitar tocar el espculo con el hisopo con el cual se esta tomando la muestra. Cuando sea relevante, debe tomarse tambin, muestras del orificio cervical externo,Hisopado Orificio cervical externo. Adicionalmente, puede tomarse una muestra, instilando de 2 a 10ml de suero fisiolgico en la cavidad vaginal, y luego aspirando el contenido vaginal, a esta muestra se etiqueta como lavado vaginal. Cuando es imposible, la toma de muestra con espculo (prepberes, lesiones genitales,etc.), se realizar la toma de muestra insertando en la cavidad vaginal, secuencialmente, dos hisopos secos, teniendo cuidado en no tocar con el hisopo la regin vulvar, a esta muestra se etiqueta como hisopado vaginal.

2. Cavidad oral
Se recomienda la obtencin de las muestras dentro de las 24 (veinticuatro) primeras horas posteriores al suceso sexual. Sin embargo se recomienda seguir la siguiente secuencia: Obtener 10ml de saliva como primera muestra. En seguida, se toma muestras con dos hisopos, aplicados de manera secuencial, se frotan sobre los mrgenes interno y externo de las encas, sobre el paladar duro, el paladarblando, en el interior de las mejillas y labios, y sobre ambas superficies de la lengua. Debe ser rotulado como hisopado bucal. Finalmente la cavidad oral se enjuaga con 10ml de agua destilada. Debe ser rotulado como lavado bucal.

3. Regin Anal
Deben obtenerse dos muestras iniciales de la zona perianal, si la piel perianal est hmeda, la mancha debe ser recogida con gasas estriles o hisopos secos. Sino hay manchas o la mancha est seca, debe recogerse muestras utilizando la tcnica del doble hisopado, esta muestra se rotula como hisopado perianal ohisopado anal externo. Luego se toman dos muestras del canal anal, se utiliza dos hisopos de manera secuencial, primero se pasa un hisopo hmedo, y luego un hisopo seco, los hisopos se introducen unos 3.0 cm dentro del canal anal. Esta muestra se rotulacomo hisopado anal.

Extendido
Una vez realizado el hisopado de la regin corporal correspondiente, se proceder al extendido del mismo en una lmina porta objeto estril, para lo cual primero deber etiquetar la lmina, posteriormente tomar el hisopo y deslizar el algodn del del mismo con movimientos rotatorios (girarlo) sobre la lamina; una lmina por cada hisopo. Luego, dejar secar ambos a temperatura ambiente, y colocarlos en su respectivo sobre de papel para remitir al laboratorio.

SE DEBEN REMITIR AL LABORATORIO COMO MNIMO DOS HISOPADOS DE CADA ZONA Y UN EXTENDIDO. UNO DE LOS HISOPADOS SE RESERVA PARA ESTUDIOS GENTICOS

 Muestras sobre soportes absorbentes: prendas interiores, toallitas higinicas, sbanas, toallas, etc. Deben remitirse enteros al laboratorio ,donde se realizar el levantamiento en forma adecuada. Las manchas hmedas deben ser secadas al aire antes de su embalaje.

 Muestras sobre soportes no absorbentes: adquiere forma de pelcula o escamas brillosas. Para distinguirlas se usa Luz UV. Cuando se encuentra sobre piso u otras artefactos se debe levantar con gasas, colocndolas sobre las manchas, y dejando gotear solucin fisiolgica presionndola con una pinza. Luego colocarla en un frasquito para su remisin. Si la mancha es seca se puede raspar con bistur y colocada en un frasco.

Envo de muestras
TODO DEBE ESTAR: PERFECTAMENTE ROTULADO CERRADO PRECINTADO O LACRADO Y EL SOBRE O CONSERVADORA DEBE CONTENER LAS FIRMAS DE QUIEN/ES ENVIA/N, QUIEN TRASLADA, y LA HORA DE SALIDA DE LA ESTAFETA Hisopos secos en tubos rotulados. Dentro de sobre de papel Muestras en soportes absorbentes secas en sobre de papel. Muestras tomadas en de soportes no absorbentes en frasco o sobre de papel segn corresponda. Dividir segn en que estudio se requiere: presencia de semen y/o estudio gentico

Levantamiento de muestras en el laboratorio:

SOBRE LAS MANCHAS EN TELAS : Visualizacin bajo luz de Wood (zona de fluorescencia caracterstica) Palpado con guantes de ltex estriles. Delimitacin con marcador - Corte de mancha en dos mitades, guardndose una de las mitades para posteriores estudios genticos.

Pretratamiento de las muestras

El hisopo o una fraccin de la supuesta mancha de semen es macerada en unos ml de solucin fisiolgica y luego de centrifugado, con el lquido sobrenadante se determina FAP, SPA Y COMPONENTES DEL PLASMA SEMINAL y el culot se extiende sobre porta y cubre para mirar la presencia de ESPERMATOZOIDES por microscopia ptica ( en caso que no se haya remitido el extendido correspondiente)

Mtodologa de anlisis
El culot del tubo se procesar para microscopa ptica:
Con tincin (Ej: May-Grunwald) Fresco - directo

Al lquido del macerado:

Electroforesis a Ph=3,9: separamos colina y espermina Se revelan con Dragendorff en CCD Pruebas enzimticas colorimtricas: FAP Pruebas serolgicas: PSA

Estas pruebas no tienen sentido si ya se encontraron espermatozoides intactos por microscopa

Observacin por MO
Se realiza por observacin microscpica directa o con una coloracin adecuada. La presencia de un espermatozoide completo es la prueba irrefutable de semen. Es muy comn encontrar en las muestras fragmentos de espermatozoides, ya sean cabeza o cola, pero debido a la contaminacin con la que generalmente se encuentran estos restos, muchas veces estos fragmentos pueden ser confundidos con esporas y bacterias. Hay laboratorios que establecen un VALOR DE CORTE PARA INFORMAR POSITIVO este anlisis, lo cual es muy complicado ya que se trabaja con una muestra de tamao totalmente arbitrario, y la sola presencia de la enzima buscada es reveladora de su origen.

No encontrar espermatozoides enteros no significa AUSENCIA DE SEMEN, puesto que existen casos de oligospermias (ej: en alcoholistas crnicos) o bien puede tratarse de manchas viejas o expuestas a condiciones extremas donde no queden estas clulas, pero si puede determinarse la PRESENCIA DE SEMEN an cuando no se observen espermatozoides, por las reacciones antignicas y de FAP.

Fosfatasa cida Prosttica

Producida por la prstata, tiene una concentracin 400 veces mayor que en otros fluidos corporales. La FAP cataliza en medio cido la hidrlisis del alfa naftil fosfato. El alfa naftol producido, reacciona con una sal de diazonio formando un cromgeno prpura. Tiene una sensibilidad de 67%, sin embargo a las 48h su sensibilidad disminuye a 40%, puesto que a partir de las 14 horas desaparece progresivamente. Constituye una prueba presuntiva.

Metodologa
Visualizacin directa o espectrofotometra visible Se siembra en paralelo con testigos: positivo y negativo Se trabaja con el sobrenadante de la maceracin de los hisopados. Se prepara una solucin de Fast Blue B (reactivo de color) en el da. Se debe tener cido tartrico diluido. El sustrato es alfa-naftil fosfato de sodio. Se divide en reactivo A y reactivo B. A uno se le agrega reactivo color y sustrato y a la otra mitad lo mismo ms el agregado de cido tartrico.

Interpretacin de resultados
POSITIVO: SI SE COLOREA EL QUE
NO TIENE EL C.TARTRICO Y NO SE COLOREA EL DEL C.TARTRICO

NEGATIVO: SI NINGUNO DE LOS 2

SE COLOREAN

DUDOSO (O INVLIDO): SI
DA COLOR EN AMBOS POCILLOS.

LA FAP INHIBE SU ACTIVIDAD CON CIDO TARTRICO

Antgeno Prosttico Especfico

Glicoprotena producida por las clulas epiteliales prostticas. Slo esta presente en muy bajas concentraciones en algunos fluidos corporales como: orina, suero, leche materna y lquido amnitico Se utiliza como marcador para semen a travs de inmunoensayo que ofrece un mtodo alternativo rpido y fiable de deteccin de PSA. Tiene una sensibilidad de 99.4%, y a las 48h su sensibilidad disminuye a 96%, puesto que a partir de las 27 horas desaparece progresivamente. Es una prueba confirmatoria. Kit Comerciales

Otras tcnicas
Estudios de componentes del plasma seminal (espermina, colina, otros) por cromatografa en capa delgada . Semenogelina I y II: Son los principales componentes proteicos en el semen y se producen principalmente en las vesculas seminales. Representan la consistencia gelatinosa del semen recin eyaculado debido a interacciones a travs de puentes disulfuro. La presencia de Semenogelina ha sido demostrada en msculo esqueltico, colon, riones, y la retina, as como en el carcinoma de pulmn. Su concentracin es 10 veces ms que el PSA (19 mg /mL 1.92 mg/dL). La identificacin de Semenogelina humana mediante la prueba de tira reactiva esta disponibles en la forma de la RSIDsemen test, con resultado en 10 minutos, con una sensibilidad y especificidad del 100% con resultados positivos hasta las 72 horas de hecho. Es una prueba confirmatoria.

Antgenos del sistema ABO

Un alto porcentaje de individuos presenta antgenos del sistema ABO en otros lquidos biolgicos adems de la sangre, son denominados secretores. Se diferencian del material antignico de los GR, porque no se hallan unidos en la membrana, son solubles en agua y son glicoprotenas. Este anlisis en viable cuando vctima y victimario poseen diferente grupo, vctima preferentemente no secretora y agresor secretor. Se aconseja buscar los antgenos ABO en saliva previamente, tomando muestra de la mucosa bucal. Si la vctima es AB secretora, no ser til realizar el anlisis del semen extrado de la misma. La determinacin se realiza por el mtodo absorcinelucin.

Utilidad como herramienta vinculante.

Determinacin en muestras biolgicas

Este examen se realizar en todos los casos que se encuentre signologa de un hecho reciente y a solicitud de la autoridad fiscal / judicial correspondiente, el cual contribuir a identificar al probable agresor. Para el estudio, se utilizarn muestras biolgicas obtenidas durante el examen, mediante el hisopado de cavidad vaginal, anal u oral, as como de otras regiones del cuerpo en donde se sospeche haya restos de las mismas; adems se puede tomar la muestra de la ropa que se solicit a (al) la agraviada (o).

Determinacin en ropas
Las prendas de vestir con manchas sospechosas (sangre fresca, semen u otros) debe procurarse que sequen perfectamente a la temperatura del ambiente (evitar la humedad y la contaminacin microbiana), antes de empacarlas. Colocarla en un sobre, de preferencia que sea ms grande que la prenda para evitar la posibilidad de daar los elementos que deben servir de prueba. Las prendas de vestir, del presunto agresor y/o de la presunta vctima, deben ser empaquetadas en forma separada. Rotular el sobre especificando el tipo de muestra, describiendo las caractersticas de la prenda enviada.

Toma de muestra en casos de agresin sexual

Dos tomas bucales mediante hisopos, pasando por debajo de la lengua, encas y dientes. Bsqueda de manchas de semen, saliva o mordeduras. Dos tomas cervicales, dos tomas vaginales, y una de genitales externos, con hisopos estriles limpiando cuello uterino, cavidad vaginal y la regin vulvar. Lavado vagina, empleando 10 ml de suero fisiolgico que se recoger en tubo de plstico. Dos tomas anales, con hisopos estriles limpiando el conducto ano rectal y el margen anal. Ropas que portaba la vctima.

Empaquetado y conservacin de las muestras

Muestras secas enviar sin refrigeracin. Muestras hmedas: Mantener refrigerada. Identificacin de la muestra: Tipo, Procedencia y /o pertenencia, N de referencia. Custodia: Identificacin y firma de la persona que recoge la muestra, fecha y hora. Empaquetado: emplear cajas de cartn o sobre de papel, cada muestra en recipiente precintado.

La prueba del ADN en la Justicia

A partir del descubrimiento de las zonas variables en el ADN (microsatlites), y la posibilidad de emplearlas para las identificacin humana, la certeza de los estudios de paternidad y de identificacin de criminales se increment a ms del 99,99%. Cada fragmento variable de ADN se denomina marcador y los mtodos actuales incluyen 15 marcadores variables ubicados en cromosomas no sexuales y otros 12 a 17 ubicados en el cromosoma masculino. En los casos de identificacin el resultado de todos los marcadores debe coincidir exactamente para que dos muestras, tales como una mancha en la escena del crimen y un hisopado bucal de un imputado, correspondan al mismo individuo. Este conjunto de resultados numricos obtenidos para un individuo o para una muestra forense se denomina patrn gentico y se detalla en el Informe pericial.

 La nica situacin compleja, y que genera controversias, es aquella en que se observan mezclas de fludos biolgicos correspondientes a ms de dos individuos.

-ASPECTOS Y TCNICAS DE EVALUACIN MDICO LEGALES EN MENORES / VCTIMAS DE DCLSExmenes Complementarios de Laboratorio y Uso de la Tecnologa Forense: Lmpara de Wood, Tonmetro, Colposcopio, Frontoluz, Registro fotogrfico y/o videoInstituto de Medicina Legal- Repblica de Per. -MANUAL DE QUIMICA FORENSE- Caro Patricia M. - LOS ANALISIS DE ADN EN LA JUSTICIA_ Gustavo A. Penacino