INTRODUCCIN La hemoglobina se halla en el interior de los glbulos rojos,

salvo en determinadas patologas en que puede aparecer hemoglobina en plasma (hemoglobinemia), por ej. infecciones graves, ciertas intoxicaciones, etc. Generalmente un aumento de los valores de hemoglobina por encima de los normales es tan solo aparente. Suele ser debido a un aumento del nmero de hemates, por ejemplo en la adaptacin a un cambio de altitud, o bien en los casos en que la sangre sufre una concentracin por prdida de lquido plasmtico (por ejemplo, al sufrir el clera). Un descenso en los valores de hemoglobina por debajo de los normales es, sin embargo, muy comn y un sntoma caracterstico de las anemias, hemorragias repetidas y leucemia.

FUNDAMENTO
Consiste en hacer reaccionar la sangre con un reactivo

que contiene cianuro y ferrocianuro potsico (reactivo de Drabkins), que oxida la hemoglobina a metahemoglobina la cual a su vez pasa a cianometahemoglobina. La intensidad de color de este compuesto se mide fotocolorimtricamente. Los resultados se llevan a una curva estndar realizada con soluciones de cianometahemoglobina comercial, de donde se extrapolan las concentraciones de hemoglobina de las muestras problema.

PROCEDIMEINTO
1. Desinfectar la yema del dedo con alcohol, secndola

posteriormente con algodn. Utilizar siempre guantes y lancetas estriles.

PROCEDIMIENTO
2. Punzar la yema del dedo con la lanceta y presionar el

mismo para que salga sangre.

PROCEDIMIENTO
3.

Se obtiene la sangre por puncin capilar, de la que se toman directamente 0,02 ml con una pipeta de hemoglobina.

PROCEDIMIENTO
4. Se llevan los 20 l de sangre a un tubo de ensayo que

contiene 5ml de reactivo Drabkins. Agitar por inversin varias veces y dejarlo reposar durante 10 minutos.

PROCEDIMIENTO
5. Ajustar el espectrofotometro a 540 nm, calibrar con el

blanco llevando a cero la absorbancia, y la tramitancia a 100 presionar MODE. Y saldra 1.999 en la pantalla.

 7.- Posteriormente ajustando el 100 por ciento de

transmisin con otro tubo de ensayo que solo contenga 5ml de reactivo Drabkins (tubo de la derecha de la foto adjunta)..

 Construccin de la curva a estndar.-

De un estndar comercial de cianometahemoglobina (que contiene 20g/100ml) tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml y ponerlos respectivamente en 5 tubos de ensayo. Aadir a cada tubo reactivo de Drabkins hasta completar un volumen total de 5ml. Los tubos estndar as preparados representan 4, 8, 12, 16 y 20g de hemoglobina/100ml de sangre respectivamente. Se leen a 540 nm frente a un tubo que solo contenga reactivo Drabkins. Se construye la curva estndar como se indica en la pgina siguiente. Esta curva nos servir mientras estamos utilizando los mismos reactivos.