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Crick 1970
Retrotranscriptasa
3
Hebra Hebramolde molde Transcripcin Transcripcin
8.1.Traduccin Traduccin
La replicacin es un proceso previo a la divisin celular. Si una clula se va a dividir NECESITA replicar el ADN
La replicacin consiste en la formacin de nuevas cadenas de ADN a partir de desoxirribonucletidos y utilizando la informacin existente en una molcula de ADN vieja. Estas nuevas cadenas se van a repartir de manera equitativa entre cada una de las dos clulas hijas formadas en el proceso de divisin celular
La sntesis se realiza al abrirse la doble hlice y permitir la formacin de la cadena complementaria, al incorporarse los nucletidos correspondientes A-T, G-C
Reglas de Chargaff
3 TEORIAS: a) Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva, copia de la una original. En cada una de las molculas hijas se conserva de b) Dispersora, o dispersante. Las las cadenas originales, y por eso se dice que la cadenas hijas constan de replicacin del DNA es semi-conservadora fragmentos . de la cadena antigua fragmentos de la El experimento de M. Meselson y F. Stahl y(1958 ) nueva. demuestra que la replicacin es semiconservativa c) Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las molculas hijas se conserva una de las cadenas originales.
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayora de los casos, es decir, a partir de un punto se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos, que avanza en direccin a la regin de DNA no duplicado dejando atrs los dos moldes de DNA de cadena simple donde se est produciendo la replicacin.
Este problema siempre lo resolvieron los cientficos japoneses La replicacin se produce en sentido 5' 3',Reiji siendo el extremo 3'-OH Por ello, una de las cadenas debera ser sintetizada en Okazaki y Tsuneko Okazaki en la dcada de 1960, al descubrir que libre el punto a partir del cual se produce la elongacin del DNA. Esto plantea direccin 3' 5'. una de las nuevas cadenas de ADN se sintetiza en forma de trozos un problema, y es que las cadenas tienen que crecer simultneamente a cortos que, en su honor, se denominan fragmentos de Okazaki. pesar de que son antiparalelas, es decir, que cada cadena tiene el extremo 5' enfrentado con el extremo 3' de la otra cadena.
1) Existen de 500 a 60000 replicaciones en comparacin con uno en E. coli. 2) La replicacin es mas lenta (50 100 pb/seg en comparacin a 7501000 pb/seg) debido a las protenas relacionadas con el DNA y a las estructura de la cromatina.
3) Existen al menos 6 DNA polimerasas de los cuales algunos carecen de actividad e exonucleasa 3- 5.
4) Se requieren la actividad de telomerazas para que no se acorten los extremos en cada replicacin. 5) En el caso de los eucariotas, existen mltiples orgenes de replicacin (de cientos a miles) para que el proceso de sntesis pueda realizarse en un tiempo razonable.
RPA
RNAasas Ligasas
Localizacin Nuclear
Nuclear
Mitocondrial
Nuclear
Nuclear
Nuclear
Funcin
Reparacin de ADN
Exonucleasa 35
NO
NO
SI
SI
No desenrollan por s misma las dobles hlices, si no que resuelve el problema topolgico liberando la tensin torsional .
Topoisomerasa II:
Adems de participar en la replicacin; estas enzimas participan en la reparacin y recombinacin del DNA. Asimismo interacciona con las 3 RNA polimerasa de eucariotas.
Son las enzimas que promueven el desenrrollamiento progresivo del DNA dplex.
1) INICIACIN
2) ELONGACIN
3) TERMINACIN
La helicasa rompe los puentes de hidrgeno de la doble hlice permitiendo el avance de la horquilla de replicacin. La topoisomerasa impide que el DNA se enrede debido al super-enrollamiento producido por la separacin de la doble hlice. Las protenas SSB se unen la hebra discontinua de DNA, impidiendo que sta se una consigo misma. La DNA polimerasa sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra adelantada y de forma discontinua en la hebra rezagada. La RNA primasa sintetiza el cebador de RNA necesario para la sntesis de la cadena complementaria a la cadena rezagada. La DNA ligasa une los fragmentos de Okazaki.
- Estabilizacin parcial de esas cadenas como cadenas sencillas de ADN (Protenas SSB).
- Se forma el Complejo de iniciacin: Comienza la sntesis del ARN cebador tanto en la cadena retardada como en la cadena conductora
En el siguiente paso, la holoenzima DNA Pol III cataliza la sntesis de las nuevas cadenas aadiendo nucletidos sobre el molde. Esta sntesis se da bidireccionalmente desde cada origen, con dos horquillas de replicacin que avanzan en sentido opuesto. Cuando el avance de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando dos burbujas se tocan, se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha quedado replicado.
Puesto que la holoenzima ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es necesario que una RNA primasa catalice la formacin de un fragmento corto especfico de RNA llamado cebador, que determinar el punto por donde la DNA polimerasa comienza a aadir nucletidos. Pero debido a la unidireccionalidad de la actividad polimerasa de la DNA Pol III, que slo es capaz de sintetizar en sentido 5 3', la replicacin slo puede ser continua en la hebra adelantada; en la hebra rezagada es discontinua, dando lugar a los fragmentos de Okazaki.
Cuando se mira solamente una de las horquillas de replicacin, una de las hlices se sintetiza de forma continua, la hlice conductora (tambin llamada hlice lder), mientras que la otra hlice se sintetiza de manera discontinua, hlice retardada (tambin llamada hlice retrasada), a base de fragmentos cortos o fragmentos de OKAZAKI. Como una hlice se sintetiza de forma continua y la otra lo hace de forma discontinua, se dice que la replicacin es semidiscontinua
REPLICACIN ADN
2) ELONGACIN
2. REPLICACIN ADN
REPLICACIN ADN
3) TERMINACIN
- La ADN Polimerasa I degrada los cebadores y los reemplaza por ADN complementario. - La ADN ligasa une todos los fragmentos de ADN de Okazaki.
Muy similar a lo que ocurre en procariotas. Las histonas antiguas se fusionan con la hebra conductora Gran nmero de replicones u horquillas. Ms lento (10 veces) por la existencia de histonas. Fragmentos de Okazaki ms pequeos. Ocurre durante la interfase en el periodo o fase S del ciclo celular. Ocurre siempre en el interior del ncleo.
Embrin fsil
Promueve el desenrrollamiento intensivo del origen de replicacin. Estimula la actividad del complejo polimerasa a primasa necesario para la sntesis de la DNA polimerasa d dependiente del factor de replicacin C y del PCNA.
Factor de Replicacin C.
Reclutamiento de polimerasas replicativas para crear horquillas de replicacin. 5 subunidades: p140,p40, p38, p37 y p36. ATPasa dependiente DNA, estimulada por PCNA Hidrlisis para unin estable de PCNA al DNA. Coloca al complejo trimrico en forma de anillo de PCNA en la unin cebador-molde. Ancla de la abrazadera (loading clamp). Prerrequisito para union de DNA pol .
p140
p38
DNA polimerasa y .
p125 y p50; subunidad cataltica para la polimerasa y edicin (actividad exonucleasa 3-5). DNA ligasa reprime la accin de DNA pol y activa a la DNA pol.
RNAasa H
Actividad exonucleasa 5-3 de los fragmentos de Okazaki. Remueve el cebador del 5. Protenas RNA-DNA, PCNA y DNA2 helicasa.
LIG1, LIG2 y LIG4 I replicacin II deriva de la III III : forma complejos con XRCC1 (reparacin en roturas de cadena sencilla); : clulas meiticas masculinas (recombinacin meitica) IV reparacin en roturas de doble cadena
RPA
Complejo polimerasa /primasa sntesis del cebador de RNA-DNA (30 nt) RFC desplaza el complejo y promueve la unin de PCNA Unin de la polimerasa la replicacin de la cadena lder es procesiva y continua por 5-10 kb; para la rezagada, la sntesis contina hasta el siguiente fragmento de Okazaki
Las horquillas de replicacin avanzan sin algn impedimento, excepto cuando se encuentra una regin que est en transcripcin La horquilla alcanza el extremo de la molcula o se encuentra una segunda horquilla de replicacin
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