Proteccin ejercida por AANO2 en un modelo de disfuncin mitocondrial mediado por Angiotensina-II

Lic. Mariana Di Domnico. Turores:Dr. Andrs Trostchansky Dra. Adriana Cassina Dr. Jos Boggia

Sistema Renina- Angiotensina

El sistema Renina-Angiotensina juega un rol fundamental a nivel de la fisiopatologa de la hipertensin arterial. Regula la presin sangunea, la ingesta y la reabsorcin de sodio y la excrecin de potasio. Las alteraciones de estos mecanismos son generadores de estados hipertensivos.

La Angiotensina-II, bajo condiciones patolgicas, tiene un rol proinflamatorio que contribuye al deterioro progresivo de la funcin renal.

La activacin del receptor AT1 para Angiotensina-II, es capaz de mediar la produccin intracelular de radicales libres promoviendo la disfuncin mitocondrial.

Fuentes de radicales libres -Isoformas de la NOS

-NADP(H) oxidasas -otras enzimas (COX, Xantina Oxidasa). -Infiltracin inflamatoria
Modificado de Doughan et al.,2008

cido Nitroaraquidnico

Datos preliminares de nuestro grupo muestran que mitocondrias aisladas de ratas tratadas con Ang-II e inyectadas con AANO2 muestran una preservacin de la funcin mitocondrial (Boggia, 2008). El AANO2 previene el deterioro de la disfuncin mitocondrial en clulas tubulares HK-2 tratadas con Ang-II (Boggia, 2008). El AANO2 disminuye tambin el aumento de la enzima NOS inducida por Ang-II tanto en homogeneizados renales como en cultivo de clulas tubulares (Boggia, 2008).

Objetivos
El objetivo principal de este proyecto consiste en:
Determinar en un modelo celular la capacidad del AANO2 de modular la funcin mitocondrial frente a

los efectos nitrooxidativos ejercidos por la

Angiotensina-II.

Objetivos
Dentro de los objetivos especficos del proyecto nos planteamos:
Puesta a punto del modelo de injuria en clulas de epitelio renal, analizando formacin de especies reactivas del oxgeno y nitrgeno, nitracin y oxidacin proteica.
Evaluar el potencial de inhibicin ejercido por AANO2 sobre las enzimas COX y NAD(P)H oxidasa en nuestro modelo celular.

Evaluar el rol de la mitocondria sobre el desarrollo del dao en el modelo celular evaluando consumo de oxgeno mitocondrial e ndices respiratorios, actividad de enzimas pertenecientes a la cadena respirator (succinato deshidrogenasa, ATPasa) y estado redox de la mitocondria. Analizar el rol modulador del AANO2 en el modelo de injuria inducido por Ang-II estudiando el mecanismo de accin involucrado: anlisis de la carga energtica, cambios en el potencial de membrana, apoptosis, comparacin de los efectos de nitrolpidos con diferente largo de cadena as como con otras drogas utilizadas en la literatura para el modelo de Ang-II.

Diseo experimental para clulas expuestas a angiotensina-II y AANO2

Antecedentes

La evaluacin de la produccin celular de oxidantes en cultivos celulares con sonda DHE, muestra un aumento en la emisin de fluorescencia tras una exposicin a Ang-II (10-6 M) de 3 hs. Este resultado sugiere un incremento en la produccin de oxidantes celulares estimulado por la Ang-II, probablemente superxido.

Antecedentes
El anlisis del WB de lisado de clulas tubulares en cultivo, revelado con anticuerpo anti 3-nitrotirosina muestra un aumento de la nitracin en los pesos moleculares mayores a 36 kDa en los grupos expuestos a concentraciones crecientes de Angiotensina-II.

Antecedentes
El Radio de Control Respiratorio (RCR) es un parmetro utilizado frecuentemente para valorar la funcin mitocondrial. El RCR es una medida de cuanto esta acoplado el transporte de electrones a la sntesis de ATP.

RCR = FCCP-AA Oligo-AA

Antecedentes

Datos preliminares de nuestro grupo muestran que clulas HK-2 tratadas 30 minutos con AANO2 y posteriormente 2 hs con Ang-II muestran una preservacin de la funcin mitocondrial.

En que estamos.
Se puso a punto el modelo de injuria celular inducido por Angiotensina-II. Comenzamos a evaluar el estado de la mitocondria evaluando el consumo de oxgeno mitocondrial e ndices respiratorios en este modelo. Se est analizando la nitracin de protenas celulares mediante la tcnica de Western Blot.

Muchas gracias!!