TECNICAS INMUNOHEMATOLOGICAS

Estudia reacciones inmunolgicas

Antgenos de la membrana de clulas sanguneas

Banco de sangre: tipificar y evaluar la compatibilidad

GRUPOS SANGUINEOS
Eritrocitos: molculas antignicas cerca de 700. Se encuentran en todas las clulas excepto del sistema nervioso y en forma soluble en suero, saliva y orina. Antgenos y anticuerpos: grupos sanguneos, Se conocen 25 sistemas de estos grupos.

 Los antgenos son: glicoprotenas o glucolpidos. Disposicin del azcar (terminal ) especifica la identidad del antgeno. Los anticuerpos de los antgenos : IgG e IgM (IgA) Aloanticuerpos: reaccionan con antgeno ajeno no presente en los eritrocitos propios. Autoanticuerpos Aloanticuerpos naturales: estmulo antignico.

SISTEMA ABO
Landsteiner. Antgenos: A y B Grupos: A, B, AB y O Gen: produccin glicosil transferasa : Ngalactosaminil transferasa y D- galactosil transferasa Los anticuerpos se forman de manera natural en personas inmunocompetentes. Tambin por exposicin a eritrocitos ajenos.
FORMACION DE LOS ANTIGENOS ABO

SISTEMAS RHESUS
Compuesto por 40 antgenos diferentes: D, C, E, c y e). De cada progenitor se heredan 3 genes situados muy prximos. Los mas comunes: D y d, C y c y E y e). La presencia o ausencia de D : Rh + o Rh No existen anticuerpos naturales. Los anti Rh surgen por inmunizacin de las personas Rh negativas: por inyeccin o por el parto.

ESPECIMENES
Eritrocitos: se obtienen de sangre (antic. Oxalato o citrato).

Se usan directamente o se suspende al 3-5% en suero salino o albumina.

Suero: 24 hrs. Antes y se almacena a 4 C.

REACCIONES DE AGLUTINACION
Aglutinacin
Anticuerpo + eritrocitos

Eritrocitos carga negativa ( a sialico) se rodean de carga +

Factores que favorecen

Potencial ionico del medio. Presencia de albumina. Tratamiento enzimtico de los eritrocitos Temperatura. Densidad del antig, agrupacin y movilidad.

Forma
Placa Tubo

 Prueba: en medio salino ( temperatura ambiente) o albuminoso (temp. 37C). Concentracin de albumina 20 al 30 %.

TIPIFICACION DEL GRUPO ABO

Pruebas directas o hemticas

Eritrocitos vs antisueros o anticuerpos monoclonales

Inversas o sricas
Suero vs eritrocitos del grupo A, B y O.

Mtodos tradicionales
Pruebas directas: tubo o placa PLACA Reactivos: Anti A. Anti B. Eritrocitos en suspensin 3-5% en suero salino. Observar la aglutinacion. Negativo para anti A y anti B prueba adicional con anti AB.

 TUBO: Gotas de anti A y anti b. Suspensin de eritrocitos 5%. Centrifuga 1000 rpm x 2 min. Presencia de aglutinacin y hemolisis. Pruebas inversas

METODOS EN GEL Y MICROPLACA

Sistemas de filtracin bien en gel o en esferas de vidrio. Capacidad del gel de retener eritrocitos aglutinados y permitir el paso de los no aglutinados. Columnas con anticuerpo monoclonal especifico. Prueba directa: suspensin de eritrocitos al 0.8%. Centrifugar entre 5 a 10 min. Si los eritrocitos atraviesan la prueba es neg.

 Tcnica en microplaca: Microplacas de 96 pocillos con un volumen 200 a 300 uL en 8 filas horizontales y 12 verticales. Lectura visual y lectores automticos.

TIPIFICACION DEL GRUPO RH

Antgeno D: temperatura ambiente utilizando una Tipos de antisueros: Suero gota de una suspensin de IgG eritrocitos al 3 5% y gota de Anti D Antisueros salinos reactivos preparados a partir de Placa o Tubo anticuerpos IgM humanos. Mtodo del gel o esferas de vidrio.

PRUEBAS ANTIGLOBULINA
PRUEBA DE COOMBS
Anticuerpos contra la Igs actan como puentes que inducen la aglutinacin de eritrocitos sensibilizados con inmunoglobulinas o complemento. Suero antiglobulina humana policlonal y poliespecifico que producen animales hiperinmunizados con Ig o complemento purificados para producir IgG de gran avidez y concentracin.

TIPOS
PRUEBAS DIRECTAS: detectan los anticuerpos o componentes del complemento que in vivo se han unido a los eritrocitos. PRUEBAS INDIRECTAS Detectar reaccin in vitro de los anticuerpos o componentes del complemento y los eritrocitos despus de incubacin.

Prueba directa TUBO Eritrocitos 2% en suero salino, . 1 gota de antiglobulina humana y luego eritrocitos 2%. Centrifugar 1 min a 1000 rpm Aglutinacin+ Existen anticuerpos IgG fijados a los eritrocitos.

PLACA Incubar suspensin de eritrocitos 55% a 37C x 60 min. Centrifugar se obtienen eritrocitos. Tubo 1 gota de antiglobulina + 1 gta de eritrocitos incubados al 2% . Centrifugar 1000 rpm x 1 min. Verificar aglutinacin. TARJETAS O CASETES

UTILIDAD: Diagnostico de enfer. Hemoltica. Anemias hemolticas autoinmunitarias. Reacciones hemolticas postransfunsionales. INDIRECTAS. Anticuerpos irregulares. Incompatibilidades de pruebas cruzadas.

DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

TITULACION DE ANTICUERPOS
Conocer fuerza de un anticuerpo. Titulacin con diluciones progresivas de suero. Frente a una cantidad constante de eritrocitos portadores de antgenos que corresponden al anticuerpo que quiere titularse. Mayor titulo mayor concentracin del anticuerpo.

Son los que se dirigen frente a antgenos diferentes a los del GS ABO Usar eritrocitos del grupo O

PRUEBAS CRUZADAS
Presencia de anticuerpos en el suero del receptor frente al donante (prueb. Cruzada mayor) Presencia en el donante de anticuerpos dirigidos frente a eritrocitos del receptor (prueba menor)

Prueba + compatibilidad si no existe aglutinacin.

PRUEBA EN SALINO A TEMPERATURA AMBIENTE

Gotas del suero del paciente Gotas del eritrocitos al 2% del donante Dejar en reposo a temperatura 3 min. Ambiente.

Centrifugar 1000 rpm x 1 min. Observar aglutinacin.

PRUEBA EN MEDIO ALBUMINOSOS A 37c.

Si la anterior es - . Aadir 3 gotas de albumina al 30% (15 a 60 min)

Centrifugar 2000 rpm durante 1 min. Ver aglutinacin

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA

La anterior es - . Mezclar homogneamente Llenar con suero salino y centrifugar. Repetir 3 vAadir 1 gta de suero de antiglobulina humana al sedimento de eritrocitos. Mezclar bien y centrifugar 1000 rpm x 2 min. Verificar aglutinacin.