Morfologa y Estructura Bacteriana

Esquema
Microorganismos, qu son?. Tamao y forma Diferentes formas de organizacin celular Pared (Gram. +, Gram.-, Archaea) Membrana. Citoplasma y genoma. Estructuras tpicas:
Fimbrias, pili, flagelo, endoesporas, inclusiones citoplasmticas, cpsula.

Diferencias entre Bacteria, Archaea y Eucarya.

Qu son los microorganismos?

Organismos que no pueden verse a simple vista, al menos en parte de su ciclo Organismos que viven como clulas aisladas o entidades que contienen cidos nucleicos capaz de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo. Incluye algas, hongos, protozoarios, bacterias y virus.

Microscopios
Ojo humano 0.2mm. Microscopio ptico , resolucin mxima 0.2 micras (1 micra). Microscopio electrnico, resolucin mxima 0.5nm

PROCARIOTAS

TAMAO: clula eucariota versus clula procariota

Tamaos

Formas

FORMA DE LAS BACTERIAS

cocos

bacilos

espirilos

Area de superficie vs. volumen

Tamao pequeo intercambio ms eficiente, permite mayor velocidad metablica

Estructura celular

ESTRUCTURAS CONSTANTES

El citoplasma
bacteriano es un gel de alta presin osmtica. Al microscopio electrnico muestra un aspecto finamente granular, debido a su alto contenido en ribosomas e inclusiones de diversos materiales nutritivos que las bacterias almacenan en forma insoluble.

Procariotas

No tienen membrana nuclear

Inclusiones citoplasmticas
Algunas bacterias tienen estructuras internas grnulos de almacenamiento polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs) vesculas de gas flotacin Carboxisomas, clorosomas.

 Grnulos de polihidroxibutirato (PHBs)

vesculas de gas flotacin

Nucleoide
Aproximadamente en el centro del citoplasma localizamos el material gentico de la bacteria el cual se destaca en microfotografas por su aspecto hipolcido. Este material gentico consiste de un cromosoide nico formado por ADN de doble hebra circular. En las bacterias tpicas, como Escherichia coli, tiene aproximadamente 4.800 kpb y extendido mide 1 mm de longitud. Esta gran molcula se encuentra compactada por sobreenrrollamiento, proceso en el que intervienen enzimas del tipo topoisomerasa y protenas estructurales tipo-histonas.

ADN procariota
No tiene ncleo. El DNA est en el citoplasma: nucleoide : zona que ocupa el DNA. Es haploide. Genoma: una nica molcula de DNA de doble cadena, circular.

El genoma contiene 1 - 6 x 106 pares de bases (pb) en procariotas de vida libre; 1000-5000 genes
No contiene histonas. Puede contener otros elementos genticos no genmicos: plsmidos y genomas fgicos.

DNA Cromosomal
DNA circular cerrado Superenrrollado.

No hay porcesamiento del ARNm La transcripcin est ligada a la traduccin.

La membrana citoplasmtica
Mejor llamada membrana celular, es la fina membrana que protege el citoplasma. Cumple con el modelo de Singer de unidad de membrana, estando constituida por una bicapa fosfolipdica y protenas, tanto integrales como perifricas.

 Constituye la principal barrera de permeabilidad celular, pero en las bacterias cumple numerosas otras importantes funciones. Entre otras, contiene las protenas y otros componentes de la respiracin celular y fosforilacin oxidativa. Es un soporte para la sntesis y translocacin de las macromolculas externas que forman la pared celular y los exopolisacridos. Es el lugar de sntesis de enzimas y de protenas en general. La membrana celular se pliega al interior formando un saco membranoso denominado mesosoma, en al menos dos localizaciones. Los mesosomas sirven de sitio de anclaje del cromosoide bacteriano a la membrana celular, participando en su separacin luego de la replicacin y en la formacin de un septum que dividir las clulas hijas.

Funciones de Membrana Citoplasmtica

Barrera de Permeabilidad slo molculas pequeas, sin carga, hidrofbicas, pueden atravesar la membrana por difusin. Ancla de Protenas transporte, generacin de energa, quimiotaxis Generacin de fuerza proton motriz. En fottrofas: Estructuras intracitoplasmticas, soportan el aparato fotosinttico (Vesculas, tbulos, tipo tilacoides) Sntesis de pared, y estructuras extracelulares.

Cada hexgono representa un fosfolipido o lpido de membrana, aparentemente unido pero que en realidad tiene movimiento independiente, por esto se le llama mosaico fluido.

La pared celular
Es el soporte fsico de la clula y la estructura ms externa cuando no existe cpsula. La pared celular otorga proteccin fsica a la bacteria y tambin la protege del shock osmtico, dada la hipertonicidad celular. Adems de estas funciones esenciales, algunos de sus elementos tambin participan en la interaccin agente-hospedero, ya sea facilitando la adherencia a los tejidos, protegiendo la bacteria de los mecanismos inespecficos de defensas o induciendo una respuesta inflamatoria. El componente bsico de la pared celular es el peptidoglicano o murena.

 Est presente en todas las bacterias, excepto los Mycoplasmas que carecen de pared celular y que han desarrollado otras estrategias para protegerse del shock osmtico. El peptidoglicano es una macromolcula compleja que se dispone como una red alrededor de la clula bacteriana. Est compuesto por cadenas de dos aminoazcares alternados: Nacetil glucosamina y cido N-acetil murmico, unidos por enlace -1-4. El cido murmico est constituido por un tetrapptido formado por L y D aminocidos: L-alanina, D-cido glutmico, Llisina, D-Alanina. Finalmente, las cadenas de azcares se unen entre si por la unin de los tetrapptidos de una cadena con la otra. Esto le da al peptidoglicano su estructura de red, determinando su resistencia. La unin entre los tetrapptidos de cadenas vecinas es inhibida por los antibiticos -lactmicos. Existen diferencias en la composicin y estructura de la pared celular entre las bacterias Gram (+) y Gram (-).

Pared celular
Bacteria:
Gram positivo Gram negativo Sin pared

Archaea:
Diversas estructuras Sin pared

Funciones de la pared
Rigidez (mantener la forma, evitar la lisis). Comunicacin con el medio exterior. Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS) Barrera para algunas molculas. Espacio periplsmico (enzimas de transporte, hidrolticas, etc.)

Pared celular en bacterias Gram (+):

El pptidoglicano se dispone en varias capas lo que le otorga grosor a la pared. Atraviesan el peptidoglicano polisacridos cidos, denominados cidos teicoicos. Los cidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato. Los poliglicerol fosfatos estn unidos a la membrana celular y se les denomina cidos lipoteicoicos, mientras que los poliribitol fosfato o cidos teicoicos estn unidos al peptidoglicano. Las funciones primarias de estos polmeros son la estabilizacin del peptidoglicano y la captura de Mg++. Sin embargo, se ha demostrado en algunas bacterias patgenas, como Staphylococcus y algunos Streptococcus, que cumplen funciones tipo adhesinas. En S. pneumoniae contribuyen a la respuesta inflamatoria. Otros componentes, presentes en algunos microorganismos, tienen importancia antignica o clnica. Por ejemplo, los polisacridos neutros se encuentran presentes en todos los Streptococcus, as como la protena M en el S.

pyogenes.

La pared celular de las bacterias Gram positivas

Sus principales caractersticas son: La red de murena esta muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas Los aminocidos implicados varan de una especie a otra. La constitucin del esqueleto es caracterstica de la especie y constituye una buen parmetro taxonmico Es frecuente la presencia de los aminocidos Ldiaminopimlico o de lisina Los poliscaridos estn unidos por enlaces covalentes (en el caso de tenerlos) Su contenido proteico es bajo. En ella se encuentran cidos teicoicos

Pared celular en bacterias Gram (-):

Su pared celular es ms delgada, pero ms compleja que la de los Gram (+). El pptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por fuera de ella se encuentra una segunda membrana denominada membrana externa. La membrana externa es una membrana asimtrica, porque si bien la monocapa interna est formada por fosfolpidos, la monocapa exterior est formada por un tipo especial de lpido, denominado lipopolisacrido (LPS). El LPS es una molcula anfiptica que contiene tres regiones diferentes: el lpido A, el core y el antgeno O. El lpido A, es un complejo de azcares, fosfatos, cidos grasos y forma una bicapa con los fosfolpidos de la membrana. Adems, es el responsable de la toxicidad del LPS. El core, es un oligosacrido de 4 a 5 azcares, algunos infrecuentes como las heptosas y un azcar de 8 carbones, denominado ceto-deoxioctanoico (KDO) . Sirve de enlace entre el lpido A y el Antgeno O.

 El antgeno O, est formado por cadenas de 25 o ms unidades de azcares repetidas. En el laboratorio permite la clasificacin de importantes grupos bacterianos como Salmonella, Shigella, E. coli uropatgenos y enteropatgenos. El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere. Es un potente estimulador de los macrfagos, lo que causa la activa liberacin de citoquinas, responsables de las manifestaciones clnicas de las infecciones por bacterias Gram (-) y que varan desde una fiebre hasta el shock sptico.

La pared celular de las bacterias Gram negativas

La red de murena presenta una sola capa. La constitucin del saco de murena es igual en todas las bacterias Gram negativas. Contiene siempre nicamente meso-diaminopimlico Nunca contiene lisina No se encuentran puentes interpeptdicos. Se encuentran grandes cantidades de lipoprotenas y lipopolisacridos que representan hasta el 80 % del peso seco de la pared celular. Para mantener la estabilidad de las capas de lipopolisacridos es necesario el in Ca++. En las bacterias Gram negativas la capa de murena puede ser atacada por la lisozima cuando se las trata con EDTA (Etilendiamino-tetractico). Este agente, al quelar el Ca++ libera una parte de los lipopolisacridos y permite la accin de la enzima. Hasta ahora no han podido demostrarse cidos teicoicos.

Entre la membrana externa y la membrana celular se crea uncompartimento virtual, llamado espacio periplsmico. El espacio periplsmico es una matriz que incluye alpptidoglicano, enzimas, protenas captadoras de nutrientes y sustancias de secrecin.
La membrana externa contiene numerosas protenas, siendo las porinas las ms abundantes. Se denominan as, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplsmico. Las porinas constituyen poros de difusin inespecficos que permiten el paso de sustancias hidroflicas y no mayores de 700 daltons (aminocidos o disacridos).

Gram +

Bacteria

Gram-

Estructura del Peptidoglicano

Pared Celular Gram Positiva

Otros compuestos qumicos caractersticos de la pared de Gram+

cidos teicoicos cidos teicurnicos cidos miclicos

Membrana Externa de Gram Negativos

Porinas - proteinas que permiten el pasaje de molculas pequeas a travs de la membrana -- especficas e inespecficas

Lipopolisacrido (LPS)

Lpido A (NAG-P + grupos acilos) Core (Ncleo del polisacrido) contiene KDO (cetodesoxioctonato) otros carbohidratos (ramnosa, cido galacturnico) usualmente especfico de especies . O-antigeno nmero de repeticiones variables. tambin contiene carbohidratos. especfico de cepa. A menudo txico para animales Crea superficies densamente hidroflicas.

 Las formas D de la Alanina y del cido glutmico no se presentan en las protenas de los eucariotas. Tampoco en dichas protenas se encuentra el cido m-diaminopimlico. La secuencia alternante de N-acetilglucosamina y N-acetilmurmico no se encuentra en eucariotas Estas caractersticas estructurales hacen que las bacterias (al igual que con la diferencia en los ribosomas) presenten un "taln de Aquiles" susceptible de ser utilizado en su contra por los frmacos de la terapia medica. Los agentes teraputicos que actan en el mbito de la pared celular bacteriana y tienen como "blanco" las enzimas involucradas en su sntesis son en gran medida inocuos para el organismo eucariota sometido a una agresin bacteriana (las "balas mgicas" visualizadas por Paul Erlich).

A. Microfotografa electrnica de la bacteria Gram positiva Micrococcus lysodeikticus mostrando la gruesa capa de peptidoglicano que conforma la pared celular (cw), por debajo de ella la membrana plasmtica (cm), un mesosoma(m), y el nucleoide (n). B.Clula bacteriana procesada mostrando la lnea de fractura entre la membrana citoplasmtica (m.i.) y la pared celular (m.e.). Barra = 1 m.

Algunas bacterias no poseen pared

Protoplastos En biologa un protoplasto es una clula de planta,
bacteria u hongo que ha perdido total o parcialmente su pared celular, para lo cual se usan procesos mecnicos o enzimticos. En el caso de eliminar la pared con enzimas se obtienen: Protoplastos - Cuando se elimina totalmente la pared celular. Esferoplastos - Cuando slo se elimina parcialmente la pared. Los protoplastos se obtienen a partir de bacterias Gram positiva y los
esferoplastos de bacterias Gram negativa.

Pleomrficos
Mycoplasma Membrana celular mas gruesa pueden tener esteroles y lipoglicanos.

Formacin de Protoplastos

Baja concentracin de solutos

Alta concentracin de solutos

Lisozima -- protena que rompe el enlace glicosdico 1-4 en el peptidoglicano

Pared celular de Archaea

No contiene peptidoglicano

Puede ser de:

pseudopeptidoglicano (pseudomureina) tie G+.

pseudomureina cubierta de protena, tie G+.

monocapa superficial de protena o

glicoproteina, sin pseudomureina (halfilos,

metanognicos y termoacidfilos) tie G-.

Existen Archaea sin pared.

Pseudopeptidoglicano de Archaea

Funciones de la pared Archaea

Rigidez y resistencia osmtica (mantener la forma, evitar la lisis). Comunicacin con el medio exterior. Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS). Barrera para algunas molculas (porinas en Gram negativos). Espacio periplsmico (enzimas de transporte, hidrolticas, etc.)

La membrana celular de Archaea

Los lpidos en Bacteria y Archaea tienen diferentes enlaces qumicos.

Ester - Bacteria Eter - Archea
En Archaea, teres de alcohol isoprenoide, algunas forman monocapas.

Isopreno

Estructura de la Membrana Citoplasmtica

Estructuras caractersticas
Estructuras con funciones especficas. No todos los microorganismos las tienen. Son caractersticas de gnero y especie (taxonoma). Ejemplos:
fimbrias, flagelo, pili, endoespora, cpsula, inclusiones citoplasmticas

Flagelos
Los flagelos son apndices filamentosos, helicoidales, que se emplean en la movilidad bacteriana. Las bacterias nadan rotando los flagelos, como una hlice. Estn presentes slo en los bacilos. Estn formados por un cuerpo basal y un gancho embebidos en la envoltura celular y un filamento externo. El filamento externo mide 20 nm de dimetro y consiste en el ensamblaje de miles de monmeros de una protena llamada flagelina, que se dispone como un cilindro de 5 10 m de longitud. Los flagelos se observan al microscopio de luz, solamente si las bacterias se tien con tinciones que aumenten su grosor. La posicin de los flagelos puede ser pertrica, rodeando toda la bacteria; montrica o loftrica si poseen un flagelo o un haz de flagelos en un polo, respectivamente; o anftricas si poseen un haz de flagelos en cada polo. Los flagelos son muy buenos inmungenos. Los antgenos flagelares se denominan antgenos H. Las bacterias mviles tienen una ventaja adaptativa a su ambiente, porque regulan su desplazamiento, mediante quimiotaxis frente a diversas sustancias nutritivas y repelentes.

Flagelos

Mas de 40 genes involucrados La energa la proporciona la fuerza protonmotriz

Flagelos
Slo detectados por tcnicas de tincin especficas

Anaerobaculum mobile sp. nov.

Flagelo insertado lateralmente

Barra 0,5 micras

Fimbrias
Las fimbrias, tambin llamadas pili, son microfibrillas parecidas a pelos, que rodean en nmero de 100-200, a algunas bacterias Gram (-). Miden 3-7 m de dimetro, por lo que se observan slo al microscopio electrnico. Estn constituidas por el ensamblaje e miles de monmeros de un protena estructural llamada pilina, que se dispone en cilindros rgidos o flexibles y por unas pocas copias de una protena apical con propiedades de adhesina.

Las fimbrias son responsables de la adherencia especfica de las bacterias a los tejidos del hospedero, explicando la especificidad de hospedero y de tejidos de las bacterias. Entre los ejemplos ms conocidos destacan las fimbrias tipo 1 o pilis comunes, que se adhieren a residuos de manosa y que se encuentran en un gran nmero de Enterobacteriaceas y las fimbrias P, que se encuentran en los clones uropatgenos y pielonefritognicos de E. coli y cuyo receptor es gal-gal. Dada su importancia, numerosas bacterias fimbriadas han desarrollado mecanismos que le permiten la variacin de fases y variacin antignica de las fimbrias, con el objeto de evadir la respuesta inmune humoral del hospedero.

Fimbrias - Pili
Fimbria - filamento proteico corto, involucrado en funciones de adhesin a superficies. Pelo sexual - unin a clula receptora durante la conjugacin.

Esporas
Dos gneros de bacilos Gram (+): Bacillus y Clostridium pueden dar origen a una forma de vida latente y resistente denominada endospora. Estas estructuras se originan dentro de la clula bacteriana vegetativa y se liberan por lisis celular. Las endosporas son resistentes a condiciones ambientales desfavorables como calor, desecacin y radiacin ultravioleta, permaneciendo viables en el ambiente por cientos de aos. Debido a su resistencia y a que son producidas por microorganismos altamente patgenos, es imprescindible esterilizar las soluciones e instrumentos mdicos que van a ser empleados en ciruga adecuadamente (autoclave y horno Pasteur).

 El proceso de esporulacin comienza con la expresin de una nueva subunidad de la ARN polimerasa, la cual va a transcribir los genes relacionados con este proceso. Con la replicacin del ADN y migracin de un cromosoide a un polo, se invagina la membrana celular rodeando en una doble capa el cromosoide y una pequea cantidad de citoplasma. Luego, se sintetizan dos capas de la espora entre ambas bicapas de membrana. La ms interna, o corteza, corresponde a una gruesa capa de peptidoglicano, mientras que la externa o cubierta, est compuesta por una protena similar a la queratina; impermeable y rica en enlaces S-S-. La termorresistencia parece estar mediada por un compuesto rico en calcio, el dipicolinato de calcio y por el estado de deshidratacin de la espora.

El proceso de germinacin es igualmente complejo. Lesiones de la cubierta de la espora, ms un ambiente propicio estimularan la germinacin. Esta se inicia con la captacin de agua y la prdida del dipicolinato de calcio y contina con la biosntesis de las estructuras de la forma vegetativa.

Endosporas
Resistencia al calor, radiacin, desecacin. Producidas principalmente por los gneros Bacillus y Clostridium Permite la supervivencia en ambientes desfavorables DNA protegido por cido dipicolnico y protenas. Luego de la activacin por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinacin y el crecimiento La localizacin de la espora en la clula puede ser usada para la identificacin

Estructura de la espora

Formacin de esporas

A- el ADN se duplica y enrolla alrededor del eje central (filamento axial) B- Uno de los cromosamas se rodea de membrana plasmtica. C- el protoplasto es rodeado por la clula madre D- se sintetizan las cubiertas de la espora. E- se elimina agua, se forma estructura resistente al calor. F- se libera la espora por lisis de la clula madre. En B. subtilis 6-7 horas, 50 genes.

ESTRUCTURAS ACCESORIAS
Exopolisacridos:
La mayora de las bacterias; tanto Gram (+) como Gram (-) sintetiza una cubierta de naturaleza polisacrida que las rodea. Los exopolisacridos son sintetizados en la membrana citoplasmtica, atraviesan la pared celular y se establecen afuera. Se clasifican de acuerdo a la relacin con la superficie exterior de la bacteria y a su grado de rigidez en:

cpsulas y glicoclix.
Las cpsulas tienen una unin firme a la bacteria, son rgidas y excluyen partculas, entre ellas la tinta china. Su funcin es proteger a las bacterias de la fagocitosis, interfiriendo en la accin del complemento. Los polisacridos capsulares son antignicos (Antgeno K). Debido a su estructura fibrilar radial altamente hidratada, las cpsulas no se tien con las tinciones habituales, sino que requieren colorantes especficos para polisacridos o tincin negativa con tinta china. El glicoclix es flexible, se une en forma laxa a las bacterias, perdindose fcilmente. Participa en la formacin de biopelculas. Esta forma de crecimiento bacteriano se caracteriza por la formacin de microcolonias rodeadas de glicoclix. Un ejemplo de importancia clnica es la colonizacin del Staphylococcus epidermidis en material protsico y catteres. Una vez adherida esta bacteria, se multiplica formando una microcolonia rodeada de glicoclix que la protege de los antimicrobianos, anticuerpos y de la fagocitosis.

Cubiertas extracelulares
Glicocalix: Material externo a la pared celular
Cpsulas - Material en la superficie celular Capas mucilaginosas - Material adherido, menos fuertemente Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas. G+, Gy Archaea. Pueden constituir la pared
Proteccin contra defensas del husped (fagocitosis) Proteccin contra desecacin Proteccin contra virus, toxinas Adhesin a superficies (clulas, objetos inanimados) formacin de biofilms.

Funciones

Glicocalix

Tincin negativa

Microscoa electrnica

Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya

Propiedad Membrana nuclear Organelos Tamao ribosoma Peptidoglicano en la pared Esteroles en membrana Lpidos de membrana Bacteria NO NO 70S SI NO (hopanoides) Ester unidos a glicerol Eucarya SI SI 80S NO SI Archaea NO NO 70S NO SI

Ester unido a glicerol

Eter, ramificados