ErbB2

Trastuzumab

HER2

Monitorizan calidad de la prueba de ErbB2 (preanaltico, analtico y postanaltico)

Fijacin en formol
Duracin > de 6 horas y menor de 48 horas Formalina neutra (tamponada) 10% ASCO / CAP recomiendan que la isquemia fra o la demora en la fijacin con formol sea < de 1 hora. La recomendacin se basa en un estudio de Khoury que mencion despus de 1 hora de isquemia fra la muestra se ve comprometida.

Recientemente, una publicacin de Moatomed demostr hallazgos contrarios a los de Khoury, Moatamed estudio la isquemia fra en un rango de < de 1 hora hasta 4 das con un tejido almacenado a 4C y no hubo compromiso (no hubo prdida de seal de FISH).

Material y Mtodos
92 pacientes Carcinoma de mama La muestra fue la reseccin operatoria Se tom el tiempo desde extrado el espcimen hasta que este es introducido a formol El tiempo de isquemia fra vari de 27 min a 6:25 (h:min). De los 92 casos, ocho fueron excluidos del estudio (siete no tenan ningn tumor y uno contena slo carcinoma ductal in situ).

Material y Mtodos
El tiempo de isquemia fra fue segregado de siguiente manera: Poblacin evaluable (n = 84) < 1 h (n = 45), 1-2 h (n = 27), 2-3 h (n = 6), y > 3 h (n = 6).

Microarreglo de Tejido

Microarreglo de Tejido
Se construyeron 92 Microarreglos por duplicado de 92 pacientes. Tras el procesamiento, 84 casos tenan al menos un ncleo con un tumor invasivo que podra ser evaluado. Doce casos perdieron su ncleo par acoplado entre TMA # 1 y # 2, que resulta en 72 ncleos con un par acoplado

Pruebas de ErbB2
Se utiliz la Inmunohistoqumica con el anticuerpo monoclonal 4B5 de conejo. Prueba FISH Mtodo recientemente aprobado por la FDA INFORM HER2 de doble hibridacin in situ, que tiene un color doble, (DDISH: Dualcolor Dual-hapten In-Situ Hybridization)

Puntaje
Segn la ASCO / CAP la puntuacin de doble sonda se aplica de la siguiente manera: No amplificado (ErbB2 / CEP17 < 1,8) Indeterminado (ErbB2 / CEP17 1,8 a 2,2) Amplificado (ErbB2 / CEP17 > 2,2).

Las pautas para una sola sonda segn ASCO/CAP son las siguientes: > 6 seales de ErbB2 Amplificada Entre 4 y 6 seales de ErbB2 Indeterminada < 4 seales de ErbB2 No amplificada.

Puntuacin siguiendo el inserto del paquete de hibridacin in situ segn la FDA son los siguientes: Relacin ERBB2/CEP17 2 Amplificado Relacin ERBB2/CEP17 2 No Amplificado ErbB2 IHC se puntu de acuerdo a los lineamientos ASCO / CAP como 0, 1+, 2+ o 3+

Dos patlogos revisaron cada muestra por separado y despus de la finalizacin de la puntuacin, se compararon los resultados. En los casos discordantes, un tercer patlogo que desconoca los resultados evalu los ncleos discrepantes. En esos casos, el resultado final fue registrado con un acuerdo entre dos patlogos.

Hibridacin In Situ, evaluacin de la intensidad de la seal

La intensidad de la seal en los ensayos FISH y DDISH se evalu utilizando un sistema de cuatro puntos: 0 = no hay seales visibles, 1 = seales dbiles apenas visibles, 2 = seales visibles pero no intensas, y 3 = seales intensas.

Resultados
Poblacin: Tiempo Isquemia Fra < 1 h Utilizando tanto la normativa ASCO / CAP para sonda dual y el inserto de la FDA con las instrucciones de puntuacin para hibridacin insitu, en la amplificacin de ERBB2 se detect en cuatro casos por FISH y DDISH (100% de concordancia) En estos cuatro casos con ISH-amplificado, slo en un caso demostr ErbB2 expresin 3 + por IHC (25% de concordancia con los mtodos ISH)

 Sin embargo, una sola sonda FISH segn la gua ASCO/CAP mostr una concordancia del 100% con IHC. Se identificaron un total de once casos en el grupo <1 h de tiempo de isquemia fra con un ErbB2 discrepante de IHC y el resultado ISH (alteracin en el estado indeterminado y no amplificado.

Por ISH, se detectaron seales de ErbB2 y CEP17 en las clulas del estroma en la misma diapositiva adyacente a las clulas tumorales obtenidos. El puntaje promedio de intensidad de la seal de ErbB2 en las clulas del estroma fue de 2.8 con una sd = 0,4 por DDISH y 1.8 sd =0,5 por FISH, (P = <0,05). El puntaje promedio de la intensidad de la seal para CEP17 en las clulas del estroma fue de 2.8, sd = 0,4 por DDISH y 2,2, sd = 0,5 por FISH, (P = <0,05)

Poblacin Tiempo de Isquemia Fra 1 a 2 h

Dentro de la cohorte tiempo de isquemia fra 1-2 h, todos los mtodos de calificacin ErbB2 por ISH e IHC demostraron 100% de concordancia en la identificacin de tres casos. Se identificaron un total de tres casos en el grupo de 1 a 2 h de tiempo de isquemia fra con una discrepancia de IHC de ISH de ErbB2, sin embargo, ninguna de estas discrepancias se traducira en un cambio en el estatus ErbB2

Intensidad de la seal de Her 2 en las clulas tumorales por grupo de tiempo de isquemia fra

A, B y C Diferencia significativa en el tiempo > 3 horas, antes de este tiempo no.