Concanavalina A

O peso molecular da Concanavalina A (ConA) 104-112 kDa e o ponto isoeltrico (pi) na gama de 4,5-5,5.
pH: prximo ao pI favorece a precipitao

estrutura cristalogrfica da concanavalina A baseado no PDB 3CNA estrutura cristalogrfica. Grfico processado com PyMOL.

O polmero denominado polietileno glicol (PEG) ou poli(xido) de etileno (PEO), HO-(CH2-CH2-O)n-H, Figura 2, um polmero sinttico, hidroflico, no inico, que constitui a base para as indstrias de plsticos, embalagens, fibras, adesivos, tintas e esmaltes (MURRELL e JENKINS, 1994). Esse polmero obtido pela polimerizao do xido de etileno (EO) por meio de indicadores bsicos, cidos ou de metais (Li, Na, Mg) (BAILEY et al. 1991). O PEG est disponvel no mercado em diversas massas molares que podem ultrapassar 1x106 g/mol. Figura 2: Representao plana parcial da molcula de PEG com os stios disponveis para as interaes com os demais componentes do sistema.

O polmero denominado polietileno glicol (PEG) ou poli(xido) de etileno (PEO), HO-(CH2-CH2-O)n-H, Figura 2, um polmero sinttico, hidroflico, no inico, que constitui a base para as indstrias de plsticos, embalagens, fibras, adesivos, tintas e esmaltes (MURRELL e JENKINS, 1994). Esse polmero obtido pela polimerizao do xido de etileno (EO) por meio de indicadores bsicos, cidos ou de metais (Li, Na, Mg) (BAILEY et al. 1991). O PEG est disponvel no mercado em diversas massas molares que podem ultrapassar 1x106 g/mol. Figura 2: Representao plana parcial da molcula de PEG com os stios disponveis para as interaes com os demais componentes do sistema.

 Estudos mostram que o nmero de monmeros da macromolcula afeta diretamente a rea em que o sistema permanece com duas fases. O aumento da massa molar do polmero promove a ampliao da rea bifsica, o que foi observado inicialmente por Albertsson (1960); em relao formao do SAB, quanto maior a massa molar do polmero, menor ser a concentrao de sal (ou do outro componente constituinte do sistema) requerida para que ocorra a separao de fases. Este comportamento observado tanto para sistemas polmero-polmerogua, quanto para sistemas polmero-sal-gua.

+ + pI

- -

De modo geral, o solvente aquoso, e, alterando-se as propriedades do meio por mudanas na fora inica e no pH, por adio de solventes orgnicos miscveis e polmeros orgnicos, altera-se a solubilidade das protenas.

Precipitao por polmeros

PEG (polietilenoglicol), polmero de alta massa molar, neutro e miscvel em gua, disponvel em diversos graus de polimerizao; Em geral, propores de polmero (15 a 30%); 4000 g/mol ou mais so os mais eficientes Mecanismo: excluso da protena do meio aquoso; Concentrao depende do tamanho da molcula a ser precipitada e da massa molar do polmero, sendo inversamente proporcional concentrao da protena; Remoo do polmero: ultrafiltrao, adio de etanol, separao pela formao de duas fases aquosas pela adio de sais.

Desnaturao X Precipitao
A desnaturao compreende a destruio da estrutura terciria de uma molcula de protena e a formao de cadeias polipeptdicas ao acaso. - as variveis pH, temperatura e solventes orgnicos, dependendo dos valores, causam desnaturao das protenas.

A precipitao compreende a modificao da estrutura tridimensional da molcula de protena. - as mesmas variveis, dependendo dos valores, causam precipitao das protenas.

 A precipitao deve permitir que a conformao adequada da protena seja recuperada, para que a mesma possa exercer sua funo bioqumica aps o processo.

Precipitao por sais

Neutralizao das cargas superficiais com reduo da camada de hidratao Salting-out: adio de sais que promovem o aprisionamento de molculas de gua que tornam-se escassas e o consequente consumo das molculas de gua nas regies hidrofbicas, que expostas interagem e se agregam.

Os sais mais adequados so aqueles que apresentam elevada solubilidade, ex.: citrato de sdio, sulfato de sdio e sulfato de amnio.

 Salting-in: reduo na concentrao de sais induz interaes inicas e agregao entre molculas de protena. Globulinas se precipitam sob fora inica baixa

Mtodo mais comumente usado para separao de protenas o da adio de sais neutros (salting out)

Biochemistry. 1972 Dec 19;11(26):4910-9. Structure of concanavalin A at 2.4-A resolution. Hardman KD, Ainsworth CF.