UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONA

Carrera Profesional de Ingeniera Agroindustrial

TEMA: Cultivo in vitro de tejidos vegetales Generalidades

Curso: Biotecnologa

Docente: Blgo. MSC. Liz Michielle Garca Zare Yarinacocha-Per

Carica papaya papaya

Ananas sp. pia

Orcchidaceae orquidea

Podemos implementar esta tecnologa en nuestra regin ?

Qu es los que hace posible dicha tecnologa?

EXPLANTO

Invernadero

Cultivo de Tejidos vegetales

Fue desarrollado a partir de 1950 por botnicos y fisilogos vegetales. Tcnica que utiliza pequeos segmentos de tejido en condiciones aspticas en medio nutritivo dentro de material estril de vidrio, conseguir nuevas plantas idnticas a la planta madre

Fases de propagacin vegetal: La iniciacin, se extrae segmentos de la planta madre, se desinfectan y cultivan en medio especfico. La Multiplicacin, comienza la reproduccin de los explantos. Enraizamiento, a travs de modificando el medio de cultivo para la generacin de races.

Aclimatacin, el paso de las plantas de cultivo hacia el medio natural

Combinacin slida o lquida de minerales y agua

Macroelementos: N, P, K, Ca, Mg, S

Sales inorgnicas

Microelementos: Fe, Zn, B, Mn, Cu, Ni, Co, Al, Mo, I Sacarosa, Manitol, Sorbitol

Carbohidratos

Thiamina, piridoxina, cido nicotnico, inositol

Vitaminas y aminocidos
Glutamina, Glycina

Reguladores de crecimiento

2,4 Diclorofenoxiactico, AIA, IBA, BAP, Citoquinicas

Preparacin de Medio de Cultivo

El xito del cultivo de tejidos depende de la seleccin del medio de cultivo. Estas se realizan por medio de la preparacin de soluciones stock.

La solucin stock puede estar separada por macronutrientes, micronutrientes, vitaminas en mg/mL de solucin.

Ejm. Preparar 50 ml de Thiamina sol. Stock 1mg/mL Esto es igual a pesar 50 mg de Thiamina y disolverlo en 50 mL de agua

Los principales medios de cultivos: Medio MS: cultivo de plantas herbceas Medio WPM: cultivo de plantas leosas

Preparacin de Medio de Cultivo

Aforar hasta volumen indicado con agua destilada y ajustar pH entre 5.5 y 6

Macronutrientes Micronutrientes Hierro Vitaminas Hormonas Sacarosa

Introducir explantos en medio estril

Adicionar fitagel , cubrir material de vidrio y autoclavar

Medio de cultivo MS
Se denomina as por haber sido formulado por cientficos Murashige y Skoog en 1962. Este medio de cultivo es empleado en plantas herbceas como: Tomate, orqudeas, caa de azcar, papaya, lcuma, papa, camote, etc
Reactivos que forman parte del medio MS

Vitaminas que conforman el medio MS

Medio de cultivo WPM

Se denomina as por sus siglas en ingls Wood plants medium (medio para plantas leosas), fue formulado por Lloyd & McCown, 1980, y modificado por Zhang et al 2006. Este medio de cultivo es empleado en plantas leosas como: camu camu, palmeras, arndano, etc
Reactivos que forman parte del medio WPM

Vitaminas que conforman el medio WPM

Aplicacin de cultivo in vitro

-Obtencin de plantas libres de patgenos -Propagacin masiva -Conservacin de germoplasma -Mejora por mutagnesis y seleccin in vitro

-Ingeniera Gentica

Embriones cigticos de papaya var. Maradol:

Se emplearn frutos inmaduros de papaya var. Maradol de aproximadamente tres meses de crecimiento.

Los frutos colectados se lavarn con agua y jabn

Sumergirn en cloro al 20% (v/v) (3.5% de NaClO), durante 1 h

Luego se incorporar en una campana Holten y, ah se enjuagarn nuevamente con etanol al 70% (v/v).

Embriones cigticos de papaya var. Maradol:

Despus, los frutos sern cortados transversalmente y se extraern las semillas

En placas Petri sern desinfectadas por inmersin: Etanol al 70% (v/v) por 30 s. Solucin de cloro al 20% (v/v) con dos gotas de Tween 20 por 20 min. Se enjuagarn por tres ocasiones cada 5 min. con H2O die

Medio MS con el 50% de la concentracin de sales y suplementado con 10 mg/L de cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D) Embrin cigtico de papaya var. Maradol

Iniciacin de embriognesis somtica de papaya var. Maradol

Semillas inmaduras en medio MS + 2,4 D

Estructuras somticas globulares Estructuras somticas en torpedo

Estructuras somticas de 21 das

Maduracin y germinacin de papaya var. Maradol

Enraizamiento de papaya var. Maradol

Aclimatacin de papaya var. Maradol