EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR DEL VSR

INTRODUCCIN
VSR es la causa ms importante de infeccin del tracto respiratorio en nios pequeos. Causa 40% de las infecciones del tracto respiratorio inferior. Es la causa ms comn de bronquiolitis. Responsable de la admisin al hospital de 0.1% a 2% de los nios < de 1 ao de edad cada ao. La infeccin primaria ocurre en los 2 primeros aos de vida.
Molecular epidemiology of respiratory syncytial virus. Patricia A. Cane. Rev. Med. Virol. 2001; 11: 103116.

 Mayor riesgo de infeccin severa por VSR: Cardiopata congnita Displasia broncopulmonar El VSR tambin es una causa importante de neumona comunitaria en adultos hospitalizados.

BIOLOGA Y ESTRUCTURA DEL VSR

Orden Mononegavirales Familia Paramyxoviridae

Subfamilia Pneumovirinae
Gnero Pneumovirus

Tiene un genoma de ARN no segmentado, de sentido negativo, de 15,200 nucletidos El genoma tiene 10 genes que codifican 11 protenas. El orden de los genes es 3 NS1, NS2, N, P, M1, SH, G, F, M2, L 5
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PROTENAS DEL VIRUS

PROTEINA
F (fusin)

FUNCIONES
GLICOPROTENAS DE SUPERFICIE Media la penetracin del virus y la formacin de sincitios, posiblemente tambin puede mediar la unin Media la unin del virus Funcin desconocida

G (glycoprotein) SH (small hidrophobic)

PROTENAS ASOCIADAS A LA NUCLEOCPSIDE N (nucleoprotein) P L M2-1 (22K) M2-2 M1 Protena mayor de la nucleocpside Fosfoproteina ARN polimerasa Factor de elongacin de la transcripcin Regulacin de la transcripcin PROTENA DE LA MATRIZ Puede mediar la asociacin entre la nucleocpside y la envoltura PROTENAS NO ESTRUCTURALES Antagoniza la respuesta antiviral inducida por interfern

NS1 NS2

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ESTRUCTURA ANTIGNICA DE LA GLICOPROTENA G

Regin central altamente conservada: 4 residuos de cistena Ligeramente hidrfoba Sitio de unin al receptor

Dos regiones con un alto nivel de variacin de la secuencia: Alto contenido de serina y treonina Sitios potenciales para la O-glucosilacin

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DOMINIOS VARIABLES Y CONSERVADOS DE LA PROTENA G

Respiratory Syncytial Virus Genetic and Antigenic Diversity Wayne M. Sullender. Clin. Microbiol. Rev. 2000

 Nivel antignico Anticuerpos monoclonales

Nivel gentico RT-PCR y RFLP RNase A mismatch cleavage Secuenciacin de nucletidos

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PRINCIPALES GRUPOS ANTIGNICOS

Anderson et al. Identificaron tres grupos, con el virus prototipo: Grupo 1: Long Grupo 2: CH-18537 Grupo 3: A2

Mufson et al. Subtipo A: Long y A2 Subtipo B: 4 virus aislados en Virginia Occidental y CH-18537

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Norrby et al. Akerlind and Norrby Morgan et al. on Orvell et al. Storch and Park

Los estudios anteriores demostraron que existan dos categoras principales de antgenos de VSR que distinguen con uso de anticuerpos monoclonales. El mayor nmero de diferencias antignicas se produjo en la glicoprotena de la unin G. Los virus Long y A2 han servido como prototipo del grupo A , y los virus de CH-18537 y 8/60 del grupo B.
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CONFIRMACIN GENETICA DE DOS GRUPOS

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GRUPOS DE VSR
Grupos antignicos: A y B Reacciones con anticuerpos monoclonales (protenas P, F y G).

Las protenas F y N son altamente conservadas 91% y 96% de similitud de aminocidos.

La Protena G es muy variable Similitud de aminocidos entre grupos A y B es de 53%.

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OTRAS TCNICAS GENTICAS

Se desarrollaron oligonucletidos comunes para diferenciar las cepas A y B del VSR, mediante el uso de RT-PCR. Resultados de la RT-PCR se compararon con inmunofluorescencia indirecta utilizando anticuerpos monoclonales. Para la PCR, se utilizaron tres oligonucletidos correspondientes a la protena G: 1) Grupo A: 3ATGCAACAAGCCAGATCAAG (bases 248 a 267) 282 2) Grupo B: 3ACTCATCCAAACAACCCACA (bases 314 a 333) 216 3) Ambos: 3GGWACAAARTTGAACACTTC (bases 511 a 530)

Discrimination of Respiratory Syncytial Virus Subgroups A and B by Reverse Transcription-PCR JOCHEN GOTTSCHALK, REINHARD ZBINDEN, LUCIA KAEMPF, AND IVO HEINZER. Institute of Microbiology, Kantonsspital, CH5001 Aarau, Switzerland. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Jan. 1996, p. 4143

 Los productos de PCR de los grupos A y B tenan tamaos moleculares de 283 y 213 pb. De 68 muestras de VSR, 47 cepas corresponden al grupo A y 21 cepas al grupo B.

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EPIDEMIOLOGA Y VARIABILIDAD GENTICA

Durante el invierno en climas templados.

En clima tropical se asocian con la temporada de lluvias.

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Anderson et al.

Los dos grupos han existido por ms de 20 aos. El VSR tiene una distribucin mundial. Pueden circular los dos grupos durante una sola temporada. Identificaron con ms frecuencia los virus del grupo A que los del grupo B.

Discrimination of Respiratory Syncytial Virus Subgroups A and B by Reverse Transcription-PCR JOCHEN GOTTSCHALK, REINHARD ZBINDEN, LUCIA KAEMPF, AND IVO HEINZER. Institute of Microbiology, Kantonsspital, CH5001 Aarau, Switzerland. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Jan. 1996, p. 4143

Hendry et al. Evalu la prevalencia de los dos grupos antignicos en 6 temporadas de VSR en Boston (1981-1987).

De 981 muestras, 60% eran el grupo A y 39% eran el grupo B.

En 3 temporadas predomino el grupo A, en 1 en grupo B y en 2 se encontraron en proporciones iguales.

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Akerlind and Norrby Periodo de 1978 a 1988 en Virginia del Este. Un total de 405 muestras de VSR, de las cuales 79% correspondan el grupo A y un 21% al B. Los virus grupo B solo predominaron en una temporada.

Valdes et al. En Cuba entre 1994 y 1995, se aisl la protena G de 23 virus. Solo 5 nucletidos diferentes a una cepa aislada en 1956 en los Estados Unidos. Protena G era idntica a la de virus presentes en temporadas posteriores.

Peret et al. En Rochester, NY durante cinco temporadas (1990-1995). Tanto el grupo A como el B predominaron durante 2 aos cada uno y durante un 1 ao se encontraron en proporciones similares. Los virus del grupo B fueron menos variables que el grupo A. Anlisis filogenticos de las secuencias del gen de la protena G y se identificaron varios clados de genotipos. En el grupo A se clasificaron cinco genotipos y 22 subtipos, y en el grupo B se describen 4 genotipos y 6 subtipos.

Se realizaron comparaciones filogenticas de las muestras aisladas en Alabama con las secuencias de genes de la protenas G disponibles en GenBank

Los dendrogramas fueron modificados para mostrar las clasificaciones genotipo correspondientes descritos por Peret et al.

RELACIONES FILOGENTICAS DE LA PROTEINA G DEL GRUPO A Y B DEL VSR

Los virus fueron identificados por: 1. Ubicacin geogrfica Estados Unidos: al, Alabama; wv, West Virginia; dc, Distrito de Columbia; ma, Massachusetts; md, Maryland; nm, New Mexico. Reino Unido: uk Espaa: mad, Madrid Uruguay: mon, Montevideo Suecia: swed Australia: aus 2. Ao de aislamiento 3. Nmero de muestra (Montevideo y Madrid) 4. Designacin numrica (EUA y UK)

La prevalencia relativa de los diferentes genotipos en cada epidemia en Birmingham, Reino Unido entre 1988 y 1999.

 Un estudio de nueve epidemias consecutivas en Sel, Corea, Diferentes genotipos predominaban en cada epidemia A:5 no se detecto durante el estudio

Un estudio de ms de 5 aos en Rochester, EE.UU. (1990-95) Mltiples genotipos en cada epidemia sin predominio de alguno en mas de una epidemia A:5 era abundante en la epidemia de 1994 a 1995

Un estudio de ms de 3 aos en Birmingham, Alabama A:5 se detect en 1993 y 1995

Explicacin para el cambio del genotipo predominante durante cada epidemia: Inmunidad de grupo a una cepa predominante se desarrolla durante la epidemia para restringir la circulacin de esa cepa en epidemias posteriores.
Por inmunidad materna: Se adquiere despus de una epidemia de un genotipo en particular, y causa una disminucin en la severidad de la enfermedad en los bebs nacidos despus de esa epidemia.

VIRULENCIA ENTRE DIFERENTES CEPAS DE VSR

Algunos estudios no mostraron diferencia en la severidad de las infecciones de grupo A y B, mientras que otros informaron de que el grupo A se asocia con una mayor severidad.

Walsh et al. Encontr que entre los nios sin comorbilidades que eran infectados por VSR del grupo A tenan ms probabilidades de requerir ventilacin mecnica, pero haba ndices ms altos de severidad en personas infectadas por virus del grupo B.

Se ha reportado que en cultivos celulares hay mayores ttulos de replicacin viral en cepas del grupo A que los virus del grupo B.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Los principales mtodos para el diagnstico del VSR son: 1.- Deteccin de antgeno por inmunofluorescencia o inmunoensayo enzimtico (ms usado, por facilidad y rapidez).

2.- Cultivo (Gold standard).

3.- Deteccin de ARN por RT-PCR (muy sensible, no de rutina en hospitales).

4.-Serologa (til para el diagnstico retrospectivo o reinfeccin).

 Ribavirina Tratamiento especfico para VSR La eficacia es controversial Tratar infeccin en inmunocomprometidos Prevencion: vacunas No han tenido xito por distintas razones: Severidad de la enfermedad Inmadurez inmunolgica e interferencia de anticuerpos maternos Fracaso para inducir una respuesta inmune adecuada La inmunoprofilaxis ha demostrado tener cierta eficacia en nios con factores de riesgo.