REGULAO DA EXPRESSO GNICA

Jos Natan Joselma Lacerda Laynne Leal Lissandra Traesel

INTRODUO
Apenas

uma frao dos 4.000 genes de um genoma bacteriano tpico ou dos 100.000 genes estimados do genoma humano expressa em um dado tempo. - Produtos gnicos - grandes ou pequenas quantidades.
necessidade para um certo produto gnico se alteram com o tempo. regulao da expresso gnica essencial para clula fazer o melhor uso da energia disponvel.

As

INTRODUO

INTRODUO
A

regulao da iniciao da transcrio so os mais bem documentados e mais comuns. lugar mais eficiente para regulao o incio da via.

controle da iniciao da transcrio permite a regulao sincronizada dos genes mltiplos que codificam produtos com atividades interdependentes.

PRINCPIOS DA REGULAO GNICA

 Expresso

gnica constitutiva expressos em nveis constantes em quase todas as clulas. Ex: Genes do ciclo do cido ctrico ou em resposta a

Expresso

gnica regulada sinais moleculares. Induo Ex: Reparo do DNA

Represso Triptofano

A RNA POLIMERASE LIGA-SE AO DNA NOS PROMOTORES

A regulao da iniciao da transcrio frequentemente impe alteraes em como a RNA polimerase interage com o promotor. Na ausncia de protenas reguladoras, diferenas nas sequencias de dois promotores podem afetar a frequncia da iniciao da transcrio. Mutaes que se afastam da sequncia consenso promotora. a funo

Mutaes que se aproximam da sequncia consenso funo promotora.

A INICIAO DA TRANSCRIO REGULADA POR PROTENAS QUE SE LIGAM AOS PROMOTORES OU PRXIMO A ELES
Fatores

de especificidade Repressores Ativadores

A subunidade

da holoenzima da RNA polimerase da E. coli um fator de especificidade que medeia o reconhecimento e a ligao ao promotor.

A maioria dos promotores da E. coli reconhecida pela subunidade 70 estresse trmico Subunidades 70 substitudas por outro fator de especificidade 32 RNA polimerase Direcionada a um conjunto de promotores especializados com uma sequencia consenso diferente Promotores controlam a expresso de um conjunto de genes que codificam a resposta ao choque trmico

Repressores ligam-se a stios especficos do DNA (operadores) Bloqueia Ligao da RNA polimerase Efetor REGULAO NEGATIVA

+ repressor = mudana conformacional

Aumento ou diminuio da transcrio

Ativadores ligam-se ao DNA Aumenta Atividade da RNA polimerase em um promotor REGULAO POSITIVA

Influenciando a taxa de transcrio em um promotor

Molculas sinalizadores aumentam ou diminuem a transcrio, dependendo de como elas afetam o ativador

A MAIORIA DOS GENES PROCARITICOS SO REGULADOS EM UNIDADES CHAMADAS DE OPERONS Franois Jacob e Jaques Monod (1960)- estudos da regulao do metabolismo da lactose na E. coli, que pode usar a lactose como fonte nica de carbono. A maioria dos mRNAs procariticos policistrnico e o promotor nico que inicia a transcrio do agregado o stio de regulao para expresso de todos os genes. Grupamento de genes + promotor + sequencias reguladoras operon

O OPERON LAC EST SUJEITO REGULAO NEGATIVA

Estudo de mutantes do operon lac
Ausncia

da lactose genes do operon lac reprimidos Mutaes no operador ou no gene I sntese constitutiva de produtos gnicos Gene I codifica protena repressora repressor Lac

O OPERON LAC EST SUJEITO REGULAO NEGATIVA

O

repressor Lac liga-se mais fortemente ao operador principal O1. Possui 2 stios de ligao secundrios O2 e O3 (pseudo-operadores). gene I transcrito a partir do seu prprio promotor P1, independentemente dos genes do operon lac. reprimir o operon, o repressor Lac liga-se ao operador principal e um dos stios secundrios, fazendo uma ala.

Para

O OPERON LAC EST SUJEITO REGULAO NEGATIVA

Quando

as clulas so providas com lactose, o operon lac induzido. Sinal + repressor Lac mudana conformacional Dissociao do repressor do operador

Isopropiltiogalactosdeo

(IPTG) um indutor efetivo e no metabolizvel do operon lac.

Protenas reguladoras possuem domnios discretos de ligao ao DNA

Protenas

reguladoras ligam-se a sequncias especficas

do DNA. - Afinidade 104 a 106 vezes maior

A

maioria das protenas reguladoras possuem domnios discretos de ligao do DNA, contendo sub estruturas que interagem ntima e especificamente com o DNA.
Reconhecer as caractersticas da superfcie do DNA

Protenas reguladoras possuem domnios discretos de ligao ao DNA

A maioria dos grupos qumicos que diferem entre as quatro bases e permitem a discriminao entre os pares de bases so os grupos doadores e aceptores de ponte de hidrognio, e a maioria dos contatos protenas-DNA que transmitem especificidade so pontes de hidrognio.

Protenas reguladoras possuem domnios discretos de ligao ao DNA

Uma

protena pode reconhecer cada par de base de maneiras mltiplas, levando concluso que no existe nenhum cdigo simples aminocido-base.

REGULAO DA EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

E. coli
Condies nutricionais

Genes Ativao Represso

OPERON

mRNA policistrnico PROTENAS

mRNA Policistrnico

Genes constitutivos
Genes que so constantemente expressos

Genes induzveis
Genes cuja expresso varia de acordo com as condies da clula

Organizao na Forma de Operons

Promotor/operador Regies Codificadoras
Terminador

25

OPERON
RNA MENSAGEIRO POLICISTRNICO E. coli

Controle por ativadores e repressores

26

CONTROLE POSITIVO
Ativador ligado facilita a transcrio
CONTROLE
NEGATIVO Repressor ligado inibe a transcrio

Induo Represso

Induo Represso

REGULAO NEGATIVA
Repressor ligado inibe a transcrio Induo

28

indutor

REPRESSOR INATIVO

REGULAO NEGATIVA
Repressor ligado inibe a transcrio Represso

29

Co-repressor

REPRESSOR INATIVO

REGULAO POSITIVA
Ativador ligado facilita a transcrio Induo

30

INDUTOR

ATIVADOR INATIVADO

REGULAO POSITIVA
Ativador ligado facilita a transcrio Represso

31

Co-repressor ATIVADOR INATIVADO

32

Operon da Lactose

34

Operon da Lactose - Enzimas

PERMEASE

GALACTOSIDADE

TRANSACETILASE

A lactose induz a sntese de enzimas envolvidas no seu prprio metabolismo

PERMEASE
35

CITOPLASMA

Transporta lactose

PERIPLASMA

36

Galactosidase
Clivagem da lactose

Regulao do Operon lac

37

CONTROLE NEGATIVO
REPRESSOR

CONTROLE POSITIVO
COMPLEXO CAP:cAMP

38

42

Controle positivo do operon lac

Glicose CAP Protena ativadora de catablito AMPc

O CONTROLE DO OPERON DA ARABINOSE

44

GENE REGULAD OR

SITIOS DE CONTROLE

GENES ESTRUTURAIS

ENZIMAS ENVOLVIDAS NO METABOLISMO DA ARABINOSE

RIBULOSE - QUINASE ARABINOSE ISOMERASE RIBULOSE 5 FOSFATO - ISOMERASE

Regulao do Operon do
47

Triptofano
trpE

trpR

P\O

trpD

trpC

trpB

trpAter

Repressor

Triptofano

Controle da traduo de operons de protenas ribossmicas

50

RESPOSTA ESTRIGENTE

Regulao da expresso gnica em eucariotos

Iniciao da transcrio

Regulao da expresso gnica

Estado transcricional basal atividade dos promotores e o mecanismo trancricional in vivo na ausncia de protenas reguladoras. Eucariotos ausncia de protenas reguladoras

promotores inativos

Caractersticas que distinguem a regulao da expresso gnica dos eucariotos e das bactrias:

O acesso aos promotores eucariotos restringido pela estrutura da cromatina;

Os pontos positivos reguladores predominam todos os sistemas; As clulas eucariticas possuem protenas reguladoras multimricas maiores a mais complexas do que as bactrias; A transcrio no ncleo eucarioto separada da traduo no citoplasma, em espao e tempo;

A cromatina transcricionalmente ativa estruturalmente distinta da cromatina inativa

Heterocromatina
10% da cromatina mais condensada

Eucromatina
Restante menos condensada

Eucromativa

ativa, em parte

mais relaxada

A cromativa transcricionalmente ativa tende a ser deficiente em histona H1, a qual se liga ao DNA, e enriquecida com histonas variantes H3.3 e H2AZ.

Heterocromatina

inativa.

Cada histona central possui dois domnios estruturais:

Um domnio central est envolvido na interao histonahistona e no enrolamento do DNA ao redor do nucleossomo. O domnio aminoterminal rico em lisina est posicionado perto do exterior das partculas de nucleossomos; as modificaes covalentes ocorrem em resduos especficos.

A cromatina remodelada por acetilao e deslocamento/reposicionamento dos nucleossomos

Mudanas estruturais na cromatina associadas a transcrio

Remodelagem da cromatina

A acetilao e a metilao de histonas aparecem proeminentemente nos processos que ativam a cromatina para a transcrio.
Enzimas que acetilam resduos especficos de Lys

Metilaoe s

Ligao histonaacetiltransferase

A acetilao de mltiplos resduos de Lys nos domnios amino-terminais das histonas H3 e H4 pode reduzir a afinidade de todo o nucleossomo pelo DNA.

Quando a transcrio de um gene no mais necessria, a extenso da acetilao dos nucleossomos naquela vizinhana reduzida pela atividade de histonadesacetilases.

Complexos de enzimas que movem ou deslocam os nucleossomos ativamente:

O complexo SWI/SNF contm 6 polipeptdeos centrais que juntos remodelam a cromatina, deixando-os mais espaados e propiciando a ligao dos fatores de transcrio. NURF remodela a cromatina de forma a complementar e sobrepor-se a atividade da SWI/SNF. SWR1 esto envolvidos na deposio da histona variante H2AZ na cromatina transcricionalmente ativa.

Muitos promotores so positivamente regulados

grande tamanho dos genomas eucariticos maior eficincia da regulao positiva prefernci a da regulao positiva

A especificidade da ativao transcricional pode ser melhorada se cada uma das vrias protenas reguladores positivas precisar se ligar a sequencia especfica de DNA e ento formar um complexo para se tornar ativa.

Ativadores de ligao ao DNA e coativadores facilitam a reunio de fatores gerais de transcrio

As sequencias reguladoras so chamadas de intensificadores em eucariotos superiores e sequencias ativadoras a montante em leveduras.

O sucesso da ligao da haloenzima RNA-polimerase II ativa a um de seus promotores geralmente requer a ao de outras protenas: Ativadores de transcrio; Proteinas de modificao e remodelagem da cromatina; Coativadores; Fatores de transcrio basais;

Ativadores de transcrio
Alguns intensificadores ligados por ativadores esto longe do TATA box do promotor e em muitos casos a resposta parece ser a formao de uma ala com o DNA interveniente, para que vrios complexos de protenas possam interagir.

Estas protenas pertencem ao grupo de alta mobilidade e desempenham um papel estrutural importante na remodelagem da cromatina e na ativao trancricional.

Complexos proteicos coativadores

Atuam como intermedirios entre transcrio e o complexo de Pol II. os ativadores de

O principal coativador eucaritico consiste em 20 a 30 polipeptdeos , em um complexo proteico denominado mediador.

Transcrio basal

Complexo mediador
Estimula a fosforilao do CTD pelo TFIIH.
Transcrio regulada junto a promotores

Protena de ligao a TATA

O primeiro componente a se ligar ao complexo de priniciao (PIC) no TATA box de um promotor Pol II tpico a protena de ligao a TATA (TBP).

Esse arranjo muitas vezes insuficiente para a iniciao da transcrio, e geralmente no se forma se o acesso ao promotor for dificultado por estar dentro da cromatina

A coreografia de ativao trancricional

A remodelagem da cromatina acontece em estgios . Um ativador ligado pode mover outros componentes necessrios para uma remodelagem maior da cromatina e permitir a transcrio de genes especficos.

Ativao transcricional reversvel

Quando o hormnio esteroide que funcionam como ativadores da transcrio estiver ausente, as protenas receptoras revertem para uma conformao repressora, impedindo a formao de PICs. O mediador, quando inclui subunidades inibidoras, pode bloquear a iniciao da transcrio.

Figura

Os genes do metabolismo da galactose em leveduras esto sujeitos tanto a regulao positiva quanto a negativa

Cada um dos genes GAL transcrito separadamente, entretanto, todos os genes possuem promotores semelhantes e so regulados coordenadamente por um conjunto de protenas.

Ativadores da transcrio possuem uma estrutura modular

Ativadores de transcrio possuem um domnio estrutura distinto para a ligao especfica ao DNA e um ou mais domnios adicionais para a ativao transcricional ou para interao com outras protenas reguladoras. A interao de duas protenas reguladoras mediadas por domnios: Gal4p funciona como um homodmero e se liga a UASg, uma sequencia palindromica de DNA com cerca de 17 pb de comprimento. Sp1 um ativador de transcrio para um grande nmero de genes em eucariotos superiores CTF1 seu mecanismo de ligao com o DNA ainda no est claro. Possui um domnio de ativao rico em prolinas.

A EXPRESSO GNICA EUCARIOTICA PODE SER REGULADA POR SINAIS INTERCELULARES E INTRACELULARES

REGULAO DA EXPRESSO GNICA

Hormnios esterides, da tireide e retinoides

Modulao de protenas reguladoras eucariticas

Interao direta com os sinais moleculares

REGULAO DA EXPRESSO GNICA

Elementos de resposta a hormmios (HRE)

Semelhanas:

- comprimento; - arranjo

Diferena:

- sequncias para diferentes hormnios

Alterao da expresso gnica especfica de determinado hormnios pelo complexo hormnio receptor
Sequncia exata (HRE)

Alterao da Expresso gnica

Posio em relao ao gene

N de elementos (HRE) associados ao gene

A REGULAO PODE RESULTAR DA FOSFORILAO DOS FATORES DE TRASCRIO NUCLEAR

Efeitos da insulina sobre a expresso gnica

Leva a ativao de uma protena cinase no ncleo Protena cinase fosforila protenas especficas de ligao ao DNA Capacidade de ao como fator de transcrio alterada
Esse mecanismo geral medeia os efeitos de muitos hormnios no esterides

MUITOS RNAms EUCARITICOS ESTO SUJEITOS A REPRESSO TRADUCIONAL

Principais mecanismos de regulao traducional

1 Mecanismo:

Fatores de iniciao da traduo esto sujeitos a fosforilao por protenas-cinases

Formas fosforiladas

Menos ativas

Represso geral da traduo na celula

Principais mecanismos de regulao traducional

2

mecanismo

Figura

28.35

Principais mecanismos de regulao traducional

3

mecanismo

Figura

27.27

O SILENCIAMENTO GNICO PS TRANSCRICIONAL MEDIADO POR RNA DE INTERFERNCIA

Micro-RNA (miRNA)
Presente

em eucariotos superiores: Nematoides, moscaa-das-frutas, plantas e mamferos

Interagem com o RNAm

Degradao do RNAm Inibio da traduo

Micro-RNA (miRNA)
Controla

o ritmo do desenvolvimento em alguns organismos contra invaso de vrus RNA

Protege

Pequenos

RNAs temporais (sRNAts. de small

temporal)

Interferncia de RNA
FIGURA

28.36

O DESENVOLVIMENTO CONTROLADO POR CASCATAS DE PROTENAS REGULADORAS

 Os

padres de regulao gnica que determinam o desenvolvimento do zigoto em um animal diferente do de uma planta multicelular desenvolvimento exige mudana precisamente coordenada na expresso gnica do desenvolvimento em laboratrio Nematides, mosca-das-frutas, peixe zebra, camundongos e a planta arabidopsis

Estudo

Ciclo de vida da mosca-das-frutas

FIGURA

28-37

Morfgenos

Produtos de genes reguladores de padro Protena que induzem o tecido prximo a tomar uma forma de estrutura peculiar
Genes Genes Genes

maternos de segmentao hometicos

Genes maternos

Expresso no ovo no fertilizado RNAms maternos dormentes at a fertilizao Suprem a maioria das protenas necessrias bem no incio do desenvolvimento os produtos desses genes estabelecem os eixos dorsoventral e anteroposterior

Genes de segmentao

Transcritos aps a fertilizao Dirigem a formao do numero apropriado de segmentos corporais Genes de ao em estados sucessivos

Genes de lacunas
Diviso do embrio em desenvolvimento geralmente regulada pelos produtos de um ou mais genes maternos Codificam fatores de transcrio que afeta outros genes de segmentao

Genes organizadores de pares e Genes de polaridade do segmento

Formam listras de segmento

Genes hometicos
Genes

Hox homeobox

Especificam

quais rgos ou apndices se desenvolvero em determinados segmentos do corpo. organizados em agrupamentos genmicos.

Esto

Genes hometicos
Figura

28-42