Maradei y otros Veterinary Microbiology 162 (2013) 479-490

Se han realizado estudios moleculares, antigenicos y de correspondencias vaccine matchingcon los virus vacunales El arbol filogenetico y los estudios monoclonales indican que el virus aislado en San Pedro en 2011 tiene marcadas diferencias con el virus O1/Campos y esta relacionado a los virus responsables de los brotes ocurridos en la region entre el 2000 y el 2006 Los niveles de anticuerpos protectores inducidos por la vacuna conteniendo el virus O1 Campos y estos virus actuantes en el campo indican una proteccion insuficiente a los 30DPV, que fueron obtenidos a los 79 dias DPV o despues de la revacunacion DPRV,

Caracterizacion Antigenica del virus O1/San Pedro/Par/11

Se ha establecido reducida correspondencia match con la cepa vacunal O1/Campos y mucha cercania con el O1/Corrientes/Arg/06

Analisis Seguencial y Filogenetico:

Diferencia de 18.6 % entre el O1/San Pedro y el O1/Campos
Se considera que una diferencia >10 % es suficientemente significativa

Por otro lado solo se encontro una divergencia media 8 % entre los virus emergentes en la region durante los brotes 2000 2006
Se consideran que todos estos (emergentes) estan emparentados y son de un

linaje unico

Estudios correspondencia matching in vitro:

Titulos de Anticuerpos (x neutralizacion de virus) en sueros de animales vacunados con O1/Campos: titulos VN EPP
Contra virus vacunal homologo (O1/Campos): 2.24 2.40 94.9 91.65 % Contra virus de campo: O1/San Pedro/Par/11: 1.32 48.87 % O1/Corrientes/Arg/06: 1.64 50.52 % Se estima que un valor de EPP 75 % dan bajos niveles de proteccion

Valores r(relacion: titulo contra virus heterologo /

Interpretacion: valores r

titulo contra virus homologo)

> 0.3 el virus de campo es suficientemente similar, la vacuna utilizada posiblemente va inferir proteccion < 0.3 el virus de campo es muy diferente, asi que es poco probable que la vacuna proteja

O1/San Pedro/Par/11: O1/Corrientes/Arg/06:

0.13 0.18

Esto indica una pobre relacion entre los aislados de campo y el virus vacunal(01/Campos)

Estudios correspondencia matching in vivo:

Se utilizo una vacuna comercial cuadrivalente (argentina) en animales locales (raza, nutricion, condiciones diferentes a la de nuestro pais)
75 % proteccion a los 79 DPV 87.5 % proteccion a los 79 DPRV

Sin embargo, ninguno de los animales alcanzaron niveles de proteccion (1.65 en VN) a los 30 DPV. Este (valores de VN 1.65 que corresponde a una proteccion esperada del 75 %)) es el standard pass mark requerido para la aprobacion de vacunas antiaftosa (PANAFTOSA)

Estos estudios son de vital importancia para:

Estimar la probable eficacia de la vacuna (cepa vacunal) en regiones endemicas, o en casos de emergencias sanitarias y donde una rapida inmunidad es de importancia critica Una actualizacion apropiada de las cepas vacunales, cuando sea necesaria, en un elemento importante para el control de la F.Aftosa, y necesario para la aplicacion de programas de vacunacion, asi como para el establecimiento y mantenimiento de reservas de vacunas/antigenos a ser usados en nuevos eventos de F. Aftosa Limitada informacion se encontraba disponible sobre las caracteristicas antigenicas de los virus. Los resultados descritos podrian mejorar el entendimiento de las reemergencias que ocurrieron en la region entre el 2000 2011, a pesar de los reportes sobre satisfactoria disponibilidad de vacunas para los programas de vacunacion y adecuadas coberturas de vacunacion.

La aparicion, aunque esporadica, de una variante de virus que se mantiene activo y evoluciona durante por lo menos 11 anos, apoya la idea que este virus esta presente solo en nichos restringidos y saltan cuando alcanzan una poblacion con bajos niveles de inmunidad contra las cepas de campo. Esta situacion, en una region libre de FA donde se aplica una vacunacion sistematica bajo un estricto manejo, no solo refuerza el requisito de fortalecer la vigilancia activa orientada a identificar aquellos nichos comunmente aceptados, sino para realizar una evaluacion completa de la efectividad del programa de vacunacion, incluyendo la evaluacion de la cobertura inmunologica conferida por la vacuna contra la variante (de campo) activa

Los resultados del sequenciamiento de los virus son muy apropiados para hacer seguimientos epidemiologicos, proveer informacion sobre las posibles fuentes de las cepas que causan los brotes, y, este caso sugiere al movimiento de animales como responsable por la diseminacion de la enfermedad a partir de potenciales nichos del virus. Ademas, los resultados obtenidos indican cambios caulitativos y cuantitativos en los virus de campo cuando se comparan al virus vacunal, lo que podria ser responsable por la pobre induccion de anticuerpos protectores por la cepa vacunal. Sin embargo, hasta el presente, no es posible predecir el impacto de los cambios geneticos y de aminoacidos sobre le comportamiento de los virus.

En efecto, se ha reportado que virus muy distantes pueden tener similares caracteristicas antigenicas y, contrariamente, virus con sequencias muy homologas pueden enmascarar grandes diferencias antigenicas. Haciendo evaluaciones mediante el uso de paneles de anticuerpos monoclonales, y de acuerdo a las diferencias encontradas en los analisis filogeneticos, se encuentran un bajo nivel de relacionamiento entre los virus de campo y la cepa vacunal. Esto apunta a algunas modificaciones antigenicas en las condiciones de campo, sugiriendo que esta ocurriendo una reversion o que dos distintos grupos virales estan coevolucionando en los nichos endemicos.

Los resultados obtenidos, que muestran que han ocurrido significativos cambios en relacion al virus vacunal, indican la necesidad de realizar evaluaciones para determinar hasta que punto la cepa actualmente en uso en la vacuna O1/Campos deberia proteger contra los virus de campo. Los resultados muestran valores para la relacion r por debajo del limite 0.3, indicando un bajo nivel de relacionamiento entre el O1/Campos y ambos virus de campo evaluados, sugiriendo que es poco probable que efectivamente proteja contra los aislados de campo. Tambien en linea a estos valores r, los calculos de espectativa de proteccion podal (EPP) revelan una pobre respuesta protectiva contra los virus de campo a los 30 DPV

Sin embargo, niveles de proteccion aumentados con valores EPP que se espera ofrezcan una proteccion satisfactoria, fueron observados a los 79 DPV. Aunque los maximos niveles de proteccion contra los virus homologos se observan entre los 30 y 45 DPV, hay datos experimentales insuficientes para las respuestas inmunes/protectoras contra virus heterologos, lo que podria estar influenciado por varios mecanismos: mutacion somatica, afinidad y avidez por anticuerpos, los cuales aun no son bien comprendidos. Tal lo esperado, la EPP para ambos aislados aumentan cuando son evaluados despues de la revacunacion.

Se considera a la prueba de proteccion cruzada in vivo (descarga en animales vacunados con el virus de campo) como la prueba mas contundente, sin embargo, los resultados solo se obtienen despues de mas de un mes, cuando que los resultados de la proteccion conferida por la vacuna deberia conocerse dentro de dias, para la toma de decisiones Los resultados obtenidos indican aque a los 79 DPV los niveles de proteccion calculados por EPP fueron satisfactorios. Esto va en linea con el hecho que luego del sacrificio sanitario de los animales afectados y los contactos, y el reforzamiento de los programas de vacunacion implementados en Paraguay despues del segundo evento en Enero 2012, la diseminacion del brote fue finalmente contenida.

Ademas, los muestreos serologicos realizados confirmaron la ausencia de actividad viral en las regiones libres del Cono Sur, incluyendo las areas de frontera, confirmaron que el brote fue restringido. Debe apuntarse, que los niveles estimados de EPP deben ser tomados con cautela, especialmente al tratarse de cepas heterologas La eleccion de cepas vacunales a ser utilizadas dependera de las circunstancias. En situaciones de emergencia, no es factible desarrollar inmediatamente una vacuna a partir de un aislado de campo, pero podria ser factible utilizar una cepa muy cercana La urgencia de aplicacion (en casos de emergencia) requerira vacunas formuladas a partir de bancos de antigenos.

Las reservas de antigeno se han convertido en una prioridad, mas aun considerando que cada vez es menos aceptado el scarificio sanitario para controlar la FA, mientras que las vacunaciones de emergencia son cada vez mas aceptados. No seria ni economicamente, ni logisticamente factible mantener antigenos vacunales en stock que sean pertinentes para cualquier situacion de brote. Por lo tanto, las reservas de vacuna/antigeno son establecidas basada en prioridades de acuerdo a los riesgos percibidos como mas probables En este sentido se necesitan mas estudios que indiquen la necesidad de incluir una cepa representatriva de los virus emergentes en el Cono Sur en bancos de antigenos.

En la seleccion de cepas (para su inclusion en la vacuna) no solo debe considerarse que la misma tenga un amplio espectro antigenico/inmunogenico, pero que tambien tenga capacidad de adaptarse para la produccion de vacuna. Los requerimientos para los estudios de correspondencia matching difieren para usos en emergencias o en profilaxis o prevencion. Cuando se utiliza en emergencias, se precisaria una mas estrecha correspondencia, especialmente en animales primovacunados cuando una rapida respuesta es esencial y cuando se evalua la incorporacion de un nuevo virus en el banco de antigenos/vacuna. Para las variantes de campo descritas en este trabajo, el uso de la cepa O1/Campos parece adecuada para profilaxis o prevencion, de acuerdo a los resultados de las pruebas in vitro e in vivo a los 79 DPV y DPRV

Sin embargo considerando los bajos valores r y EPP a los 30 DPV que indican una pobre proteccion, la conveniencia de incluir dicha variante en el banco de antigenos para uso en situaciones de emergencia requieren de mas estudios, incluyendo una prueba in vivo a los 30 DPV

A n t i c u e r p o s

Niveles de Anticuerpos y Proteccion Inducidos por la Vacuna

Vacunaciones

Cepa Heterologa Cepa Homologa Primovacunados Tiempo