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ENZIMAS - INTRODUO
1833:
Payen e Persoz: descobriram a converso do amido em acar pela saliva.
1850:
Louis Pasteur concluiu que leveduras catalisam a converso de acares em lcool.
1878:
Friedrich Wilhelm Khne cunha o nome "enzima", "en" = dentro e "zyme" = levedura.
1897:
Buchner descobriu que extratos de levadura podiam converter o acar em lcool, e que fermentos eram molculas.
1926:
J.B.Sumner cristaliza a primeira protena, urease, e demonstra que a atividade enzimtica uma caracterstica de molculas definidas.
enzima
Composto A (substrato)
Centro ativo ou stio cataltico de uma enzima a poro da molcula onde ocorre a atividade cataltica
Teoria da catlise
Considere as reaes:
A + B
v1 v-1
C v1 = v-1
- concentraes de todos os reagentes no se alteram mais - pode se dizer que a reao terminou Catalisador acelera as velocidades de ambos os lados da reao - o ponto do equilbrio atingido mais rpido - o ponto do equilbrio no se altera, ou seja [reagentes] e de [produtos] no final da reao so as mesmas da reao no catalisada
Teoria da catlise
Energia
Energia de ativao
Reao no catalisada
quantidade de energia que preciso fornercer aos reagentes para a reao ocorrer
Substrato (S)
Progresso da reao
Um Catalisador diminui a barreira energtica criando percursos alternativos da reao para formao do estado de transio.
E + S
ES
P + E
Que diferenas existem entre catalisadores inorgnicos, como ons metlicos, e as enzimas ? enzimas so mais eficientes: podem acelerar reaes at 1014 vezes contra
102 103 vezes dos catalisadores inorgnicos; enzimas so especficas: catalisam reaes envolvendo s vezes apenas um nico tipo de reagente; enzimas so estereo-especficas e no produzem sub-produtos reacionais; enzimas operam em condies amenas de temperatura, presso e pH; enzimas podem ser altamente reguladas atravs de fatores extrnsecos reao, tanto por ativadores como por inibidores.
Enzima
Anidrase carbnica
H2O2 H2O + O2
Reaes/segundo
Reaes/segundo
Poder cataltico
1.0 X 106
7.7 X 106
4.300 578 60 95
Nmero de turnover ou de renovao: quantas vezes a enzima completa o ciclo da reao em um segundo
Aumento da concentrao dos reagentes na superfcie da enzima: atrao dos reagentes para interao com a enzima).
Orientao correta dos reagentes (substratos): parte da energia de ativao representa o posicionamento adequado dos reagentes para que haja contacto entre os tomos corretos. O sitio ativo da enzima favorece o posicionamento correto dos reagentes. Aumento da reatividade dos reagentes: as cadeias laterais (R) dos aminocidos da enzima ou cofatores e coenzimas podem interagir diretamente com os substratos, dando-lhes carga eltrica ou polarizando-os, tornando-os quimicamente mais reativos, ou ainda cedendo ou transferindo certas funes qumicas. Induo de deformao fsica no substrato, por contacto com as cadeias laterais (R) dos aminocidos das enzimas, que desestabilizam a molcula do substrato e facilitam o rompimento de laos covalentes
3)
4)
lento A hidrlise no enzimtica de uma ligaolento rpido peptdica lenta e requer condies drsticas de pH e gua, temperatura um dos substratos
Sem catlise Catlise cida
rpido
Muito rpido
Catlise bsica
Catlise cido-bsica
Algumas protenas, enzimas em especial, contm em sua molcula uma poro no proteica, que essencial para atividade biolgica.
metal Distino entre cofator e coenzima depende da fora de ligao com a apoprotena. Ex: o NAD+ pode ser cofator de uma enzima (ligao fraca) e ser coenzima de outra (ligao forte). O mesmo ocorre com as metais.
Grupo prosttico
cofator coenzima
Enzima
holozima
Apoenzima
parte proteica
ativa
Grupo Prosttico
Coenzima
Reao com CO2 Grupos acil H e grupos alquil xido-reduo xido-reduo Grupos aminos Grupos aldedos unidades C
Vitamina Biotina c. Pantotnico Vitamina B12 Riboflavina Niacina Piridoxina Tiamina cido flico
inativa
Coenzimas participam do ciclo cataltico das enzimas recebendo ou fornecendo grupos qumicos para a reao
Intermedirio covalente
Enzimas com o mesmo tipo de mecanismo cataltico, ou seja, possuem o mesmo grupo de aminocidos no stio ativo, formam intermedirios covalentes similares
Transferncia de eltrons Se uma molcula se reduz, h outra que se oxida. grupos aldedo gupos acila grupos glucosil grupos fosfatos (quinases) Transformam polmeros em monmeros. Atuam sobre: Ligaes ster Ligaes glicosdicas Ligaes peptdicas Ligaes C-N Entre C e C Entre C e O
Entre C e N
Modelo Chave-Fechadura
Formas rgidas
Modelo Chave-Fechadura
E e S se deformam, para otimizar o encaixe
Em B: A ligao do substrato dipeptdico glicil-L-tirosina (em verde) causa uma profunda mudana conformacional nas vizinhanas do stio ativo da carboxipeptidase A. Clique com o mouse para observar a re-orientao da posio da Tyr248 em relao outra figura.
A Ser-195 transfere H+ para His-57 formando um estado de transio tetradrico com o substrato. O Asp-102 estabiliza o prton na His57 fazendo uma ligao inica
A H2O transfere H+ para a His-57 e OH para o substrato, formando um segundo estado de transio tetradrico
O H+ transferido da His57 para o substrato. A ligao susceptvel clivada, e parte do substrato fica ligado covalentemente enzima
O H+ transferido da His-57 de volta para a Ser-195. A outra poro do substrato liberada da enzima, que retorna ao estado inicial
Vrios so os fatores que afetam o funcionamento das enzimas como catalisadores. Alguns desses fatores so decorrentes da natureza proteica das enzimas, como o efeito do pH e da temperatura. Para se estudar o efeito isolado de um dos fatores acima, necessrio que todos os outros fatores sejam mantidos fixos.
Fatores que controlam a atividade enzimtica: 1. Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas Variaes de pH: pH timo
O pH timo de uma enzima reflete variaes no estado de ionizao de resduos de aminocidos do stio ativo. A enzima est pelo menos parcialmente desnaturada em pHs afastados do pH timo. Quando o substrato uma molcula ionizvel, o pH timo da enzima tambm reflete o seu estado de ionizao .
pH timo=1,5 pH timo=6,8 pH timo=9,9
50-
0-
Ao contrrio da curva em forma de sino no caso da atividade enzimtica versus pH, a enzima s est desnaturada em temperaturas acima da temperatura tima.
concentrao
tempo
ENZIMAS CATALISADORES
Atuam em pequenas concentraes
decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min
1 molcula de Catalase
Nmero de renovao = n de molculas de substrato convertidas em produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.
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ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA
Enzyme Commission: uma unidade (U) de atividade a quantidade de enzima que catalisa a transformao de 1 micro mol de substrato ou a formao de 1 micro mol de produto por minuto. Expressa: U = micro moles produto/minuto Atividade especfica = U/mg de protena Enzima pura, condies que permita a velocidade da reao seja mxima o substrato [S] de modo a permitir que toda a enzima [E] [ES]. V = K[E] = K[ES]
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