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Histria da Biologia Molecular

Prof. Dr. Francisco Prosdocimi franciscop@ucb.br

DE QUE TRATA A BIOMOL?

DE QUE TRATA A BIOMOL?


Gentica + Bioqumica Transmisso de caracteres Hereditariedade Qumica de protenas Metabolismo e homeostase Funcionamento da vida em nvel molecular Reducionismo

A complexidade da vida

EVOLUO DAS IDIAS

Como um campo multidisciplinar, como a evoluo das idias culminou na biologia molecular moderna?

Ernst Mayr

A evoluo das idias nos permite entender de onde veio esse conhecimento Compreender como ele se estruturou Questionar sua veracidade, identificar pontos falhos Pensar melhor para onde ele vai Integrao do pensamento biolgico num todo coerente e harmnico
Franois Jacob

EVOLUO DAS IDIAS


Top-down Da maior complexidade para a menor Deconstruo Gentica / Bioqumica

Bottom-up
Da menor complexidade para a maior Construo A estrutura dos cidos nuclicos

O caminho da gentica
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi franciscop@ucb.br
http://biotec.icb.ufmg.br/chicopros

HERANA POR MISTURA


Da Grcia at Darwin Herana acontecia por mistura Lamarck: transmisso dos caracteres adquiridos

HEREDITARIEDADE
Foi contemporneo de Darwin, mas jamais se encontraram...

Herana particulada Monge austraco

Publicou Experimentos sobre a hibridizao de plantas em 1865 e foi citado apenas 3 vezes nos 35 anos que se seguiram! Morreu sem ser reconhecido, estava muito frente de seus contemporneos

Gregor Mendel (1822-1884)

DESCOBERTAS DE MENDEL
As caractersticas hereditrias so

condicionadas por pares de fatores hereditrios. Plantas puras so portadoras de apenas um tipo de fator (homozigoto), enquanto plantas hbridas so portadoras de dois tipos (heterozigoto). Cada gameta portador de apenas um fator para cada caracterstica

LEIS DE MENDEL
Os dois alelos de cada gene

presente em um indivduo segregam-se (separam-se) na formao dos gametas

Os alelos de dois ou mais genes de um indivduo segregam-se independentemente, combinando-se ao acaso nos gametas

LEIS DE MENDEL
Os dois alelos de cada gene presente em um

indivduo segregam-se (separam-se) na formao dos gametas Os alelos de dois ou mais genes de um indivduo segregam-se independentemente, combinando-se ao acaso nos gametas.

RE-DESCOBERTA DE MENDEL
1900 - Carl Correns and Hugo de Vries
Correns: publicou um trabalho em 1900 sobre hibridizao citando Mendel e Darwin De Vries: publicou um trabalho sobre hibridizao de plantas sem citar Mendel Refutao do darwinismo (enquanto gradualismo)
Botnico alemo 1864-1933 Correns Botnico holands 1848-1935 De Vries

SUTTON-BOVERI
Sutton (1902-3) mostrou, atravs de estudos em clulas germinativas de gafanhotos, que os cromossomos eram responsveis pela base fsica da herana mendeliana
Cromossomos em pares segregam-se na meiose
Walter Sutton 1877 - 1916

THOMAS H MORGAN
Teoria cromossmica da herana
Gentica de drosfila

Explicava a modificao das caractersticas em populaes ao longo do tempo


Integrou, finalmente, Mendel e Darwin

BEADLE E TATUM
Garrot (1902) Alcaptonria: urina escura Incapacidade de degradar a alcaptona Erros no metabolismo seguiam padres mendelianos 1941: Isolamento de mutantes para cor do olho em drosfila e para auxotrofia em Neurospora Vrios mutantes diferentes que se complementavam Vias metablicas Gentica fisiolgica Estudar as bases fisiolgicas e bioqumicas das caractersticas herdveis Um gene-uma enzima

MAS DE QUE FEITO O GENE?


Resposta de 1940: s pode ser de protena Polmero complexo, realiza funes catalticas (ou seja, funciona como enzima) Provavelmente desempenha as principais funes celulares, atuando como mquina molecular E os cidos nuclicos? No podem ser, so molculas muito simples e presentes em quantidades muito pequenas dentro da clula DOGMA: ningum questiona a afirmativa, era difcil mesmo encontrar algum que trabalhasse com cidos nuclicos poca Procura-se explicar a hereditariedade a partir de protenas

Descrio moderna da clula, poca mal sabiam o que tinha l

AVERY, MACLEOD, MCCARTY

AVERY, MACLEOD, MCCARTY


Griffiths (1928) Princpio transformante era passado da Oswald Theodore Avery cepa virulenta (morta) para a no-virulenta, 1877 1955 matando os camundongos 1944: os trs pesquisadores mostraram que seu princpio transformante continha composies qumicas tais quais a do DNA Ceticismo: Alfred Mirsky disse que o DNA de AMM deveria estar contaminado com protenas... Poucos bilogos poca achavam que a gentica podia ser aplicada s bactrias, posto que elas reproduziam assexuadamente e no tinham cromossomos Lederberg e Tatum, entretanto, publicaram um artigo sobre a conjugao bacteriana (1946)

HERSHEY E CHASE
Infeco por bacterifagos Marcao radioativa de Martha Cowles Chase Alfred Day Hershey 1927 2003 19081997 DNA e protenas do bacterifago T2 (1952) Enquanto a frao protica ficava no sobrenadante, a frao de cidos nuclicos podia ser vista posteriormente dentro da bactria Confirmao final de que era atravs do DNA que as informaes sobre hereditariedade eram passadas

HERSHEY E CHASE

DNA marcao com P-radioativo Protena marcao com S-radioativo

CONCLUSO: GENTICA
A herana biolgica est codificada em pares de fatores Genes em organismos diplides Tais fatores esto nos cromossomos e so feitos de DNA A hereditariedade agora podia ser explicada pela transmisso de molculas

Morte do Vitalismo e integrao da biologia metodologia rgida de trabalho das cincias exatas

O caminho da qumica de protenas


Prof. Dr. Francisco Prosdocimi franciscop@ucb.br
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LOUIS PASTEUR
1835: Berzelius, conceito de catlise 1885: fermentao do accar por lvedos, gerando lcool Vitalismo: o mgico lan vital
Louis Pasteur 1822-1895

1896: Edward Buchner consegue fermentar o acar num extrato de lvedo sem vida! Fermentos, portanto, catalisavam reaes qumicas (acar a lcool) biocatalisadores Enzima vem do grego , cuja traduo no lvedo

EMIL FISCHER
Sacarase
Quebra da sacarose em glicose e frutose
Hermann Emil Fischer 1852 - 1919

Produziu diversos anlogos de sacarose para testar se a enzima funcionava Determinadas mutaes tornavam os anlogos resistentes sacarase Modelo de ao enzimtica chave-efechadura

ENZIMAS SO PROTENAS?
Qual a natureza das enzimas?
James Batcheller Sumner O qumico orgnico alemo Richard 1887-1955 Willsttter (18721942) ganhador do Nobel pela estrutura da clorofila conseguiu separar o componente enzimtico de um preparado biolgico e no encontrou nenhuma protena!

1926 (EUA) J Summer cristaliza a urease e conclui: enzimas so protenas! Willstater criticou os resultados

SIM! MAS COMO FUNCIONAM?


Kunitz e Northrop
Eletroforese e centrifugao: enzimas esto na frao protica! Mesmo em quantidades protecas indetectveis pelos mtodos, as enzimas continuavam tendo atividades
John Howard Northrop 1891-1987

Como as milhares de reaes catalticas eram possveis a uma protena?

POLMEROS DE AMINOCIDOS?
1902: Emil Fischer (Estrasburgo) e Hofmeister (Berlim), protenas eram formadas de aminocidos que, ligados por ligaes peptdicas, formavam cadeias polipeptdicas

FINALMENTE, SANGER
1952
Publica a primeira estrutura primria de uma protena: a Insulina, com 51 aminocidos Frederick Sanger 13 August 1918 O trabalho mostrava tambm que a estrutura das protenas poderia ser descrita pela sua sequncia de aminocidos, do N ao C terminal A sequncia, entretanto, no ajudava a prever a funo da protena (antes da bioinformtica)

CONCLUSO: BIOQUMICA
As enzimas realizam reaes catalticas e transformam molculas umas nas outras Os organismos biolgicos so ricos em enzimas e as enzimas funcionam tambm fora dos organismos biolgicos biotecnologia! As enzimas so protenas formadas por polmeros de aminocidos A multiplicidade de funo se d pela interao tridimensional formada (modelo chave-fechadura) por interaes no-covalentes a partir de uma srie de aminocidos ligados covalentemente (ligao peptdica)
>gi|386828|gb|AAA59172.1| insulin [Homo sapiens] MALWMRLLPLLALLALWGPDPAAAFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKTR REAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQKRGIVEQCCTSICSLYQLENYCN

O caminho da estrutura dos cidos nuclicos


Prof. Dr. Francisco Prosdocimi franciscop@ucb.br
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ISOLAMENTO DO DNA
1869: Isolamento de compostos ricos em fosfato de amostras de pus de bandagens mdicas
Chamou o composto de nuclena, uma vez que ele se encontrava no ncleo das clulas

Johannes Miescher 1844-1895 Fsico e bilogo Suio

COMPONENTES DO DNA
Mdico russo, muda para os EUA em 1893 Estudou estrutura dos cidos Phoebus Aaron T Levene (18691940) nuclicos no instituto Rockfeller (NY) Descobriu a ribose em 1909 e a desoxiribose em 1929 Sugeriu a estrutura dos nucleotdeos, como fosfato-accar-base Ele acreditava que cada molcula tinha quatro nucleotdeos

DNA era feito de quantidades iguais de A, G, CeT Phoebus: No poderia carregar a informao gentica pq muito simples! Genes seriam feitos de protenas?
Diagrama molecular de um tetranucleotdeo hipottico, proposto incorretamente por Phoebus Levene por volta de 1910

GENES SO FEITOS DE PROTENAS?


Papa da estrutura do DNA (Levene) diz que a molcula era muito simples para ser responsvel por carregar a informao gentica DOGMA: ningum questiona a afirmativa Procura-se explicar a hereditariedade a partir de protenas 1944: Avery, MacLeod e McCarty reinterpretam o trabalho de Griffiths: DNA o princpio transformante Erwin Chargaff l o trabalho e decide trabalhar com DNA

REGRAS DE CHARGAFF
Primeira regra (~1950)
Verificou que, na verdade, a quantidade G era igual de C; e a quantidade de A, igual de T. No DNA humano, as porcentagens eram: A=30.9% T=29.4% G=19.9% C=19.8%
Erwin Chargaff 19052002

Segunda regra (~1950)


A composio de bases do DNA varia de espcie para espcie com relao porcentagem de A, C, G e T Esta diversidade molecular (antes desconhecida) fazia com que o DNA fosse um candidato mais plausvel para carregar a informao gentica (do que as protenas)

LINUS CARL PAULING


Ganhador de dois prmios Nobel Qumica: hibridizao de orbitais 1s22s22p6 Paz: 1962, contra testes nucleares 1951: publicao da estrutura das alfas-hlices 1953, Nature Publicao da estrutura do DNA como uma hlice tripla, contendo as bases voltadas para fora Culpou as imagens, que eram melhores na Inglaterra
19011994

ROSALIND FRANKLIN
Biofsica inglesa Francis Crick: o dado que ns realmente usamos Se ela teve o dado nas mos primeiro, por que no publicou um modelo com a estrutura? Modelo = estrutura helicoidal (??)
Rosalind Franklin 1920 1958

WATSON & CRICK


Preldio: 1952
Desde o dia de nosso primeiro encontro, Crick e eu pensamos que seria altamente provvel que a informao gentica do DNA fosse codificada pela sequncia de quatro bases

Sabiam da proporo G=C, A=T O fsico-qumico Jerry Donohue conta a Watson que a estrutura publicada para a Guanina era apenas possvel, mas que uma estrutura cetnica tambm era bastante provvel

WATSON & CRICK


No momento que vimos como construir uma dupla hlice a partir das quatro bases, estava claro que as particularidades de um gene deveriam residir na sua sequncia de pares de bases O que ficou claro com o modelo: Replicao, transcrio, codificao da informao hereditria,

CONCLUSO ESTRUTURA
O DNA a molcula transmissora da hereditariedade O DNA contm a informao gentica para fazer novos organismos Como ele faz isso? Codificando enzimas e protenas estruturais que faro os organismos transcrio e traduo

CONCLUSO GERAL
A biologia molecular revolucionou o estudo da biologia pois permitiu verificar que o cdigo de transmisso da hereditariedade digital O rigor das cincias exatas pde ento ser aplicado aos estudos do mundo natural O vitalismo morre e passa-se a ser possvel explicar a biologia atravs da fsica e da qumica A revoluo alcanou todas as reas de biologia e desafiase o aluno a sugerir algum trabalho em biologia que no possa ser melhor desenvolvido com a ajuda da biomol Depois da dcada de 70 comeou-se a poder manipular os organismos vivos transgnese

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