MEDIOS DE CULTIVOS

Los componentes de los medios de cultivo son de naturaleza qumica, desempean un rol esencial en los procesos porque requerimientos del crecimiento formacin de productos suministrar energa para la sntesis de metabolitos y mantenimiento celular.
CAROLINA VITA

Diseo y optimizacin de medios de cultivo

Optimizacin de la expresin celular: Produccin de algn producto Aumento de produccin de biomasa Mejorar la velocidad o rendimiento de algn producto

Efectores que intervienen en el crecimiento y formacin de productos

gentica que posee el MO. Puede ser modificada por el agregado o extraccin de genes. Efectores extracelulares son los factores del entorno que pueden modificar la expresin: fsicos y qumicos

Efectores intracelulares : informacin

Efectores extracelulares

Fisicoqumicos

Relacionados con las caractersticas del sistema de cultivo

Agitacin Aeracin formacin de espuma nutrientes del medio de cultivo

pH presin osmtica estado redox parmetros fsicos como T y P

Categorias de nutrientes

Macronutrientes [ g/l ] Micronutrientes o elementos trazas [mg/l o g/l]

Representados por: fuentes de C, N, S, P, K y Mg;

Representados por: sales de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co Factores de crecimiento componentes orgnicos suministrados en [] no son sintetizados ni metabolizados por las clulas, son incorporados a estructuras celulares y de funcin metablica especfica, como vitaminas, aa, cidos grasos no saturados, etc..

Clasificacion de medios
1.

Por naturaleza qumica de los componentes,

medios sintticos o medios qumicamente definidos 2. medios complejos en cuya composicin son sustancias de origen animal o vegetal como peptonas, extracto de levadura, macerado de maz, harina de soja, etc. qumicamente indefinidas y de composicin variable.

Diseo

Finalidad: eleccin de los componentes necesarios para lograr el crecimiento y la formacin de productos Debe tener en cuenta: los requerimientos nutricionales del MO la disponibilidad real de los componentes

Requerimientos nutricionales
Los requerimientos nutricionales estn determinados por el tipo de metabolismo celular

Autotrfico: MO que obtienen el carbono del C02 (algas y algunas bacterias) heterotrficos: necesitan compuestos orgnicos como fuente de carbono

Otro factor esencial es el 02( aerobico o anaerobico) Las fuentes de carbono cumplen tambin el rol de ser fuente de energa.

Requerimientos nutricionales
Fuentes de nitrgeno

De naturaleza inorgnica u orgnica. Es utilizado para la biosntesis de protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared celular.

Requerimientos nutricionales
otros macronutrientes como el P y el S son suministradosen forma de P04 H y S04 (o aminocidos azufrados). El P se incorpora en cidos nucleicos, y polmeros celulares. El S es asimilado para la sntesis de aa azufrados, y adems se necesita para la biotina, coenzima A, tiamina y otros componentes.

Requerimientos nutricionales

K y Mg son esenciales

Una parte importante del K est unida al RNA El in K actua como coenzima y probablemente acta como catin en la estructura aninica de varios componentes celulares. El in Mg es esencial para la estabilidad de los ribosomas y actua como cofactor en numerosas reacciones del metabolismo. K y Mg se incorporan como sales de fosfato y sulfato.

Requerimientos nutricionales
los micronutrientes se distinguen 2 categoras 1. frecuentemente esenciales para el crecimiento como Ca, Mn, Fe, Co, Cu y Zn y b) 2. raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se, Mo, Sn, e I. A veces es difcil demostrar un requerimiento de un micronutriente porque generalmente est presente en suficiente cantidad como impureza de los componentes principales.

Disponibilidad de los componentes

Los nutrientes adems de estar presentes en el medio de de cultivo, deben estar disueltos para estar disponibles para ser usados por la clula. POR QU PUEDEN NO ESTAR DISPONIBLES? la esterilizacin por calor. Se debe tener en cuenta la T, tiempo de calentamiento, pH del medio reacciones entre componentes antes, durante o despus de la esterilizacin

Disponibilidad de los componentes

Es importante tener en cuenta la naturaleza de los compuestos orgnicos que tienen capacidad para actuar como ligandos, y el ion metlico considerado

Importante: [ ] libre del in

Modificacin de la calidad nutricional de un medio de cultivo durante la esterilizacin

Los cambios que se producen durante la esterilizacin pueden ser importantes A veces puede haber modificaciones beneficiosas o perjudiciales dependiendo del tiempo de esterilizacin.

Modificacin de la calidad nutricional del medio por la esterilizacin

Los aa y factores de crecimiento son muy lbiles al calor. puede sufrir descomposicin.

se recomienda esterilizarlas por filtracin. Las sales de NH4 + se deben autoclavar a pH 7 o menor se volatiliza. La esterilizacion por calor depende tambin de la T, duracin del calentamiento, pH del medio, y de la agitacin.

Los HPO4 utilizados como fuente de P y buffer deben esterilizarse separados de las sales de Mg, con Na, K y NH4 NaMgPO4 NH4MgPO4 poseen baja solubilidad KMgPO4

Los PO4 deben esterilizarse separadamente de las sales de Mg y NH4

Los azcares pueden descomponerse por la accin del calor en presencia de sales inorgnicas y compuestos amnicos. sales, H+ sacarosa hidroliza

Los grupos carbonilos de los azcares con los grupos amino de las protenas, aminocidos, etc., dan productos de condensacin (reaccin de Maillard), los cuales disminuyen significativamente las cantidades de carbohidratos y N amnico disponible. azcares reductores + -NH2 condensacin
Los carbohidratos se deben esterilizar por separado de los compuestos nitrogenados orgnicos.

Disponibilidad de los nutrientes

Es aconsejable entonces, esterilizar los componentes de los medios de cultivo en fracciones separadas:

Fraccin 1: Fte. de C, micronutrientes, sales de Mg, Ca, etc. Fraccin 2: Fte. de N en caso que se descomponga por calor (urea) debe esterilizarse por filtracin, o en caso de que reaccione con la fuente de C puede esterilizarse por calor pero separadamente. Fraccin 3: Vitaminas y factores de crecimiento. Se preparan soluciones 1000 veces mas concentradas y se esterilizan por filtracin. Fraccin 4: Fosfatos, se esterilizan por calor.

Materias primas fundamentales

Los componentes empleados en la industrias: costo disponibilidad estabilidad en su composicin qumica el costo de los nutrientes representa entre al 10 y el 60% del costo total de mucho productos obtenidos por fermentacin

Materias primas fundamentales

Las fuentes de carbono pueden 1. Hidratos de carbono como glucosa o dextrosa, sacarosa, lactosa, almidn, dextrina; 2. Alcoholes como el glicerol y manitol 3. Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros.

Materias primas fundamentales

Las fuentes de nitrgeno
Inorgnica: amonaco o sales de amonio. Las orgnicas estn representadas por varios productos, como ser: 1. Hidrolizados de protenas (Peptonas) que son obtenidas por hidrlisis cida o enzimtica de distintas fuentes proteicas como carne de animales, pescado, casena, gelatina, harina de soja, algodn, girasol,etc..

Materias primas fundamentales

Extracto de carne, que se obtiene por extraccin acuosa y concentracin posterior 3. Extracto de levadura, que puede ser obtenida mediante autlisis o plasmlisis de la levadura, 4. Extracto de malta, que es el extracto soluble en H2O de la malta de la cebada 5. "Cornsteep", el agua de maceracin de la industria del maz se utiliza como componente esencial de los medios para la produccin de antibiticos y enzimas.
2.

Diseo, Formulacin, Optimizacin de medios de cultivo

Diseo: Eleccin de los componentes necesarios para lograr el crecimiento y la formacin de productos Formulacin: Proporciones, concentraciones de cada componente. Optimizacin: Encontrar la mejor formulacin para lograr el objetivo (mx biomasa, producto, etc.)

Formulacin
La formulacin tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los medios establecer las concentraciones de cada componente a ser utilizadas.

Optimizacin

1. 2.

3.

4.

Pueden ocurrir situaciones en las cuales sea imperativo la optimizacin de los medios de cultivo. Podemos mencionar las siguientes: Existencia de limitaciones nutricionales ocultas (microelementos y factores de crecimiento) Uso de medios con exceso respecto de los requerimientos nutricionales del mo que pueden causar inhibicin del crecimiento. Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e inhibidoras del crecimiento y formacin del producto. Empleo de fuentes nutricionales no convencionales.

Optimizacin
La metodologa ms elemental consiste en realizar experimentos, en los cuales se vara la [] del componente a ensayar mantenindose constante las [] de los dems. Para organismos aerobios generalmente se utiliza como sistema de cultivo erlenmeyers agitados. se analiza el efecto de la variable escogida sobre la velocidad de crecimiento y la [] de biomasa obtenida.