Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois Programa de Ps-Graduao Stricto Sensu em Tecnologia de Processos Sustentveis

Avaliao da Contaminao da gua por hormnio em matriz biolgica

Orientador: Prof. Dr. Fernando Schimidit Colaboradora: Prof. Dra. Simone Sabia UFG ICBIV Laboratrio de Comportamento Celular Linha de Pesquisa: Fontes Alternativas de gua

Sustentabilidade
Preocupao mundial Economia de gua Controle de qualidade da gua Descontaminao de guas

Poluentes emergentes
Agrotxicos Influenciadores, indutivos ou obrigatrios Hormnios Concentrao em ngL-1

Micropoluentes
Formas ativas Bioacumulativas Disruptores Endcrinos, Exgenos e Endgenos Sistema de tratamento insuficiente

Hormnios
Esterides Obrigatrios Deficincia ou excesso Naturais e sintticos

Tibolona
Hormnio Sinttico (Rymer, 2002) Esteroide com funo exgena e endgena (British Pharmacopeia, 2010) Possui atividade especfica em diferentes tipos de tecido (Kenemans e Speroff, 2005) Indicado para mulheres na menopausa com no mnimo um ano aps o ultimo evento menstrual. (Rymer, 2002)

Tibolona
Administrado via oral em doses de 2,5 mg dirias

Possui mnimos efeitos colaterais

Pode ser utilizado em mulheres com cncer de mama Corta efeito de ondas de calor, ressecamento vaginal, protege os ossos, aumenta ndice de HDL, diminui triglicrides e doenas cardiovasculares. Efeitos equivalentes a: Etinilestradiol, Gestodeno e Estrgenos conjugados.

Tibolona
Aumento de prescrio mdica Nenhum trabalho relacionado a presena deste hormnio na natureza Nenhum trabalho publicado com matriz biolgica contaminada com este hormnio Livial - Supera, Klimater (S) Cifarma, Libiam (S) Libbs, Livolon (S) Biolab Sanus, Farmcia Magistral

Poecilia Reticulata
Barrigudinho ou Guppy Variam de tamanho de 2 a 5 cm Os machos so mais coloridos e vistosos porm de menor volume corporal. As fmeas so mais simples e maiores.

Peixes pacficos, de fcil reproduo e resistentes a poluentes

Alteram suas caractersticas biolgicas e metablicas para se adequar ao ambiente. Aceito mundialmente como indicador biolgico em estudos cientficos

Objetivo Geral

Avaliao da resposta de peixes vivendo em ambiente contaminado pelo hormnio sinttico conhecido comercialmente como Tibolona.

Objetivos Especficos
Avaliar toxicidade da Tibolona em guas de rios Avaliar a influncia da presena de disruptores endcrinos em peixes e o ciclo de vida Determinar concentrao letal da Tibolona para o Guppy

Determinar formas de contaminao sofrida pelos peixes

Avaliar impacto da contaminao em rgos vitais e sistema reprodutivo Avaliar degradao natural da Tibolona em guas de rios

Experimentao
Disposio dos animais

Comunidade
Cada comunidade composta por 4 machos e 4 fmeas.
[CELLRANGE]; [CELLRANGE]; [PORCENTAGEM] [PORCENTAGEM]
Grupo Controle Grupo Controle Negativo

[CELLRANGE]; [CELLRANGE]; [PORCENTAGEM] [PORCENTAGEM]

Grupo Exposio Lquida Grupo Exposio Matria Prima

Experimentao
Esquema do sistema

Figura 1: Esquema dos aqurios em linha

Sistema Utilizado UFG Laboratrio de Comportamento Celular

Imagem 1: Disposio dos aqurios

Experimentao
Esquema do sistema

Os peixes foram alocados aleatoriamente Evitar influencia de luminosidade e temperatura Os grupos foram separados linhas

Figura 2: Esquema dos aqurios em paralelo

Imagem 2: Aqurios em paralelo

Experimentao
Coleta dos peixes: Piscicultura na ETE de Goinia Aclimatao 1: gua sem cloro e oxigenada 48 horas Separao de machos e fmeas Aclimatao 2: Peixes so transferidos para aqurios limpos e descontaminados onde sero expostos Contaminao do ambiente e observao por 24 horas. Sacrifcio e Fixao

Experimentao
Expectativas do experimento
Concentrao 6,25 e 3,14 g/mL Volume de solvente (MeOH): 5,0 mL Volume de gua: 4 litros Tempo de exposio esperado 24 horas Expectativas e Pontos a serem avaliados:
Concluso do Tempo de Exposio Alteraes comportamentais Alteraes bioqumicas em tecido e endcrino Alteraes em nveis celulares de fgado, brnquias e gnada.

Resultados 6,25 e 3,14 g/mL

Alteraes Comportamentais do Grupo Controle
O grupo controle no apresentou nenhum tipo de alterao do comportamento do animal.

Resultados 6,25 e 3,14 g/mL

Alteraes Comportamentais do Grupo Controle Negativo
Aumento de agressividade nas primeiras 5 horas de observao Aumento na velocidade de deslocamento do animal pelo aqurio Normalizao do efeito aps as 5 horas de exposio

Para exposio em concentrao de menor no houve alterao no comportamento dos peixes

Resultados 6,25 g/mL

Alteraes comportamentais do Grupo Exposio Lquida
Para Fmeas:
30 min - Defecao 1h Permaneceram na superfcie 2h 2 animais estavam nadando freneticamente 4h todas as fmeas nadavam muito lentamente 6h perca do senso de equilbrio, nadando curvado 7h Nadavam para trs 8h Midrase e se chocavam contra as paredes do aqurio 9h - Morte

Alteraes comportamentais do Grupo Exposio Lquida

Para Machos:
1h 2 animais nadavam freneticamente 2h Todos com midrase e se chocavam contra o aqurio nadavam sem direo e sentido. 3h Escurecimento do corpo 4h - Morte

Resultados 3,14 g/mL

Para as Fmeas
Defecaram assim que entraram em contato com a substncia Leve alterao de cor Sem alterao aparente de comportamento

Para os Machos
Midrase em 2 horas Alterao de cor Leves mudanas de comportamento na 5 primeiras horas

Resultados 6,25 e 3,14 g/mL

Alteraes Comportamentais do Grupo Exposio Matria Prima
30 min Comportamento normal, os animais comeram a Tibolona em p 2h Os animais permaneciam imveis. As Fmeas na Superfcie os Machos no fundo.

4h Os animais estavam imveis: Os Machos na superfcie e as Fmeas no fundo.

6h Permaneceram imveis e aglomerados at o fim do experimento. No houve morte.

Comportamento

Imagem 3: Grupo Tibolona dissolvida - machos

Comportamento

Imagem 4: Grupo Tibolona matria prima - machos

Sacrifcio
Pesagem: Bquer com gua tarado Medio de tamanho: Paqumetro
T Tamanho TP Tamanho Total ou Padro

Dessecao Fixao: Paraformoldedo

Experimentao e Resultados
Peso (mg) Macho Fmea

Mdio
Mximo Mnimo Tamanho Total (mm) Mdio Mximo Mnimo Macho

96,4
216,6 53,3 Fmea 1,9 2,7 1,6

211,3
425,0 109,3 2,5 3,4 2,0

Tamanho Parcial (mm) Mdio

Mximo Mnimo

Macho
1,4 2,1 1,0

Fmea
1,9 2,6 1,4

Experimentao e Resultados
Fgado:
3 das 6 Fmeas do Grupo Exposio Lquida apresentaram escurecimento do fgado e uma com fgado se desintegrando 3 Machos e duas fmeas do Grupo Exposio Matria Prima apresentaram fgado plido.

Brnquias: Sem Alterao Gnada: Sem alterao Vescula Biliar: 85% dos peixes estavam com Vsicula Biliar com tamanho alterado Determinao da concentrao letal: 6,25 g/mL

Experimentao e Resultados

Imagem 5: Peixes sacrificados e fixados em reagente

Imagem 6: Micrografia das brnquias do grupo controle

Imagem 7: Micrografia das brnquias do grupo tratado

Imagem 8: Micrografia do Fgado do grupo controle

Imagem 9: Micrografia do Fgado do grupo tratado

Prximas etapas
Avaliao celular de rgos Fixados em Paraformoldedo. Exposio de 96 horas Exposio de 24 e 96 horas para grupos mistos Dessecao e fixao de Orgos para avaliao celular Avaliao da degradao da tibolona
Bsica, cida, Oxidativa, Trmica, Fotoestabilidade e Umidade

Investigao e avaliao de tibolona presente nos tecidos dos animais

Concluso ao fim do Experimento

As Fmeas tem maior tolerncia ao hormnio
Peso e aumento de metabolismo

Os machos sofrem efeito maior e mandam respostas mais rpidas a exposio

O etanol no apresente grandes efeitos

A Tibolona em p parece no ter grande efeito sobre os peixes A Tibolona dissolvida em etanol tem efeito devastador Maiores concluses a nvel celular

Referncias
Schiavini,J; CARDOSO, C.; RODRIGUES, W. Desreguladores Endcrinos no Meio Ambiente e o uso de Potenciais Bioindicadores. Revista Eletronica TECCEN, Vassouras, v.4, n.3, p.33-48. set-dez, 2011. SANTANA,J. A ameaa dos desruptores endcrinos. Agraecol. E Desenv. Rur. Sustent., Porto Alegro. v.2 n.3, jul/set 2011.

BILA, D.M.; DEZOTTE, M. Desreguladores endcrinos no meio ambiente: efeitos e consequncias. Univerisdade Federal do Rio de Janeiro, 2007.
GUIMARAES, J.R.P.F. Desreguladores Endocrinos no meio ambiente: um problema de sade pblica e ocupacional. 2005 KLOOSTERBOER, H.J. Tissue-selectivity the mechanism of action of tibolone. NV Organon Research and Development Laboratories P.D box.20. The Netherlands, 2004. RYMER, J. Why Tibolone is Different? Guys St Thomas Hospital, Guys St Thomas School of Medicine, United Kigdoom, 2002. KENEMANS, P.; SPEROFF, L. Tibolone: Clinical recommendations and pratical guidlines a report of the Internetional Tibolone Consensees Group. Oregon Health Sciences University, Portland, USA. 2004.

ALBERTEZZI,P. RAFFAELE, M. ZANARDI, E. Tibolone a Review. Centro di Fisiopatologia dela Menopausa, Bologna, Itally. 2004