3.3.3 Columnas y fases estacionarias 3.3.

4 Detectores

Columnas y fases estacionarias

COLUMNAS: las columnas para cromatografa liquida

de alto rendimiento se empacan dentro de tubos de acero inoxidable para resistir las altas presiones que se usen.los dimetros internos tpicos del tubo son de 3 a 10 mm y sus longitudes son de 10 a 30 cm.

Detectores
DETECTORES DE FLUORECENCIA DETECTORES ELECTROQUIMICOS AMPERO

METRICOS DETECTORES ELECTROQUIMICOS DE CONDUCTIVIDAD DETECTORES DE INFRARROJO DETECTORES DIFERENCIALES DE INDICE DE REFRACCION DETECTOR DE DISPERCION LUMINOSA EVAPORATIVA

Detectores de fluorescencia
Los detectores de fluorescentes permiten contar con mayor nivel

de selectividad respecto a compuestos no fluorescentes. Para irradiar la muestra en una celda de flujo se usa luz monocromtica; la luz fluorescente se emite en todas direcciones y se mide a un Angulo de 90 respecto a la luz incidente. La luz emitida tiene mayor longitud de onda que la luz incidente. El analista tambin debe tener en cuenta el efecto de la supresin fluorescente debida a otros compuestos y /o iones en la muestra.la supresin fluorescente se debe a colisiones moleculares entre el analito y otros compuestos o iones. Todos los factores que produzcan colisiones moleculares causaran mayor supresin.

Detectores electroqumicos amperomtricos.

Los detectores son robustos, fciles de usar y su mantenimiento o

cambio son pocos costosos. Miden la corriente cuando un analito con actividad elctrica se reduce o se oxida en un electrodo llamado electrodo de trabajo. El electrodo de trabajo se forma con platino u oro( o ya sea con carbn vtreo y pasta de carbn, ). El potencial aplicado en el electrodo de trabajo se ajusta a un electrodo de referencia. Se evita que la corriente pase por el electrodo de referencia. La corriente se toma de un electrodo contrario o auxiliar ya que es de 5 a 10 veces mas grande que el electrodo de trabajo. Los detectores amperomtricos se disean con tres electrodos suspendidos en una celda de flujo de capa fina para permitir la medicin continua de los analitos.

Detectores electroqumicos de conductividad

Miden la conductividad de la fase mvil al eluirse de la

columna y pasar por una celda de flujo y se puede usar para vigilar la presencia de iones ya que modularan la conductividad de la fase mvil. Mientras mayor sea la concentracin de iones la conductividad ser mayor entre los electrodos en la celda de flujo. Con frecuencia se necesita una correccin para la temperatura pues la conductividad varia mucho con la temperatura.

Detectores de infrarrojo
Miden la absorcin de molculas orgnicas cuando

salen eluidas de la columna HPLC. Casi todos los compuestos orgnicos absorben radiacin infrarroja hasta cierto grado que incluye las fases mviles si se usan solventes como acetonitrilo diclorometano o hexano. Es importante asegurar que la longitud de onda de evaluacin se escoja de tal modo que minimice la absorcin de la fase mvil.

DETECTORES DIFERENCIALES DE INDICE DE REFRACCION

Miden cambios del ndice de refraccin en la fase mvil debidos

a la presencia de un analito disuelto. Al eluirse la fase mvil de la columna de cromatografa su ndice de refraccin varia dependiendo de la presencia y la concentracin de cada analito. Se mide en forma diferencial con respecto a una porcin a la fase mvil que no haya pasado por la columna de cromatografa de alto rendimiento. El eluido pasa por una celda de flujo pticamente transparente cuando la fase mvil pasa por otra . Un haz de luz incidente pasa por ambas celdas de flujo y unos detectores evalan la deflexin de los haces. al evaluar se pueden registrar cambios de ndice de refraccin en forma de un cromatograma.

Detector de dispersin luminosa evaporativa.

Se usa para medir compuestos no voltiles cuando se

eluyen de columnas HPLC, en este tipo de detector pasa primero por un nebulizador por medio de aire o nitrgeno formando una niebla fina de solvente y analito. Esta niebla pasa entonces por un tubo de deriva con temperatura regulada donde se evapora el solvente produciendo una suspensin gaseosa fina de partculas de analito .Esta nube se conduce por la trayectoria de un laser usando una celda de flujo.las partculas dispersan la luz y esa luz se mide a 90 respecto al rayo laser. Ya que se evapora el solvente, el o los analitos deben tener un punto de ebullicin apreciablemente mayor que el del solvente en la fase mvil.