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Microbiologie

Ltude des Microorganismes

Dfinition dun Microorganisme


Driv du grec: Mikros, petit et Organismos, organisme
Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non diffrenties) Ils comprennent les bactries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires

Micro_?
Microscope optique

Microscope lectronique
0.1nm 1 nm 10 nm 100 nm 1 m

Lil humain 10 m 100 m 1 mm 1 cm 0.1 m

Fourmis Atome Acide Protine Virus Bactrie Cellule de plante et animale Rotifre

amin
Chloroplaste

_Organisme?
Qui est vivant
Possde un mtabolisme

Qui peut vivre de faon indpendante


Nest pas lunit dune organisation multicellulaire
Parasite obligatoire?

Eubactries
Pathognes qui peuvent causer une maladie Bactries du sol, eau, air, tube digestif, etc. Peuvent utiliser loxygne ou pas Composs organiques et inorganiques utiliss comme source de carbone Composs organiques ou inorganiques utiliss comme source dnergie Certaines peuvent se diffrentier
ex. Bacillus et Clostridium - Sporognse
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Travailler en Microbiologie
La Technique Strile

1re tape
Se laver les mains aussitt que vous entrez dans le laboratoire
Aide prvenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle

2e tape
Faire la dsinfection de votre espace de travail
Aide prvenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement

Le Matriel
Le matriel utilis pour la culture et la manipulation de microorganismes doit tre strile et maintenu strile
Milieu de culture prouvettes Assiettes de Ptris Boucle densemencement Etc.

3e tape
Utiliser la technique strile pour tous les transferts de microorganismes
Prviens la contamination de vos cultures Prviens la contamination de votre environnement Prviens la contamination de soi
Toutes les bactries sont des opportunistes

Transferts par la Technique Strile


Striliser la boucle densemencement au bruleur
Le fil entier doit devenir rouge
Boucle densemencement

Ne pas dposer sur la table! Laisser refroidir

Transferts par la Technique Strile


Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle dinoculation
Ne pas dposer le capuchon sur la table!
Enlever capuchon

Transferts par la Technique Strile


Chauffer louverture du tube au bruleur
Garder lorientation du tube aussi prt de lhorizontal que possible Garder louverture du capuchon vers le bas
Rchauffement de louverture

Transferts par la Technique Strile


Utiliser la boucle strile pour retirer linoculum
Liquide de bouillons Solide de gloses Solide de pentes

Retirer linoculum

Transferts par la Technique Strile


Chauffer louverture du tube au bruleur encore une fois!
Garder lorientation du tube aussi prt de lhorizontal que possible

Rchauffement de louverture

Transferts par la Technique Strile


Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support prouvettes
Refermer le tube

Transferts par la Technique Strile


Rpter les mmes tapes pour inoculer le nouveau tube
Retirer capuchon Chauffer louverture Inoculer Chauffer louverture Fermer le tube

Inoculation

Inoculation dune Glose

Garder la boucle lextrmit du fil densemencement parallle avec la surface de la glose Faire des stries de gauche droite 12:00

Transferts par la Technique Strile


Restriliser la boucle densemencement au bruleur
Le fil entier doit devenir rouge
Boucle densemencement

Dposer sur la table si vous avez fini!

Stries pour Colonies Simples

Microorganismes en Laboratoire
Les Milieux de Croissance

Buts
Croissance sous des conditions contrles Maintien Isolation de cultures pures Tests mtaboliques

Types
Liquides (bouillons)
Permets la culture en suspension Distribution uniforme des lments nutritifs, environnementaux et autres Permets la croissance de grands volumes

La Croissance en Bouillon

Non-inocul Limpide

Turbide + sdiment

Turbide

Limpide + sdiment

Milieux Solides
Agents de solidifications
La glatine
Protine Source animale Solide des tempratures < 28oC

Lagar
Polysaccharide driv dune algue Demeure solide >37oC Fond 100oC

Croissance sur Gloses dAgar


Croissance sur surface solide Croissance isole Permets lisolation de colonies simples Permets lisolation de cultures pures
Colonie simple

Les colonies sont originaires de cellules uniques de diffrentes bactries puisquune colonie tale de faon rpte gnre des colonies identiques

Milieux Solides (suite)


Croissance sur pente
Croissance en surface et en profondeur Diffrentes disponibilits doxygne Entreposage long terme

Milieux Solides (suite)


Tube profond
Milieu semi-solide Entreposage long terme Faible disponibilit doxygne

La Microscopie
Les Colorations

Les Colorants
Cationique : Chargs positivement
Interagissent avec les groupements ngatifs des membranes plasmiques
Ex. Bleu de mthylne, cristal violet, safranine, vert de malachite

Coloration Positives

Anionique : Chargs ngativement


Interagissent avec le substrat de fond
Noir de nigrosin, encre dInde

Coloration Ngatives

Colorations Positives
A B

Coloration du spcimen
Coloration indpendante de lespce

Colorations Ngatives
Coloration de lenvironnement de fond
Coloration indpendante de lespce

A. Grand bacille B. Petit bacille

Mthodes
Coloration simple:
Un seul agent de coloration Colorant cationique ou anionique Permet de dterminer la taille, la forme, et larrangement des cellules

Les Formes Cellulaires


Coccus:
Sphres Division sur 1,2 ou 3 plans Nombre de plans de division donne diffrents arrangements Arrangements typiques de diffrents genres bactriens

Les Cocci (Coccus)


Plans de division Arrangements Diplococcus Streptococcus (4-20) Ttrade Staphylococcus

Les Formes Cellulaires (suite)


Bacilles:
Btonnets Division sur 1 plan seulement Arrangements typiques de diffrents genres bactriens

Les Bacilles
Plans de division Arrangements Diplobacille Streptobacille

Compter les Microorganismes

Mthodes
Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

Comptes Viables
Dilutions en sries de lchantillon talement des dilutions sur milieu appropri Chaque colonie simple est originaire dune unit formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies quivaut une approximation du nombre de bactries vivantes dans lchantillon

Dilutions pour Comptes Viables

63 UFC/0.1mL de 10-5 630UFC/1.0mL de 10-5 630UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans lchantillon original

Avantages:
Dnombre les microorganismes viables Peu distinguer diffrents microorganismes

Limites:
Pas de milieu universel Ncessite la croissance du microorganisme UFC une bactrie = Ex. Un UFC de Streptococcus un de E.coli ?