SIFILIS

INTEGRANTES:

ROMERO CARRASCO NEYSY SOLEDAD MONDRAGON GUERRERO LESVI. VARGAS PEREZ FLORIANO. VASQUEZ BUSTAMANTER FANY . RAMOS SULUETA INGRID. CARRASCO PINTADO SELI CARINA.

SEROLOGA PARA SIFILIS RPR - VRDL

SEROLOGA PARA SFILIS

La sfilis es una enfermedad venrea causada por Treponema pallidum, que invaden las mucosas intacta o la piel. Es un microorganismo mvil, su movilidad se debe a 10 flagelos peri plasmticos. Su tiempo de generacin en los tejidos humanos es de 8 horas, por lo que su multiplicacin es lenta. sus dimensiones, 5-15 mm de largo por 0,2 mm de dimetro no es posible visualizarlo mediante tinciones normales .

su mecanismo de transmisin el contacto sexual . Tras un perodo de incubacin de 12 a 90 das, aparece en el lugar de la inoculacin una lesin primaria, rica en treponemas (el chancro), que desaparece espontneamente a las pocas semanas. El primer estado, conocido como sfilis primaria, T. pallidum se multiplica en los linfticos regionales distribuyndose por la sangre a todos los rganos del individuo. Generalmente las pruebas serolgicas se hacen positivas en este perodo pasadas 3-4 semanas de la infeccin.

El segundo estado comienza con la aparicin de una de las manifestaciones sistmicas de la enfermedad: una erupcin en piel, palmas y plantas, la roseola sifiltica, acompaada de sntomas generales y, frecuentemente, de otros signos localizados (condilomas genitales). Las lesiones abiertas de este perodo son muy contagiosas. Tras la primera desaparicin espontnea de la misma y durante el primer y segundo ao, pueden aparecen brotes similares cada vez de menor intensidad (fases de latencia precoz) hasta que desaparecen totalmente todos los signos y sntomas (fase de latencia tarda).

El tercer estado de la enfermedad, que solo se presenta en unos pocos pacientes, se caracteriza por la formacin de lesiones granulomatosas destructivas que, curiosamente, tienen escasa carga treponmica. En este perodo pueden aparecer sintomas y signos de focalizacin de la enfermedad: neurosfilis, sfilis cardiovascular, etc.

La primera prueba diagnstica para esta enfermedad, fue el test de Wassermann, que se desarroll en 1906, valindose de una extraccin alcohlica a partir de tejidos sifilticos. Lo que se pretenda demostrar con esta prueba, era la presencia de anticuerpos sricos mediante una tcnica de fijacin de complemento, ms tarde se demostr que estas reacciones eran inespecficas y se producan con extractos de otros tejidos. Aos despus se purific dos sustancias reactivas, a partir de msculo de corazn de vacunos, la cardiolipina y la lecitina, lo cual condujo a la obtencin de un antgeno ms especfico, que es utilizado desde 1946 en la prueba de VDRL Venereal Disease Research Laboratory.

Para el diagnstico de la sfilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de pruebas. Por examen directo mediante microscopa en campo oscuro y por fluorescencia directa, mediante serologa y por cultivo en clulas epiteliales de conejo. Por serologa se tienen dos tipos de pruebas, las pruebas no treponmicas como VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas treponmicas como FTAABS (Fluorescent treponemal antibody absorption) o como MHA-TP (Microhemaglutinacin para T pallidum). Las nuevas pruebas diagnsticas para la sfilis, incluyen enzimo inmunoensayo (ELISA), Western bloty Reaccin en cadena a la polimerasa (PCR).

PRUEBAS SEROLOGICAS
Son de dos tipos: no-treponmicas y treponmicas. Las no treponmicas son usadas para despistaje, son econmicas y, tambin, sirven para evaluar la eficacia del tratamiento. Sus limitaciones consisten en baja sensibilidad en sfilis primaria temprana, con prueba de campo oscuro positiva, en sfilis tarda y la posibilidad de fenmeno de prozona o de resultados falsos positivos. Las pruebas treponmicas emplean como antgeno al T. pallidum subespecie pallidum y detectan anticuerpos especficos antitreponmicos. Se le utiliza para verificar cuando las pruebas no-treponmicas son reactivas o como pruebas confirmatorias cuando el cuadro clnico es sugestivo, pero la serologa es negativa, como ocurre en la sfilis tarda. En el 85% de los pacientes con sfilis con tratamiento exitoso, estas pruebas se mantienen reactivas por varios aos2.

PRUEBAS NO TREPONMICAS
Las pruebas no-treponmicas incluyen el VDRL (Venereal Disease Research Laboratory, RPR (Rapid plasma reagin), USR y TRUST, de estas las ms usadas son RPR y VDRL. Todas estas pruebas estn basadas en antgenos en solucin alcohlica, que contienen cardiolipina, colesterol y lecitina purificada en cantidad adecuada para producir reacciones estndares.

Se denomina reagina a una protena similar a un anticuerpo, que se une a un antgeno, como pueden ser la cardiolipina y la lecitina en las pruebas notreponmicas, y se denomina anticuerpos reagnicos a anticuerpos no-treponmicos, producidos por un individuo infectado con T pallidum, contra sus propios tejidos o contra clulas de mamferos. Estos anticuerpos reagnicos, no son exclusivos de la sfilis y tambin son producidos en otras enfermedades infecciosas como son el sarampin, varicela, hepatitis, mononucleosis infecciosa, lepra, etc.

INTERPRETACION DE LOS ESTUDIOS SEROLOGICOS DE LA SFILIS PRUEBAS QUE SE REALIZAN

1.- PRUEBAS NO TREPONMICAS: - RPR: Suero. Los resultados se informan de forma cuantitativa, pero cualquier valor numrico indica positividad de esta tcnica. - VDRL: LCR. Los resultados se informan de forma cuantitativa, pero cualquier valor numrico indica positividad de esta tcnica. Todas las pruebas no treponmicas positivas deben confirmarse con pruebas treponmicas.

2.- PRUEBAS TREPONMICAS: - TPHA: Suero. Se considera positivo si el ttulo es 1/160. El ttulo de 1/80 se considera como reaccin lmite. Si el valor es de 1/160, confirmamos por FTA. - ELISA Ig M: Suero. Se informa de forma cualitativa, como positivo, negativo o reaccin lmite.

- FTA: Suero. Se informa de forma cualitativa, como positivo, negativo o reaccin lmite.

SEGUIMIENTO DEL TRATAMIENTO

1.- Control de la respuesta al tratamiento: Repetir RPR a 1, 3, 6 y 12 meses tras la finalizacin del tratamiento. Si el tratamiento ha sido correcto, los ttulos de RPR se negativizan o descienden. Sin embargo, La positividad de este marcador no desaparece en todos los pacientes tratados aunque el tratamiento haya sido efectivo. El TPHA sigue siendo positivo aunque el paciente est tratado y curado.
SIFILIS CONGENITA: La presencia de IgM en el suero del neonato es diagnstico de infeccin por Treponema pallidum, pero su negatividad no descarta la infeccin por la posibilidad de inmadurez del sistema inmune del neonato. El resto de los marcadores pueden ser anticuerpos de la madre que han atravesado la placenta.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS RPR NEGATIVO: No se detectan anticuerpos frente a Treponema pallidum. No se realizan ms determinaciones si el paciente no presenta sospecha clnica de sfilis primaria o terciaria. RPR POSITIVO y TPHA >1/160: El paciente presenta anticuerpos frente a Treponema pallidum. RPR POSITIVO y TPHA NEGATIVO: Puede ser un falso positivo o una sfilis primaria. Se realiza ELISA IgM y FTA. Si el paciente tiene FTA positivo, presenta anticuerpos frente a Treponema pallidum. Si presenta Ig M positiva, la infeccin es reciente (meses). Adems, se recomienda seguimiento serolgico.

RPR POSITIVO y TPHA 1/160: Debido a que el TPHA tiene ttulo bajo, se realiza FTA. Si el paciente tiene FTA positivo, presenta anticuerpos frente a Treponema pallidum. RPR NEGATIVO y TPHA > 1/160: El paciente presenta anticuerpos frente a T. pallidum. RPR NEGATIVO y TPHA 1/160: Debido a que el TPHA tiene ttulo bajo, se realiza FTA y se ampla el estudio realizando ELISA IgM. Si el paciente tiene FTA positivo, presenta anticuerpos frente a Treponema pallidum. Si presenta Ig M positiva, la infeccin es reciente (meses).

RPR Es una prueba diseada para detectar reagina en el suero de manera rpida, no requiere inactivacin por calor La muestra se mezcla con una suspensin que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partculas de carbn. Si la muestra es positiva se observa pequeos grumos negros (floculacin). El resultado se reporta como reactivo o no reactivo; todos aquellos reactivos deben ser diluidos seriadamente para realizar la titulacin, y se reporta la dilucin ms alta que exhibe reaccin. Los falsos negativos se pueden producir por errores tcnicos y los falsos positivos son los mismos que para la prueba de VDRL. Se ha desarrollado variantes de esta prueba en las que la muestra puede ser plasma sin que se pierda su sensibilidad y especificidad3,11.

VDRL
Es un anlisis de sangre para la deteccin de la sfilis. Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se pueden producir en repuesta al Treponema pallidum, la bacteria que causa la sfilis.
En la prueba de VDRL, el suero del paciente es inactivado a 56 C por 30 minutos, si se usa liquido cefalorraqudeo (LCR) slo se debe centrifugar Luego la muestra se mezcla con un antgeno, que es una solucin buffer salina de cardiolipina y lecitina adosadas a partculas de colesterol. Esta prueba se puede realizar en lmina y ser observada al microscopio como un precipitado de partculas finas (floculacin), o se puede realizar en un tubo de ensayo y ser leda macroscpicamente.

Los resultados de VDRL en lmina son comunicados como no reactivos (no hay floculacin, dbilmente reactivos (ligera floculacin, y reactivos floculacin definitiva. Todos los sueros reactivos se diluyen seriadamente, a cada dilucin se le realiza la prueba de VDRL y se registra el titulo mximo obtenido. Rara vez se tiene un paciente con ttulo elevado en las diluciones y con VDRL no reactivo en la muestra sin diluir (fenmeno de prozona), si ocurriera es ms frecuente en la sfilis secundaria.

Se obtiene falsos negativos en ciertas condiciones, tales como fenmeno de prozona, bajo ttulo de anticuerpos, presencia de sustancias inhibidoras en el suero del paciente, VIH, la temperatura ambiental fuera del rango de 23-29 C o error tcnico. Los falsos positivos pueden llegar a 10 a 30%, y han sido reportados en casos de sndrome de anticuerpos antifosfolpidos, lupus eritematoso sistmico (LES), fiebre reumtica, neumona vira, neumona neumoccica, mononucleosis infecciosa, hepatitis infecciosa, lepra, malaria, artritis reumatoide, infecciones por otros treponemas, embarazo, ancianos, y muestras hemolisadas o contaminadas.

DETERMINACION DE RPR
I.- PRUEBA CUALITATIVA 1.-Llevar a temperatura ambiente los reactivos y la muestra antes de realizar el ensayo. 2.-En cada uno de los crculos de la tarjeta de reaccin colocar con un gotero plstico provisto: Muestra o controles 1 gota (50ul) 3.-Con el extremo cerrado del gotero distribuir uniformemente en todo el circulo. 4.-Con el gotero metlico provisto , en posesin vertical, agregar en el centro del circulo: Reactivo RPR ..1gota (17ul) 5.- Sin mesclar, hacer rotar horizontalmente la tarjeta de reaccin en forma manual o con agitador rotativo a100 rpm durante 8 minutos. 6.- Observar la presencia o ausencia de aglutinacin al cabo de este tiempo.

II.-Prueba semicuantitativa
1.-Marcar

los tubos con las diferentes diluciones , ,1/8 ,1/16 , 1/32 ,1/64. 2.- Agregar 50ul de SSF a todos los tubos.
50ul SSF 1/2 1/4 50ul SSF 1/8

50UL SSF

1/1 6

1/3 2

1/6 4

3.- Agregar 50ul de suero al primer tubo y homogenizar, luego sacar 50ul de la dilucin del primer tubo al segundo y del segundo al tercero y asi a Todos los tubos.

50ul suero

50ul

50ul

50ul 50ul

50ul
1/3 2

50ul

1/2

1/4

1/8

1/1 6

1/6 4

3.- Sacar 50 ul de cada dilucin en una lamina porta objeto y agregar 17 ul del reactivo. 4.- Colocar en rotacin a 100 rpm x 8 minutos. 5.-- observar donde ocurre la floculacin REPORTE: -reportar lo inverso de la dilucin Ejm .. 2 dil 4 DIL.

FUNDAMENTOS DEL METODO: V.D.R.L Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero por la reaccin con un antgeno cardiolipnico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene reagina, sta se unir al antgeno produciendo una floculacin visible en microscopio. FUNDAMENTOS DEL METODO R.P.R

En la prueba rpida para reaginas plasmticas (RPR), las "reaginas" presentes en el suero de individuos infectados con Treponema pallidum, se detectan por accin de las mismas con antgeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre partculas de carbn. La reaccin produce una aglutinacin visible macroscpicamente, favorecida por las partculas de carbn.

PROCEDIMIENTO: V.D.R.L Tanto los reactivos como la muestra deben estar a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. I- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO O PLASMA En cada uno de los sectores delimitados de la placa Colocar: Muestra 50 ul Con gotero provisto colocar: Antgeno 1 gota Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos. Observar inmediatamente en microscopio con poco aumento (60 a 100 X).

II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO O PLASMA Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con solucin fisiolgica y realizar para cada dilucin la prueba como se describe en I.

III- PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR Diluir el Antgeno 1:2 con solucin de cloruro de sodio 10 g/dl. Emplear dentro de las 2 horas de preparacin. En cada sector delimitado de la placa colocar: Muestra 50 ul Con aguja calibre 6 agregar: Antgeno diluido 1 gota (10 ul) Mezclar bien y agitar horizontalmente la placa durante 8 minutos a 180 rpm. Leer los resultados en microscopio con poco aumento (60 a 100 X).

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Reactivo: presencia de floculacin. No reactivo: ausencia completa de floculacin. Prueba semicuantitativa: el ttulo estar dado por la inversa de la ltima dilucin que se observe reactiva. Leer atentamente las LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO.