Comprender las bases de la espectrofotometra. Comprender el funcionamiento de un espectrofotmetro.

. Comprender los diferentes anlisis que se pueden llevar a cabo por esta tcnica

Todas las sustancias pueden absorber energa radiante. La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.

La espectrofotometra ultravioleta-visible usa haces de radiacin del espectro electromagntico, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro. La transmitancia o transmitencia es una magnitud que expresa la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en la unidad de tiempo (potencia).

Ley de Lambert
Johann Heinrich Lambert (1728 1777). Matemtico, fsico, astrnomo y filsofo alemn de origen francs.

Ley de Beer
August Beer (18251863) Fsico y matemtico alemn Estudia matemtica y Ciencia natural en Trveris.

PhD en 1848.
Profesor en la Universidad de Bonn, estudiando diversos fenmenos pticos.

Cuando un rayo de luz monocromtica con una intensidad I0 pasa a travs de una solucin, parte de la luz es absorbida resultando que la luz emergente I es menor que I0

Luz incidente (I0)

Luz absorbida

Luz emergente (I)

a = absortividad

I0
Longitud del medio absorbente o ancho de la celda

I
c = concentracin. b
(nmero de partculas por cm3)

Ley de Lambert (Ley del coseno de Lambert).

Cuando un rayo de luz monocromtica (I0) pasa a travs de un

medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente (I) a medida que la longitud del medio absorbente aumenta.

I = I0e-ab I0
1 cm.

I0
2 cm.

I0
3 cm.

Ley de Beer
Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida que la concentracin del medio absorbente aumenta

I = I0e-ac
I0 I I0
I

I0

Ley de Beer-Lambert
La fraccin de luz incidente que es absorbida por una solucin es proporcional a la concentracin de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz

La relacin entre la luz incidente (I0) y la reflejada (I) dar una idea de la cantidad de radiacin que ha sido absorbida por la muestra.

Ley de lambert Beer:

I = I0
Si despejamos:

-abc e
-abc e

I/I0 =

Al cociente de las intensidades se denomina Transmitancia

T = I/I0 = e-abc
Sacando logaritmos: Loge I/I0 = abc Convirtiendo a log10: Log10 I/I0 = abc

Absorbancia = Log10 I/I0 = abc

La Transmitancia (T) es la relacin entre la intensidad de luz transmitida por una muestra problema (I) con la intensidad de luz incidente sobre la muestra (Io):

T = I / I0
Se expresa como % T

Lambert y Beer relacionan observando

La medida de la absorcin

El espesor de la sustancia absorbente

La cantidad de sustancia que absorbe

crecimiento exponencial de la absorcin de radiacin

En Funcin de

espesor de la regin absorbente

la cantidad de esa especie

Qu es un espectrofotmetro?
Es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un haz de Radiacin Electromagntica (REM), comnmente denominado Luz, separndolo para facilitar la identificacin, calificacin y cuantificacin de su energa.

Permite comparar la radiacin absorbida o trasmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Cmo funciona un espectrofotmetro UV? Fuente estable de energa radiante (lmpara de deuterio o de
arco de xenn) Recipiente transparente para la muestra (de cuarzo o plstico en el visible) Dispositivo que aisle la regin de inters en el espectro (monocromador de prisma o red) Detector de radiacin que la convierta en seal elctrica (fotomultiplicador) Sistema de tratamiento o lectura de la seal

Tipos de Espectrofotmetros
Absorcin Atmica. de emisin. Ultravioleta. Infrarrojo.

Curva de calibracin
Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones de diferentes concentraciones del mismo, determinndose para cada una de ellas el valor de absorbancia a max. Estos valores de absorbancia se representan en el eje de abscisas (eje de x) y los de concentracin en el eje de ordenadas (eje de y).

Mtodo de Biuret
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1 Cu 2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren

Biuret

Mtodo de Lowry
Dependen de la concentracin de tirosina y triptfano de la muestra. Consiste en dos reacciones: 1. Reaccin de Biuret 2. Reaccin de Folin: caracterstica de los grupos OH reductores de los aminocidos tirosina y triptfano que, junto con los complejos Cu +2 reducen el reactivo de Folin generando un color azul

Lowry

Anlisis Clnicos
En caso de enfermedad, tanto la concentracin total como la de las distintas fracciones pueden verse alteradas. As, la determinacin de las protenas totales sirve para el diagnstico de:

Afecciones hepticas Afecciones de la mdula sea Otras afecciones del metabolismo nutricionales.

Referencias
Emilio, F. R., & Aurora, G. C. (s.f.). UCO es. Recuperado el 11 de Junio de 01, de http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimicabiolmol/pdfs/27%20M%C3%89TODOS%20PARA%20LA%20 CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE%C3%8DNAS.pdf UJAEN. (s.f.). Mtodo para la cuantificacin de Protenas. Recuperado el 01 de Junio de 2011, de http://www4.ujaen.es/~esiles/TEMA3PROTEINASalumno.pd f

 UNA. (s.f.). Medvet. Recuperado el 2011 de Junio de 01, de http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/ mva505_Practica4.pdf

libro: Mtodos modernos de anlisis quimcos ,por, Robert L. Pecsok y L. Donal Shields, Editorial limusa Skoog, Douglas A. West, James F. QUMICA ANALTICA, Editorial Mc Graw Hill.

 http://www.uhu.es/quimiorg/db.html