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Nutrio e crescimento
Nutrio microbiana Componentes necessrios s clulas Meios de cultura Condies ambientais
Proliferao de Microrganismos
As bactrias so microrganismos unicelulares com uma estrutura muito simples, o que lhes permite replicarem-se muito rapidamente caso encontrem nutrientes, temperatura, pH, humidade e concentrao de oxignio favorveis. Alguns casos, apenas 20 minutos so suficientes para que o nmero de bactrias duplique, o que significa que um nmero inicial de 10 bactrias num determinado local em condies favorveis, se multiplicar de tal modo que se tero aproximadamente 16000000 bactrias ao fim de 8 horas.
Proliferao exponencial
Esta proliferao exponencial aliada sua resistncia faz com que as bactrias se espalhem muito rapidamente, estando presentes em todos os locais, no s nosso volta, no meio ambiente, como tambm no nosso prprio corpo: nas nossas mos, nariz, boca, tracto gastrointestinal, etc.
Artificial x Natural
Meios de cultura
At cerca de 1880, os microrganismos eram cultivados em meios lquidos Robert Koch e a sua equipe introduziram os meios de cultura slidos, os quais permitiram o estudo de espcies isoladas (culturas puras), separando-as de espcies contaminantes.
Meios de cultura consistem da associao qualitativa e quantitativa de substncias que fornecem os nutrientes necessrios ao desenvolvimento (cultivo) de microrganismos fora do seu meio natural.
Tendo em vista a ampla diversidade metablica dos microrganismos, existem vrios tipos de meios de cultura para satisfazerem as variadas exigncias nutricionais.
Alm dos nutrientes preciso fornecer condies ambientais favorveis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como pH, presso osmtica, humidade, temperatura, atmosfera (aerbia, micro aerbia ou anaerbia), entre outras...
Slidos, quando contm agentes solidificantes, principalmente gar (cerca de 1 a 2,0 %); Semi-slidos, quando a quantidade de gar ou gelatina de 0,075 a 0,5 %, obtendo assim uma consistncia intermediria, de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tenses variadas de oxignio ou a verificao da motilidade; Lquidos, sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, utilizados para activao das culturas, repiques de microrganismos, provas bioqumicas, entre outros.
Ingredientes com composio qumica no definida, tais como extratos de vegetais (malte, tomate, amido de tubrculos, peptona de soja, etc.), de animais (carne, crebro, fgado, casena, etc.) e de microrganismos (levedura); Composio qumica conhecida (usados para trabalhos de pesquisa) e os seus componentes servem para suprir as exigncias nutritivas dos microrganismos, em fontes de carbono, azoto, vitaminas, energia, sais minerais, entre outros, quando so conhecidas as necessidades nutricionais especficas. So os que permitem o crescimento bacteriano, sem satisfazer contudo nenhuma exigncia em especial; Cumprem com as exigncias vitais de determinados microrganismos, como meio de infuso de crebro e corao, gar sumo de tomate, gar sangue, etc.
Meios de pr-enriquecimento:
Permitem a dessensibilizao de microrganismos injuriados, i.e., para amostras que sofreram algum tipo de tratamento (trmico ou qumico). Ex. gua peptonada. Proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos nmeros ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios tm a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que tambm podem inibir o crescimento de outros. Contm substncias que permitem estabelecer diferenas entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), gar MacConkey para a diferenciao de enterobactrias, gar sangue, agar Baird-Parker para isolamento e diferenciao de cocos Gram positivos (slidos).
Meios de enriquecimento:
Meios Diferenciais:
Seletivos so os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. A maioria deles tambm diferencial, permitindo diferenciar as colnias (slidos) dos microrganismos. Meios de triagem so os meios que avaliam determinadas actividades metablicas permitindo caracterizao e identificao perfunctria ou presuntiva de muitos microrganismos. Identificao, prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes fisiolgicas de organismos submetidos a identificao. Dosagem, so empregados nas determinaes de vitaminas, antibiticos e aminocidos Contagem, so empregados para a determinao quantitativa da populao microbiana. Estocagem ou manuteno so utilizados para conservao de microrganismos no laboratrio, i.e., garantem a viabilidade de
No nosso dia-a-dia convivemos com bactrias, dormimos com bactrias, comemos bactrias, e no conseguimos viver sem elas. Elas esto por todo o lado e reproduzem-se em todo o lado, apenas querem um local com condies propcias. Por isso, h que ter muito cuidado nas nossas casas, pois apresentam-se como os melhores locais para a proliferao das bactrias, tendo em conta que nelas podem encontrar alimento, calor, humidade.
Nutrio de microrganismos
Alguns podem viver com poucas substncias inorgnicas, enquanto outros so to exigentes quanto o homem.
Para caracterizar suas propriedades (morfolgicas, fisiolgicas e bioqumicas) necessrio o cultivo em laboratrio: - Cultivo in vitro: quando se conhece as exigncias nutricionais. - Cultivo in vivo: quando exigncias nutricionais especficas so desconhecidas. Ex: Mycobacterium leprae (causador da hansenase) precisa de hospedeiro para ser cultivado.
Para o cultivo laboratorial (in vitro) so utilizados meios de cultura que simulam e at melhoram as condies naturais.
Macronutrientes:
metabolismo.
Micronutrientes: - Necessrios em quantidades mnimas. - Funes enzimticas e estruturais das
biomolculas
C N H P, S, K, Na ...
clula
Matria seca gua
Fonte de Nitrognio:
- elemento necessrio em maior quantidade depois do carbono, cerca de 12 %.
(constituinte das protenas, cidos nuclicos, etc.) molculas orgnicas (aminocidos, peptdeos) molculas inorgnicas (NH3, NO3-, N2) A capacidade de algumas bactrias em utilizar o nitrognio atmosfrico (FBN) de fundamental importncia para a vida de todos os seres.
Hidrognio:
Principal elemento dos compostos orgnicos e de diversos inorgnicos. (gua, sais e
gases)
Funo: Manuteno do pH Formao de ligaes de H entre molculas Fonte de energia nas reaes de oxi-reduo na respirao
Oxignio:
- Elemento comum encontrado nas molculas biolgicas (aminocidos, nucleotdeos,
glicerdeos)
- obtido a partir das protenas e gorduras.
Na forma de oxignio molecular (O2), requerido por muitos para os processos de gerao de energia.
Outros macronutrientes:
P Sntese de cidos nuclicos, ATP S Estabilidade de aminocidos, componente de vitaminas K Atividade de enzimas Mg Estabilidade dos ribossomos Ca Estabilidade da parede celular e termoestabilidade de
endsporos
Na
marinhos.
Outros componentes
um meio de cultura:
Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B
Ex: Mo+6 necessrio para a nitrogenase, a enzima que converte o N2 para NH3 durante a FBN.
gua e aditivos
gua:
Componente absolutamente indispensvel (com exceo dos protozorios que englobam partculas slidas) No laboratrio de utiliza gua destilada, filtrada e deionizada.
Aditivos:
Funo de aumentar a converso, evitar precipitao de ons, controlar a espuma, provocar inibio, estabilizar o pH:
Inibidores
Ex: produo de cido ctrico por Aspergillus niger Utiliza-se Fosfato e pH < 2 para reprimir o cido oxlico
Outros aditivos
Tampes
- Carbonato de clcio - Fosfatos - Protenas (peptona)
lcoois, cidos graxos, silicones, poliglicis: reduzem a tenso superficial das bolhas
Meios de cultura
Solues de nutrientes para promover o crescimento de microrganismos.
No existe um meio de cultura universal, mas Existem vrios tipos meios para diversas finalidades Para obter sucesso no cultivo de microrganismos necessrio o conhecimento de suas exigncias nutricionais, para que os nutrientes sejam fornecidos de forma e proporo adequada.
Quimicamente definidos (sais, compostos orgnicos purificados, gua)
Classes Complexos (utilizam hidrolisados carne e soja, extratos de levedura, sangue, soro,
leite, solo e rmem de bovino)
Meios de cultura
At 1880 os microrganismos eram cultivados em meios lquidos. Robert Koch introduziu os meios de cultura slidos, os quais permitiram o estudo de espcies isoladas (culturas puras).
Controle um meio mnimo com apenas glicose e sais. 3 isolados bacterianos sendo testados quanto a necessidade de suplementos orgnicos.
Meios de cultura
Embora no existam meios especficos para todos os microrganismos, existem centenas de formulaes para inmeras finalidades. Alguns so meios gerais: permitem o crescimento de muitas espcies Outros so meios especficos: servem para identificao de espcies, por ex.
Se a bactria prefere os nutrientes encontrados no sangue, ento o sangue adicionado no meio de cultura. As bactrias podem ser autotrficas ou heterotrficas.
Meio definido para quimioautotrficas Meio definido para heterotrficas Meio complexo para heterotrficas
Tambm so utilizadas maiores concentraes de acares (4%) e pH menor (3,8 a 5,6) do que os meios para bactrias.
Essa combinao permite inibir o crescimento de bactrias.
Ex: Para produzir 10 g de clulas bacterianas so necessrios de 1,3 g (13%) de N ou 7,2 g de (NH4)2SO4 (18% de N) Obs: Sais com dois componentes [(NH4)2SO4] podem introduzir o excesso de um deles. Com relao ao carbono considerar tambm frao para energia e manuteno (heterotrficos) Frao para biomassa: 1,3 x 4 = 5,2 g de C ou 13 g de glicose (40% de C)
Elemento
Carbono hidrognio Nitrognio Fsforo Enxofre Potssio Sdio Clcio Magnsio Cloro
Bactria
52 7 13 2,5 0,6 2,5 0,75 0,55 0,25 0,5
Fungo
51 7 8,5 0,4-4,5 0,1-0,5 0,2-2,5 0,02-0,5 0,1-1,4 0,1-0,5 -
Ferro
Relao C:N mdia
0,1
4:1 85:23:4:1
0,15
6:1
Relao C:N:P:S
Temperatura
Grupos
Durante as reaes de reduo do O2 so formados vrios intermedirios txicos. Ex: H2O2, OH, O2Os microrganismos aerbios e facultativos utilizam enzimas como a catalase para destruir as formas txicas
pH
Ao contrrio da temperatura, o pH timo para o crescimento encontrase no valor mdio da variao sobre o qual o crescimento acontecer,
Quando cultivados in vitro, o meio sofrer alteraes medida que os metablitos cidos ou alcalinos so produzidos.
Presso osmtica
No devem existir grandes diferenas na concentrao de solutos dentro e fora da clula, pois podem desidratar-se ou romper-se.