Dicrosmo

Circular:
anlisis de protenas
Gabriela Olvera A00806132
Francisco Gallegos A00948383
Jorge Garza A01135359
J. Gerardo Lpez A00366856
Introduccin
El dicrosmo circular se refiere a la diferencia
de absorcin de luz entre luz circular
polarizada derecha e izquierda. La diferencia
de absorcin entre la luz derecha e izquierda
crea un haz de luz resultante el cual sirve
para el anlisis de la estructura secundaria
de protenas, as como su plegamiento.
Principios
Haz de luz polarizado en un plano: Vibracin
en un solo plano.

Superposicin de dos ondas
polarizadas
Polarizacin Circular
Si los dos haces de luz superimpuestos, an
con la misma amplitud y longitud de onda se
superimponen PERO desfasados 90 o -90
grados, se obtiene una polarizacin circular:
el haz resultante ya no est polarizado en el
plano.
Polarizacin Circular
Desfasados 90 y -90 grados: Los picos y los cruces del
plano de los dos haces ya no coinciden.
El haz que gira en sentido de las manecillas del reloj se le
llama onda polarizada circular derecha (ED) y en el
sentido contrario se le denomina onda polarizada circular
izquierda (EI).
Lo mismo pero al revs
Dos haces circulares
suman un haz polarizado
en plano.
Interaccin con Materia
Al interactuar con materia, la luz sufre dos
fenmenos principales:
1. Absorcin: la materia absorbe una parte de
la luz por lo que disminuye su amplitud
(intensidad).
2. Cambio en velocidad (refraccin): cuando la
luz pasa de un medio a otro.
Interaccin con Materia
Absorcin
Refraccin
Concepto: Dicrosmo Circular
Dicrosmo circular (CD):Cuando una muestra absorbe el rayo ED de una manera diferente (mayor
o menor) al EI. Al salir de la muestra el rayo no se encuentra polarizado circular ni planarmente,
sino elpticamente:
Concepto: Birrefringencia
La misma diferencia pero con refraccin en vez de absorcin, crea dispersin ptica rotatoria
(ORD):
Y la suma de ambos...
Estos fenmenos provocan una
rotacin del plano de
polarizacin en un ngulo alpha
y la distorsin de este plano
tambin genera una elipse.
Equipo general
El proceso empieza con
un rayo de luz polarizada.
La polarizacin va
cambiando
peridicamente.

Al pasar por la muestra, el
detector identifica si una
molcula es pticamente
activa, ya que habr un
cambio en la absorcin en
algn perodo de
polarizacin especial y la
luz transmitida variar.

La variacin est directamente
relacionada con el DC de la muestra a
esa longitud de onda. Al hacer un
barrido de varias longitudes se obtiene
el espectro completo de DC. Que lleva
a las interpretaciones.

Equipo de DC
Caractersticas
importantes
Debe contar con fuente de
luz polarizada.
Cuenta con generador de
radiacin (carburo de silicio)
que se filtra y polariza.
Un modulador fotoelstico
(cristal) produce la
radiacin circularmente
polarizada.
La muestra se coloca
disuelta en un solvente
adaptado a longitud de
onda deseada.

Aplicaciones
Determinacin de estructura secundaria de
protenas
Estudio de cambios de entorno (pH, temperatura,
etc.)
Determinacin de conformacin de cidos
nucleicos
Estudio de interacciones protena - protena
Interpretacin
La diferencia en la absorcin entre el ED y el
EI es muy pequea, es usualmente entre
1/100 y 1/10 de un porciento, sin embargo se
puede determinar de una manera muy
precisa. Con estos datos se puede obtener la
elepsicidad de la muestra.

Para poder comparar los valores de
elipcicidad, se tienen que normalizar los
valores, obteniendo la elipsicidad molar
especfica por residuo. Se debe de
considerar la longitud del trayecto (l), la
concentracin ( c ), la masa molecular (M) y
el nmero de residuos (nr).

Para analizar la estructura secundaria de las
protenas, cada estructura secundaria bsica
(hlice alfa, lmina beta o espiral) tiene un
espectro de DC caracterstico. Por lo tanto
una protena que consiste de estas tres
diferentes estructuras debe de contener el
espectro caracterstico de cada una. Para
interpretar estas grficas se han creado
grficas estndar de protenas con estructura
conocida.
Estas interpretaciones tienen algunas
limitaciones inherentes al mtodo, por
ejemplo no se considera las interacciones
que pudieran tener los cromforos entre
otras regiones de la protena y otros
elementos, es por eso que el mtodo no es
muy exacto. Sin embargo este mtodo es
muy confiable para monitorear cambios en la
conformacin de protenas en diferentes
condiciones (estudios de desnaturalizacin,
plegamiento, etc.)
Cada estructura secundaria tiene
diferentes caractersticas del
espectro DC en UV:
Alfa Hlice:
Bandas negativas en 222 y 208
nm.
Bandas positivas a 193 nm.
Lminas Beta-plegadas:
Bandas negativas a 218 nm y
positivas a 195nm.
Para la conformacin de espiral:
+ a 212nm
- A 195 nm
Ejemplo
Industria
Biotecnolgica
Tcnicas de
purificacin
Produccin
de protenas
Desplegamiento de
protenas
Incremento de condiciones desnaturalizantes
Temperatura
Qumicos (urea)
pH extremo

Disminuye la estabilidad de la
protena
Se despliega

CD es una tcnica muy til
debido a que los espectros de
protenas plegadas y
desplegadas son muy diferentes.
(Figura 1)

La transicin de desplegamiento
se puede terminar escogiendo
una longitud de onda donde la
diferencia en la seal de protena
plegada y no plegada sea muy
grande.

Figura 1. Caractersticas del espectro en -hlices, -
plegada y espirales aleatorios.
Dicrosmo Circular: Efecto del pH y del uso de agentes
desnaturalizantes
Espectro de dicrosmo circular de una apomioglobina (apoMb)
como funcin de condiciones desnaturalizantes.

Transicin de desplegamiento inducida por pH y por urea
(@222nm)
Fuentes
1. http://www.informatics.indiana.edu/predrag/classes/2008springi619/week4_m.pdf
2. http://www.biomachina.org/courses/structures/052.pdf
3. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/exposicion_dicroismo_circular_5050.pdf
4. http://www.photophysics.com/products/chirascan-cd-spectrometer
5. http://www.ruppweb.org/cd/cdtutorial.htm
6. Correa, D. & Ramos, C. (2009). The use of circular dichroism spectroscopy to study protein folding, form and
function. African Journal of Biochemistry Research 3(5): 164-173
7. http://download.springer.com/static/pdf/362/art%253A10.1007%252Fs00249-004-0401-
8.pdf?auth66=1381682487_9868968b74f62d1b6e43d068d89b501b&ext=.pdf