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DIAGNOSTICO DE LAS

ENFERMEDADES
INFECCIOSAS





Dra. Luz Marina Pereira Vsquez

Enfermedad infecciosa???
Una enfermedad infecciosa, es una infeccin
provocada por un microorganismo que puede ser:
Bacterias, parsitos y virus
Cuando un microorganismo ingresa al organismo,
necesitan cierto tiempo para reproducirse y
multiplicarse lo suficiente como para causar sntomas
de enfermedad. Ese tiempo se conoce como periodo
de incubacin.
Vas de transmisin de las
enfermedades infecciosas
Transmisin por va transfusional.

Transmisin por va congnita.

Transmisin por accidentes laboratoriales en personal de salud
Transmisin de enfermedades infecciosas
por va transfusional
La transfusin de sangre humana, ha sido y es utilizada
para restituir el fluido circulante y mantener la
hemostasia.


Actualmente se trabaja en teraputica de restitucin
hematolgica, ya sea por necesidades o dficit de los
elementos constitutivos de la sangre, para lo cual se
usan los derivados sanguneos como: el plasma, sus
protenas, concentrados de eritrocitos, concentrado
de plaquetas e inclusive fibringeno.

Cuales son las medidas para garantizar la
seguridad de la transfusin sangunea?
Donantes voluntarios habituales.
Seleccin cuidadosa del donante.
Empleo de pruebas de alta sensibilidad y
especificidad para deteccin de marcadores
serolgicos de infecciones.
Mantenimiento de registros digitalizados.
compartidos en red de donantes rechazados.
Cuales son las causas para la transmisin de
enfermedades infecciosas por va transfusional ?
La primera y principal es la colecta de la donacin de
sangre durante el perodo de ventana

Definido como el lapso durante el cual el donante est
infectado con un virus, no tiene signos ni sntomas, y
los resultados de la pesquisa serolgica son
negativos).
Ejemplos: VIH y Hepatitis B
Cuales son las causas para la transmisin de
enfermedades infecciosas por va transfusional ?
La segunda est dada por infecciones con
mutantes o cepas no detectables por las
pruebas. (Virus)

La tercera los errores tcnicos en el laboratorio
(muestra seropositiva se informe como no
reactiva- falso negativo, lo que conducira a la
transfusin de componentes contaminados).
Patgenos causantes de las enfermedades infecciosas
de transmisin sangunea
Bacterias: T. pallidium
Sfilis
Parsitos: Plasmodium
Paludismo
T. cruzi
Chagas




Patgenos causantes de las enfermedades
infecciosas de transmisin sangunea?
T. gondii
Toxoplasmosis


Leishmania.sp
Leishmaniasis
Tcnicas inmunolgicas en el diagnostico de
las enfermedades infecciosas

Las tcnicas desarrolladas en estos
ltimos tiempos, basadas en
mecanismos inmunolgicos
posibilitan la deteccin de ciertas
sustancia, que facilitan el
diagnstico y el pronstico de
numerosos procesos patolgicos


OBJETIVOS
Conocer las principales tcnicas
utilizadas en el diagnostico de las
enfermedades infecciosas .
Identificar los mecanismos de
funcionamiento de las tcnicas
(Fundamento), basadas en la
reaccin antgeno anticuerpo.
Realizar determinaciones mediante
tcnicas inmunolgicas y
parasitolgicas ms comunes.

TECNICAS INMUNOLGICAS


Ltex
HAI
Inmunocromatografa
ELISA


En que consiste las reacciones de aglutinacin?
Consisten en el agrupamiento de una suspensin de
partculas que se deben a la reaccin entre:
1. antgeno presente en las partculas
(aglutingeno)
2. anticuerpo especfico de l (aglutinina)
Reacciones de aglutinacin











Como se llama la reaccin si la partcula empleada en la aglutinacin es
un hemate?
HEMAGLUTINACIN
PARTCULAS
Vitales
Inertes
Hemates
Bacterias
Carbn Vegetal
Ltex
Gelatina
Qu es un Aglutinogeno?
Es un antgeno de alto peso molecular, con cierta rigidez estructural
y que tiene la particularidad de ser parcialmente metabolizado
por clulas especializadas llamadas macrfagos, por lo tanto es
capaz de generar una respuesta inmune en un organismo que la
detecte como un agente extrao.
Qu es una aglutinina?
Es un anticuerpo , producido por los
linfocitos B activados, llamados clulas
plasmticas, como respuesta a la
presencia de un antgeno en el organismo


Aglutininas
completas
Incompletas
Son aquellas que
siempre producen
aglutinacin
Ig M
Son las que a pesar de
reaccionar con el
antgeno NO producen
aglutinacin cuando
estn en una situacin
desfavorable
Ig G

Reaccin de aglutinacin
Qu se necesita para que la reaccin de aglutinacin se produzca
correctamente?

Es preciso que la concentracin del aglutingeno NO SEA
EXCESIVA con respecto a la aglutinina y viceversa, caso contrario
se forma el llamado Fenmeno de Zona y se obtendr un
resultado falsamente negativo.

Otro factor que influye en las reacciones es la Temperatura,
aunque la mayora de las reacciones se efectan a T ambiente

Que es el fenmeno de Zona?
El fenmeno de zona, conocido tcnicamente como fenmeno de
prozona, es la ausencia de aglutinacin o presencia de aglutinacin
completa en las diluciones altas.

En que momento se produce el
fenmeno de Zona?
Tipos de reaccin de aglutinacin
Aglutinacin directa



Aglutinacin Indirecta
Aglutinacin Directa
En que consiste la aglutinacin directa?
Aglutinina reacciona con un aglutingeno presente en forma
natural en la superficie de un tipo de clula , tras esta reaccin se
forma una unin, producindose la aglutinacin
Ej. Determinacin de grupos
sanguneos
Aglutinacin Indirecta
Que es la aglutinacin Indirecta?
Es aquella en la que la que la aglutinina reacciona con
el aglutingeno que ha sido transferido pasivamente
a la superficie de una partcula vital o inerte.
El proceso mediante el cual las partculas son
recubiertas con aglutingenos que no le son propios
se denomina sensibilizacin
Aglutinacin Indirecta
Qu utilizan? Cmo se cuantifican?
Se utilizan antgenos ligados a eritrocitos para detectar anticuerpos especficos.
Los anticuerpos detectados pueden cuantificarse mediante la titulacin.
El proceso se lleva a cabo realizando diluciones seriadas de los sueros.
Sobre ellos se deposita la suspensin de hemates sensibilizados con el antgeno.
Si hay anticuerpos suficientes para aglutinar se forma una malla que se deposita y
se observa una especie de velo que cubre el fondo del pocillo.
Cuando no existe anticuerpos sedimentan como un botn en el fondo del pocillo


Cules son las ventajas de las
reacciones de aglutinacion?
Desde el punto de vista de su utilidad en el laboratorio es su
sencillez de realizar, no requieren de ningn equipamiento para su
lectura, son rpidas y fciles de implementar.
Desventajas de las reacciones de
aglutinacin
las reacciones de aglutinacin presentan :
Menor sensibilidad que las reacciones de: ELISA e
Inmunofluorescencia indirecta. Esto hace que en determinados
casos se prefiera el empleo de una o mas de estas dos tcnicas
para la deteccin de anticuerpos contra un determinado agente
patgeno.
Tcnica del latex
La muestra se mezcla con gotas de ltex cubiertas con un
anticuerpo o un antgeno especfico. Si la sustancia sospechosa est
presente, las gotas de ltex se agruparn (aglutinarse).
Cual es el fundamento de la
tcnica del Ltex?
Sobre una tarjeta de reaccin se mezclan la muestra clnica que alberga el
anticuerpo especfico con el reactivo que contiene el antgeno.
Al entrar en contacto los anticuerpos con el antgeno establecen entramados de
muchas molculas de antgeno y de anticuerpos. Esta aglutinacin de partculas
antignicas forma grumos (Figuras 2a y 2b).


Fundamento de la tcnica del
Ltex
Para que estos grumos sean fcilmente visibles
macroscpicamente, los anticuerpos estn unidos a partculas
inertes de mayor tamao, tales como partculas de ltex.
Cuales son las ventajas y desventajas de estas tcnica?
son extraordinariamente rpidas, ofreciendo resultados en 2-10
minutos, pero en general adolecen de buena sensibilidad, estas
pruebas son mas cualitativos que cuantitativos establecen la
presencia o la ausencia de la sustancia buscada en la muestra
problema.

.




LATEX

Para que se utiliza esta tcnica?
El diagnstico de enfermedades producidas por bacterias,
hongos, ricketsias y parsitos.
Deteccin de autoanticuerpos frente a antgenos nucleares:
factor reumatoide, proteina C reactiva, etc.
Formas de realizar una prueba de ltex
La reaccin de aglutinacin puede llevarse a cabo sobre:
Porta objetos de cristal
En tarjetas visualizadoras


Inmunocromatografa
Cual es el Fundamento?
Sobre una membrana de nitrocelulosa o nylon se encuentran absorbidos en
la lnea de reaccin anticuerpos contra el antgeno que buscamos y sobre la
lnea control anticuerpos anti-conjugado, de forma que cuando la muestra
contiene antgeno, este fluye por la membrana quedando retenido en la
lnea de reaccin.
Inmunocromatografa


En el caso de muestras
negativas que no contienen
antgeno, el conjugado es
retenido nicamente en la
lnea control.

Ests tcnicas son rpidas,
obtenindose resultados en
15-30 minutos.
Enfermedad de CHAGAS
Dx de LABORATORIO
PARASITOLOGICO INMUNOLOGICO
DIRECTOS
INDIRECTOS
INDIRECTOS
Enfermedad de CHAGAS
Dx PARASITOLOGICO
Tcnica del tubo capilar-
Micromtodo
METODOS
DIRECTOS
Gota gruesa / Extendido
Tcnica de Strout
Exmen en fresco
Dx PARASITOLOGICO
Sensibilidad mtodos directos
Fase aguda Fase crnica
Gota Gruesa/Ext. < 70% < 10%
Tcnica de Strout 95 - 100% < 10%
Micromtodo < 10% 95 - 100%
Exmen en fresco 80 - 90% < 10%
Fundamento.
Tcnica de concentracin
Diferencia de gradiente de densidad
G.B. y
Plaquetas
+ T. cruzi
Plas
ma
G.R.
Buffy coat
Micromtodo
Micromtodo: identificacin del tubo
de sangre de cordn
Micromtodo-centrfuga de tubos capilares
TECNICA DEL TUBO CAPILAR
TCNICA DEL TUBO CAPILAR
40X
Lectura del Micromtodo
Se recomienda la utilizacin de esta tcnica por :
Presentar una elevada sensibilidad en Chagas congnito
(95 - 100%)
La utilizacin de poco volumen sanguneo
Bajo costo
Simple metodologa
Tcnica de eleccin en el diagnstico de Chagas
congnito al nacimiento y ANTES DE LOS 6 MESES
TCNICA DEL TUBO CAPILAR
Toxoplasmosis
Qu es la toxoplasmosis?
La toxoplasmosis es una enfermedad causada por un parsito :
Toxoplasma gondii,
parsito intracelular obligado.
Diagnostico de la Toxoplasmosis
La toxoplasmosis puede ser diagnosticada al aislar el parsito por
medio de inoculacin de animales de laboratorio o cultivo celular o
con un perfil serolgico
Las tcnicas serolgicas son capaces de detectar los anticuerpos
creados por el sistema inmune para combatir al parsito, los
anticuerpos a detectar son,los niveles de IgG y/o la presencia de
anticuerpos especficos de IgM.
Diagnostico de la Toxoplasmosis
Que otras pruebas para el diagnostico existen ?
El ELISA y la reaccin de Hemaglutinacin
indirecta.
Es posible tambin demostrar la presencia del
genoma del parsito con la tcnica de PCR.
Reaccin de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI).


Aspectos a tomar en cuenta
Las tcnicas para demostrar anticuerpos especficos contra
T. gondii son mtodos iniciales y prioritarios para el
diagnstico de la Toxoplasmosis.

Fundamentalmente se basan en las determinaciones de
anticuerpos detectndose inmunoglobulinas cada uno con
su significado diagnstico.

TCNICA PARASITOLGICA

Micromtodo o microhematocrito
Para el diagnstico de la enfermedad de Chagas Congnito
Frotis
Para el diagnstico de la Malaria




Qu es sensibilidad y especificidad de una
prueba?
SENSIBILIDAD
Probabilidad de que el resultado de la prueba sea positivo
cuando se realiza sobre muestras de pacientes que realmente
tienen la enfermedad.

ESPECIFICIDAD
Probabilidad de obtener una prueba negativa entre aquellos
pacientes sin la enfermedad.
Qu es valor predictivo positivo y negativo?
Valor predictivo positivo
Proporcin de pacientes con una prueba
positiva, que en realidad tienen la enfermedad
de inters.

Valor predictivo negativo
Proporcin de pacientes con una prueba
negativa que estn en realidad, libres de la
enfermedad de inters.

EJEMPLOS PRCTICS








Medidas de control a tomar en
cuenta
En la interpretacin de los resultados obtenidos por tcnicas
inmunolgicas de deteccin de antgeno es fundamental
introducir suficientes medidas de control que aseguren la calidad
de los mismos.

Es imprescindible incluir siempre controles positivos y negativos.

No debe descuidarse el registro de control de lotes, temperaturas
de neveras para la conservacin de los reactivos y calibracin de
las pipetas automticas y de los equipos necesarios.


GRACIAS