CROMATOGRAFI A

Qu es?

Para que sirve?

Qu tipo de problemas puede resolver?
Qu es?

La cromatografa es una tcnica en donde se
lleva a cabo la separacin de compuestos.

Para que sirve?
Su propsito es identificar, cuantificar o
purificar cada uno de los componentes de una
mezcla de solutos, basndose en las
velocidades con las que se mueve cada soluto
a travs de un medio poroso arrastrado por un
solvente, una mezcla de solventes o por gas.
Cromatografa
En fase lquida
En fase supercrtica
En fase gaseosa
Columna Placa CCF
Adsorcin Particin Intercambio Pares de Intercambio Transferencia Afinidad Exclusin
(slice) inico iones de ligantes de carga
La cromatografa de adsorcin
se utiliza una fase estacionara slida y una fase mvil lquida o gaseosa. El
soluto puede adsorberse en la superficie de las partculas slidas. El
equilibrio entre el estado adsorbido y la solucin es la causa de la separacin
de las molculas del soluto.

La cromatografa de reparto
una fase estacionara forma una pelcula delgada de la superficie de un soporte
slido. El soluto se equilibra entre este lquido estacionario y una fase mvil
lquida o gaseosa.

La cromatografa de intercambio inico
se basa en el equilibrio de los iones de soluto entre el solvente y los sitios fijos
cargados de la fase estacionara esta cuenta con intercambiadores aninicos
(grupos con carga positiva unidos covalentemente) los cuales retienen a los
aniones del soluto y con intercambiadores catinicos (grupos con carga
negativa) retienen a los cationes del soluto.
La cromatografa de exclusin molecular
cromatografa de filtracin en gel, en esta tcnica las molculas se separan por
su tamao se utiliza mucho en la bioqumica para separar molculas grandes
como protenas, carbohidratos e incluso para separar polmeros y
caracterizarlos.


La cromatografa por afinidad
se utilizan interacciones altamente especficas entre un tipo de molculas de
soluto y otras molculas que se unen (inmovilizan) covalentemente a la fase
estacionara.


La cromatografa de lquidos de alta resolucin
se utiliza para separacin de compuestos que no son lo suficientemente voltiles
o no tienen bastante estabilidad trmica para la cromatografa de gases, pues
emplea solventes como fase mvil.
La cromatografa de gases

Se basa en que un lquido voltil o un soluto gaseoso
son arrastrados por una fase mvil gaseosa que
circula sobre un lquido estacionario que recubre un
soporte slido o sobre una superficie slida absortiva.

La fase estacionara suele ser un lquido no voltil que recubre el
interior de la columna o un soporte slido de grano fino. Esta
forma ms comn de cromatografa de gases se llama
cromatografa de reparto o de particin gas lquido.

En ocasiones se utilizan como fase estacionaria partculas
slidas sobre las que el soluto puede adsorberse.

En este caso la tcnica se denomina cromatografa de adsorcin
gas slido.
TEORIAS DE LAS
SEPARACIONES
CROMATOGRFICAS

1)Extracciones.
Coeficiente de Particin entre octanol y agua (Kow)
Este es una medida para la capacidad de distribucin de una
sustancia como un plaguicida entre dos solventes inmiscibles
entre si como el agua (polar) y octanol (relativamente apolar).
2) Teora de platos

SE HACE LA COMPARACIN DE UNA COLUMNA CROMATOGRFICA
CON UNA ANTIGUA COLUMNA DE DESTILACIN
SE CONCIBE A LA COLUMNA CROMATOGRFICA COMO UNA SERIE
DE CAPAS ESTRECHAS
CONTIGUAS LLAMADAS PLATOS TERICOS
DURANTE LA ELUCIN, SE PRODUCE UN EQUILIBRIO EN CADA
PLATO DE LAMUESTRA
ENTRE LA FASE MVIL Y ESTACIONARIA (INFINITAMENTE
RPIDO)
EL NMERO DE PLATOS TERICOS SER ENTONCES
PROPORCIONAL A LA EFICIENCIA

DONDE L ES LA LONGITUD DE LA COLUMNA Y H ES LA ALTURA DE
PLATO LA EFICIENCIA SER ENTONCES INVERSAMENTE
PROPORCIONAL AL ESPESOR(ALTURA) DEL PLATO

H= L/N
C) TEORA CINTICA DE LA
CROMATOGRAFA
A DIFERENCIA DE LA TEORA DE LOS PLATOS, CONSIDERA
QUE EL EQUILIBRIO NO ES INFINITAMENTE RPIDO

LA FORMA DEL CROMATOGRAMA DEPENDE DE LA DIFUSIN
DEL SOLUTO POR LA COLUMNA, DE LA VELOCIDAD DE
ELUCIN Y LOS CAMINOS POR LA FASE ESTACIONARIA.

SI CONSIDERAMOS TODOS LOS MECANISMOS ANTERIORES, SE
DEDUCE LA ECUACIN DE VAN DEEMTER

H = A + B/v + Cv
Donde:
A, B Y C SON CONSTANTES DEPENDIENTES DE LA FASE
ESTACIONARIA Y MVIL
v ES LA VELOCIDAD DE LA FASE MVIL (GASTO)
INSTRUMENTACIN
CG
Diagrama de un cromatografo de Gases
1.-Gas Portador, 2 y 3.- Inyector, 4.- Horno ,
5.-Columna, 6.-Detector, 7.-Registrador
Gas portador

Inerte con respecto a la muestra y a la fase
estacionaria
Capaz de minimizar la difusin gaseosa.
De fcil disponibilidad y con un alto grado
de pureza
Adecuado al tipo de detector que se
emplea.
Gas portador
Los gases ms comnmente usados como gases de
arrastre, son:
Helio, Hidrgeno, Nitrgeno, Argn-metano (95-5%).
La velocidad para un flujo ptimo se puede
determinar experimentalmente empleando la ecuacin
de Van Deempter.
La velocidad de flujo ms eficiente, es el mnimo de
la altura equivalente de un plato terico, o bien, al
mximo del nmero de platos.
Un regulador de presin se emplea para uniformar la
entrada del gas en la columna.
AEPT
Velocidad de flujo
Plano de Van Deempter para la seleccin de la
velocidad de flujo ptimo del gas de arrastre.
SI STEMAS DE MUESTREO
Es el lugar donde se introduce la muestra al cromatgrafo de
gases y en el cual la muestra debe evaporarse de inmediato y
combinarse con el gas de arrastre.
Muestras lquidas.
Se emplea una jeringa, se perfora con ella un septum.
Muestras gaseosas.
Se emplean vlvulas muestreadoras especiales con el empleo de
circuitos muestreadores de volmenes especficos, o bien con
jeringas especiales.
Muestras slidas.
Se recurre a solventes o se emplean jeringas especiales en forma
de esptulas.
COLUMNAS
La columna es el corazn de un sistema
cromatogrfico.
Para seleccionar una columna se requieren
consideraciones especiales:
a) material de la columna
b) tipo de columna
c) dimensiones de la columna
d) seleccin de la fase estacionaria y del soporte
slido.
Fase estacionaria
Silica Fundida
Capa de poliamida
Columna capilar dimetro interno 1/16 in

Empaque y fase
estacionaria
Acero inoxidable, vidrio,
cobre, tefln.
Columna empacada dimetro interno 1/4 o 1/8 in
Diametro interno (mm) 0.25 0.32 0.52 0.75
N mx p/m 4400 3500 2200 1500
AEPT, min mm. 0.225 0.290 0.450 0.680
Capacidad 100 ng 500ng
2g 15g
*Flujo lneal cm/seg 25-35 20-35 20-30 15-25
*Flujo volumen (ml/min 0.7-1.0 1.0-1.7 2.4-3.5 4.0-6.6
*El flujo se da para gas portador Helio, para Nitrgeno multiplicar los valores por 0.5
Parmetros para columnas capilares.
Columnas Capilares Empacadas
Dimetro exterior in
mm
Silica-vidrio
0.4-0.5, 0.8-1.2
1/16
1.59
1/8
3/17

6.35
3/8
9.52
Dimetro interno mm 0.25-0.50 1.2 2.0 2.0 y 4.0 8.0
Platos totales max. 300,000 60,000 48,000 30,000 15,000
Rango de malla ------- 100/120 80/100 60/80 20/40
Vel. lineal cm/seg 25 10 10 7 7
Vel. de flujo ml/min 1-3 10 20 70 120
Tamao de muestra
lquido l
0.010 1.0 2.0 20 1000
Tamao de muestra
gas ml
0.0001-0.01 0.01-0.1 0.1-1.0 1-10 >10
Parmetros para columnas capilares y empacadas.
Anlisis Qumicos para soportes
SiO2 Al
2
O
3
Fe
2
O
3
TiO
2
CaO MgO
Chromosorb W 91.2 4.1 1.15 0.25 0.40 0.65
Chromosorb P 89.22 5.1 1.50 0.30 0.90 1.00
Chromosorb Tipo: A G W P 750 T
Densidad de empaque (g/ml) 0.48 0.58 0.24 0.47 0.30 0.49
Superficie rea (m
2
/g) 2.7 0.5 1.0 4.0 0.8 7.8
pH 7.1 8.5 8.5 6.5 n.r -
Color Blanco Blanco O. Blanco Rosa n.r Blanco
% fase lquida mx. 25 5 25 30 7 n.r
Propiedades Fsicas de los soportes
Soporte:
*superficie especfica grande, *estructura porosa con dimetro
uniforme 10 por poro, *inerte, *tamao uniforme, *con resistencia
mecnica.
I.- Baja Polaridad II.- Polaridad intermedia
Hidrocarburos saturados teresa
Hidrocarburos olefnicos Cetonas
Hidrocarburos aromticos Aldehdos
Halogenuros de alquilo steres
Mercaptanos Aminas terciarias
Sulfuros Compuestos nitro (sin tomos de hidrgeno en
)
CS2
Nitrilos (sin tomos de H en )
III.- Polares IV.- Muy polares
Alcoholes Polihidroxialcoholes
cidos carboxlicos Aminoalcoholes
Fenoles Hidroxicidos
Aminas primarias cidos poliprticos
Oximas Polifenoles
Compuestos nitro (sin tomos de
hidrgeno en )
Nitrilos (sin tomos de H en )
Fase estacionaria
SE 30 350 C mx.
(Siliconas o silicones)
APIEZON (Hidrocarburos mezclados) 275 300 C mx.
OV 17 (Metilfenilsilicona) 300 C mx.
CARBOWAX 20M 250 C mx.
TETRAHIDROXIETILENDIAMINA EDTA 150 C
CH
3
Si O Si O
CH
3
CH
3
CH
3 r
HO CH
2
CH
2
O H
n
FASES L QUI DAS COMUNES USADAS
EN CROMATOGRAFI A DE GASES
Disolventes
Un buen solvente absoluto para los componentes de la muestra,
si la solubilidad es baja, los componentes eluyen rpidamente y la
separacin es pobre.
Ser un buen solvente diferencial para los componentes de la
muestra.
No voltil, la presin de vapor 0.01 a 0.1 mide Hg a la
temperatura de operacin razonable para la vida de la columna.
Trmicamente estable, la inestabilidad puede ser promovida por
el soporte con la influencia de la temperatura.
Qumicamente inerte con respecto a la muestra.
DETECTORES
El detector cromatogrfico es el recurso mediante el cual
se identifica y mide la cantidad de componentes separados
de una muestra.
Caractersticas para un detector.
Selectividad
Sensibilidad o detectabilidad
Respuesta
Ruido y lmite de deteccin.
Rango lineal
Los ms importantes tipos de
detectores cromatogrficos
Conductividad trmica TCD
I onizacin de Flama FI D
Captura de electrones ECD
Fotomtrico de flama FPD
Termoinico especfico TSD
Det. de Hall de conductividad electroltica HECD
Espectrmetro de masas MS
Parmetros ms importantes en la operacin de un
detector de conductividad trmica TCD.
Detector de Conductividad trmica (TCD)
Consiste de una serie de filamentos montados
coaxialmente en uno o 2 cilindros metlicos cuya
temperatura variar al introducir una sustancia diferente
al gas de arrastre, si es que la sustancia tiene una
conductividad trmica diferente.
a) corriente del filamento
b) temperatura del bloque del detector (difiere de la T del
filamento
c) muestra
d) gas de arrastre
Detector de ionizacin de flama (FI D)
Su respuesta es para casi todos los compuestos orgnicos, tiene
una sensibilidad relativamente alta y un amplio rango de
respuesta lineal. Permite anlisis rutinarios de compuestos en el
rango de nanogramos (10
-9
g).
La ionizacin en el FID consiste en la combustin de la muestra
orgnica a una temperatura alta, producto de una flama de H
2
-aire
cuya temperatura es del orden de 2000C.
La reaccin qumica ocurre en la flama del FID, cuando un
compuesto orgnico se quema en la flama se generan iones
positivos y negativos, los iones positivos se colectan sobre un
electrodo, produciendo una corriente elctrica, la cual se
amplifica en un electrmetro, el cual produce una seal capaz de
ser graficada.
Compuestos que dan un mnimo o no dan respuesta al FI D
He O
2
SO
2
CO SiHCl
3
Ar N
2
NO CO
2
SiCl
4
Kr CS
2
N
2
O H
2
O SiF
4
Ne COS NO
2
HCHO
Xe H
2
S NH
3
HCOOH
Sensibilidad del FI D contra el flujo de H
2

Cal /g
Flujo de H
2
(ml/min)
Captura de electrones ECD
Responde a compuestos que contienen grupos
funcionales electronegativos:
Su aplicacin ms comn es para halgenos. Tambin
responde al antraceno, cetoesteroides, nitrobencenos y
fenoles; fumaratos, oxalatos, cetonas conjugadas.
63
Ni
Gas de
arrastre
Iones
Grupo
electronegativo
Corriente de fondo estable a travs
de los electrodos de la celda
Disminucin de la
corriente de la celda
Fotomtrico de flama FPD
Este detector contiene un detector de flama, que
realiza su misma funcin y despus pasa a travs
de un filtro que lleva la muestra a su estado
elemental.
La ventaja de este detector es que pueden
hacerse anlisis rpidos de compuestos de azufre
y fsforo atmico.
Se emplea bsicamente en la industria
petroqumica.
Termoinico especfico TSD
Trabaja mediante una seal de quimiluminiscencia, es
especfico para compuestos que contienen nitrgeno y
fsforo.
Es ~500 veces ms sensible a especies orgnicas que
contienen P que el FID.
Es ~50 veces ms sensible a especies orgnicas que contiene
N que el FID.
Suprime la respuesta a carbn por 3 4 ordenes de
magnitud.
Una esfera de cermica ( Sulfato de Rubidio) calentada 600-
1000C suministra E para la oxidacin, cuya superficie acta
como catalizador para formar iones selectivos de N y P,
mientras que provee condiciones pobres para la formacin
de iones de C.
Detector de Hall de conductividad electroltica
HECD
Este detector responde a compuestos que forman especies
ionizables cuando son oxidadas o reducidas.
La oxidacin o reductor ocurre cuando el efluente del
cromatgrafo ms el gas de reaccin pasan a travs de un horno
calentado.
Las especies qumicas formadas ene l horno, sol disueltas en un
solvente en una celda de conductividad. Cualquier especie
ionizable formada produce un aumento en la conductividad de
la celda.
El HECD es muy selectivo para compuestos que contengan
halgenos, N, S, sin embargo no es mejor que el ECD para
halgenos.
Espectrmetro de masas MS
La principal ventaja de los equipos CG/EM radica en el
poder identificar y cuantificar los componentes de una
mezcla compleja, en un corto tiempo y con cantidades
muy pequeas de muestra.

Requisitos de las muestras:
los componentes de la muestra posean una presin de
vapor alta a la temperatura de operacin de los equipos
(de -10 a 450 C).
todos los componentes de la mezcla sean voltiles, que
eluyan de la columna en un tiempo razonable
que no se degraden trmicamente.