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Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza


Introducción

• La ecotoxicología, desarrollada
a partir de la toxicología y la
química la cual esta definida
como “el estudio del destino y
efecto de agentes tóxicos en
los ecosistemas”, incluyendo
el estudio de los efectos
tóxicos a nivel celular,
individual, poblacional.
• Los bioensayos de toxicidad son
una herramienta fundamental
de la ecotoxicología y se
utilizan normalmente para
detectar efectos agudos o
crónicos de sustancias en
organismos representativos,
especialmente acuáticos, como
bacterias marinas
luminiscentes ,pulgas de agua ,
algas, artemia salina.
Dichos ensayos, en bacterias y
otros microorganismos,
tienen la ventaja de que
presentan rutas bioquímicas
similares a las de los
organismos superiores,
ciclos de vida cortos y
además responden
rápidamente a los cambios
en el medio ambiente.
• En general el
principal objetivo de
este tipo de análisis
es evaluar el nivel
de estimulo que es
necesario para
obtener una
respuesta en un
grupo de individuos
de la población
Pruebas de toxicidad

• Una prueba de toxicidad típica


involucra un agente o estímulo (por
ejemplo, un pesticida, un metal
pesado o una muestra ambiental con
contaminantes químicos), el cual se
aplica a un organismo o grupo de
organismos, sobre el que se evalúa
una cierta respuesta
preseleccionada.
Organismos Utilizados

• Dentro de los organismos comúnmente utilizados


en los bioensayos de toxicidad se encuentran:
– Bacterias
– Hongos
– Algas
– Plantas
– Invertebrados:
• Artemia Salina
• Los cladóceros o pulgas de agua
Los criterios de selección de especies se
fundamentan en los siguientes aspectos:

• Alta y constante sensibilidad a tóxicos.


• Alta disponibilidad y abundancia.
• Económico
• Representatividad de su nivel trófico.
• Significado ambiental en relación con el área
de estudio.
• Amplia distribución e importancia comercial.
• Facilidad de cultivo y adaptabilidad a las
condiciones de laboratorio.
Artemia salina

Fuente casi inagotable de alimento de


excelente calidad para peces e
invertebrados.

"camarón de salina“

Suele habitar en salinas y lagos


hipersalinos del mundo entero

Llegan a tolerar salinidades de hasta


150 ppm (150 grs. de sal por litro de
agua), cuando la salinidad normal del
mar es de 32 a 38 ppm.

Toleran temperaturas muy elevadas de


hasta 40º C.
Tóxico

• Sustancia Química que perjudica las


funciones bioquímicas y fisiológicas del
organismo

• Los metabolitos son los responsables de los


efectos tóxicos principales.
• El metabolito no sea tóxico para el animal pero
si lo sea para el ser humano.
• El metabolito afecta al animal y no al ser
humano puede que un fármaco potencialmente
seguro se descarte
Campo de Aplicación:

• Efluentes de plantas de tratamiento de aguas.


• Evaluaciones de reducción de la toxicidad y
evaluaciones de identificación de toxicidad.
• Monitoreo de aguas superficiales para la
identificación de fuentes de contaminación.
• Monitoreo de aguas de bebida para detectar
contaminación.
• Ensayos en sedimentos.
• Monitoreo y seguimiento de suelos
contaminados en procesos de remediación.
• Monitoreo de biocidas en aguas industriales.
Campo de Aplicación:

• Estudios de Química Clínica, signos fisiológicos,


autopsia, hematología, histología, microscopía
electrónica,
• Estudios sobre el efecto sobre la reproducción:
fecundidad, teratología, efectos perinatales y
postnatales, lactancia
• Desarrollo de nuevos fármacos
¿Qué es la CL 50?

• La abreviación CL50 significa la


concentración que causa la muerte
de la mitad de la población expuesta
al tóxico.
¿Qué es la DL50?

• La abreviación DL50 significa la dosis


que causa la muerte del 50% de la
población examinada
Resumen

• El bioensayo de toxicidad en la Artemia


salina es una herramienta útil para el ensayo
preliminar de sustancias con actividad
biológica entre ellas en este caso HgCl2 y
AgNO3 los objetivos del experimento
realizado fue determinar el efecto dosis-
respuesta de estas sustancias utilizando
concentraciones crecientes en una
población de Artemia salina obteniendo que
la solución de AgNO3 fue más tóxica en
comparación con la solución de HgCl2 .
Objetivos

• Incubación de la Artemia salina


• Observación y Análisis sobre el
efecto dosis respuesta en la artemia
salina
• Calculo de la CL50
Hipótesis

• Mediante un bioensayo de toxicidad


en una población de Artemia salina la
cual es muy sensible a sustancias
citotóxicas se podrá determinar el
efecto dosis-respuesta de HgCl2 y
AgNO3 a concentraciones crecientes.
Metodologí
a
Material biológico utilizado
• Huevecillos liofilizados de Artemia Salina L .
Para la incubación
• Pecera de vidrio de 2 L
• Termómetro
• Foco
• Pecera de 500ml
Metodología
Cristalería y equipo
• Tubos de ensayo
• Pipetas graduadas
• Vasos de pp 150 mL
• Pipetas pasteur con bulbo
• Gradilla
Metodología
Reactivos
• HgCl2 o AgNO3 al 1 %
• Agua de mar
PROCEDIMIENTO
Procedimiento
INCUBACION DE LA
Incubación de la
ARTEMIA
artemia
Preparación de las muestras.
Resultados HgCl2
Concentración

[]=(vol)( [])/vol
t

HgCl2 1g/100mL
PM= 271.5
Tabla de transformación de probabilidad a Unidades probit.

Probabilida 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09
d

0.00 X X X X X X X X X X

0.10 X X X X X X X X X
4.0
0.20 X X X X X X 1X X X X

0.30 X X X X X X X X X
4.5
… .. … … 6… … … … .. .. ...
HgCl2
Concentración

[]=(vol)( [])/vol
t

HgCl2 1g/100mL
M= # moles/ L. de M= 0.0368
PM= 271.5 solución
Curva dosis-respuesta cuantal

CL50=
50% 10

X
Resultados

10 = 0.0136

-
1.866
AgNO3

AgNO3 1g/100mL M= # moles/ L. de M= 0.058


PM= 169.9 solución
10 = 0.021

-1.669
Análisis probit en Artemias salinas con HgCl2

Ecuación de la recta
• Y= mx + b
y = 3.088x + Donde:
U.P= βX log C + b= 11.7 = α
11.7 m= 3.088 = β
α
• U.P=3.08 x log C11. +
Cálculo8de la 7
• µ
CL50 50
= 5-α/β
µ50 = 5- / =
11.7 3.088 -2.169
CL50 = 10
µ50

• CL50 = 10-2.169 =
0.00676 M= 1.835 X10-
3 g/mL
Análisis probit en Artemias salinas con AgNO3

Ecuación de la recta
• Y= mx + b
Donde:
y = 2.914x + b= 10.715 = α
U.P= βX log C +
10.715 m= 2.914 = β
α
U.P= 2.914x + log C
Cálculo de la CL50
+ •10.715
• µ50 = 5-α/β

µ50 = 5- =
10.715/2.914 -1.96
CL50 = 10 = 0.0109 M= 1.851 X10-3
-
1
1.961
g/mL
Por lo tanto
• HgCl2 estándar
0.00676 M= 1.835 X10-3 g/mL
• AgNO3
0.0109 M= 1.851 X10-3 g/mL

Potencia relativa
Pr= CL50 p/ CL50 st.
Pr= 0.0109/0.00676= 1.612
Conclusión

• Los bioensayos de toxicidad involucra la


exposición de organismos a una serie de
diferentes concentraciones de la sustancia y
determinando la respuesta del organismo. La
respuesta del organismo usualmente
depende de la especie y el tipo de prueba, y
puede incluir una reducción del crecimiento o
supervivencia. Estos bioensayos nos permiten
cuantificar las concentraciones letales de un
sustancia a una especie en particular. El valor
calculado se denomina concentración letal
media (CL50 ) y corresponde a la concentración
de una sustancia que causa la muerte al 50 %
de la población experimental.
Referencias

• Goldenstein Avrám Md, Lewis Aronow, Summer M. Kalman, “Farmacología”, Ed Limusa;


México 1979
• Smith Cedric M. MD, Alan M Reynard, “Farmacología”, Ed. Médica Panamericana, México
1993
• Katzung G.Bertram ,“Farmacología Básica Clínica”, Ed. Manual Moderno, 9na ED, México,
2005
• Conn M. 1991. “Principios de farmacología”, 1 ed. Manual moderno, México.
• Goodman & Gillman. 2006. “Las bases farmacológicas de la terapéutica”, 11° ed. Mc Graw
Hill, México
• Melloni J. 2006. “Diccionario medico ilustrado”. editorial Morbán, Madrid, España.
• Rang H. P.; Dale M. M.; Farmacología, editorial Harcourt, 4º edición, España, Barcelona, 2002
• Pierre Mitchell Aristil Chery; Manual de Farmacología; Méndez editores, 2º edición, México,
D:F: 2003
• Goldstein M. D. Farmacología, Editorial Limusa, México D:F:, 1979
• http://www.tesisenred.net/TDX/TDR_UM/TESIS/AVAILABLE/TDR-1020106-
133045//Tasm13de16.pdf
• http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma05/tox/tox02.htm