Prof.

MARCO SALAZAR CASTILLO

DEPARTAMENTO QUMICA BIOLGICA y FISIOLOGA ANIMAL
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
Maquinas moleculares muy eficientes.

Su enorme potencial cataltico requiere un control
eficaz, para:
evitar que la actividad que se realiza se exceda de los
lmites.
hacer flexible y permitir adaptarse a situaciones de
rpidos cambios metablicos

Su naturaleza ha desarrollado un interesante
sistema de control que supervisa y coordina las
actividades catalticas a diversos niveles.


Control de la actividad enzimtica
Propiedades de las enzimas:
Velocidad, concentracin y tiempo de reaccin
Sustrato
pH
Temperatura
Cofactores, vitaminas y hormonas
Inhibidores
Control de la actividad enzimtica:
propiedades de las enzimas

Velocidad de la reaccin: rapidez con la que
procede una reaccin. Cambio en concentracin
de producto (aparece) o reactivo ( desaparece)
por unidad de tiempo.

Concentracin: hiprbola; mayor concentracin
de sustrato la enzima se satura y la velocidad de
reaccin es mxima.

Tiempo de reaccin: la velocidad disminuye con
el tiempo.
Efecto de la[E] sobre la actividad enzimtica
Elementos de la actividad enzimtica
[E] VARA
[S] constante
pH constante
Temperatura constante
Tiempo constante
Cofactores
Inhibidores
Las constantes de velocidad
caracterizan las reacciones qumicas
La termodinmica permite hacer afirmaciones
sobre la DIRECCIN en que transcurren las
reacciones, pero no sobre la VELOCIDAD con se
stas se realizan.

VELOCIDAD DE REACCIN (V).- consumo de
sustrato o formacin de producto por unidad de
tiempo.
S P
V = -d(S) / dt = d(P) / dt

La velocidad de cada reaccin depende de la
concentracin de la sustancia que se modifica.

Si se vara la (S): V = k (S)
V aumenta proporcionalmente a la (S)
Efecto de la[E] sobre la actividad
enzimtica
Elementos de la actividad enzimtica
[E] constante
[S] VARA
pH constante
Temperatura constante
Tiempo constante
Cofactores
Inhibidores
EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES DE
SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
La velocidad de una reaccin enzimtica depende de la
concentracin de sustrato. La Figura 1 muestra la
velocidad de una reaccin enzimtica a 6 concentraciones
distintas de sustrato.

Adems, la presencia de los productos finales puede
hacer que la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su
sentido (Figura 2 ).

Fig. 1 Fig. 2
MODELO CINTICO DE
MICHAELIS-MENTEN
Maud Menten
Leonor Michaelis
E + S [ES] E + P
K
3
K
2
K
1
K
1
y K
3
son constantes de formacin y desaparicin del complejo ES.
K
2
es constante de formacin de P y E libre.
La velocidad de formacin de producto depende de [ES]
V
o
= K
2
[ES]
[ES] no es una magnitud accesible experimentalmente; se mide en forma
aproximada a partir de [E] y de [S]
Formacin ES: V = K
1
[E][S] Degradacin ES: V = K
2
[ES] + K
3
[ES]
K
M
alto, baja afinidad enzimtica
K
M
bajo, alta afinidad enzimtica
Si K
2
<< K
3 ;
K
M
~ K
3
/ K
1
= K
D
NUMERO DE RECAMBIO Turnover number.-
nmero de molculas de sustrato
transformadas por una molcula de
enzima por unidad de tiempo
La constante de Michaelis-Menten (K
M
) es un parmetro
cintico importante por mltiples razones:
K
M
es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad
de la velocidad mxima. En efecto, si K
M
= [S], la ecuacin de Michaelis-Menten se
reduce a: V
o
= Vmax/2

El valor de K
M
da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor K
M
, mayor
afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor K
M
, menor afinidad. Este hecho tiene
fcil explicacin si tenemos en cuenta que K
M
se define como (k
2
+k
3
/k
1
), donde las
reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la reaccin 1 lo forma. As, si K
M

es grande, el complejo ES es inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca
afinidad hacia el sustrato), y si KM es pequea, el complejo ES es estable, ya que
predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).

La K
M
del sustrato natural es menor que la de los sustratos anlogos. Si dos sustratos
del mismo enzima tienen distinta K
M
, el que presente mayor K
M
tiene menor afinidad por el
enzima, y la reaccin transcurre siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor
K
M
, salvo a concentraciones saturantes de sustrato, donde la v = Vmax.

Los valores de K
M
de muchos enzimas son prximos a los de la concentracin
fisiolgica de sus sustratos, de forma que pequeas variaciones en la [S] pueden
suponer grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metablica.
Parmetros Cinticos
Ejemplo:

[S] (g/L) V
o
(g/L.h)
0,25 0,78
0,51 1,25
1,03 1,66
2,52 2,19
4,33 2,35
7,25 2,57
0,0
1,0
2,0
3,0
0 2 4 6 8
[S] (g/L)
V
o

(
g
/
L
.
h
)
Parmetros Cinticos
Ejemplo: Lineweaver-Burk

y = 0,228x + 0,3668
R
2
= 0,9991
0,0
0,4
0,8
1,2
1,6
0 1 2 3 4 5
1/[S] (L/g)
1
/
V
o

(
L
.
h
/
g
)


L
g
K
V
K
h L
g
V
V
S V
V S V
K
V
m
mx
m
mx
mx
mx mx
m
622 , 0 228 , 0
73 , 2 3668 , 0
1
Portanto,
3668 , 0
1
228 , 0
1
1 1 1
0
0

Estructura
globular
Hervir con HCl
Tripsina
Temperatura elevada
pH extremo
Funcionalidad Inactiva
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
Elementos de la actividad enzimtica
[E] constante
[S] constante
pH VARA
Temperatura constante
Tiempo constante
Cofactores
Inhibidores
EFECTO DEL pH SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables
(carboxilos -COOH; amino -NH
2
; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos.

Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener
carga elctrica positiva, negativa o neutra.

Como la conformacin de las protenas depende,
en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en
el cual la conformacin ser la ms adecuada para
la actividad cataltica. Este es el llamado pH
ptimo.
La mayora de los enzimas son muy sensibles a los
cambios de pH.

Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo
del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad.

Ej, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa
lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10. Como
ligeros cambios del pH pueden provocar la
desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han
desarrollado sistemas ms o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores
fisiolgicos.

Pepsina 1.5
Tripsina 7.7
Catalasa 7.6
Arginasa 9.7
Fumarasa 7.8
Ribonucleasa 7.8
Enzima pH ptimo
Efecto de la TEMPERATURA sobre la
actividad enzimtica
Elementos de la actividad enzimtica
[E] constante
[S] constante
pH constante
Temperatura VARA
Tiempo constante
Cofactores
Inhibidores
EFECTO DE LA TEMPERATURA
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
En general, los aumentos de temperatura aceleran las
reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la
velocidad de reaccin se duplica.

Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley
general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor.

La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se
llama temperatura ptima. Por encima de esta temperatura,
el aumento de velocidad de la reaccin debido a la
temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad
cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la
actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

Mamferos 37
Bacterias y algas aprox. 100
Bacterias rticas aprox. 0
Enzima Temp. pt.
(
o
C)
Bacterias en muestra de hielo antigua
E: PM 100000, 7 nm
S: PM 250, 0.8 nm
Cofactor
Orgnico:
Coenzimas
NAD,
FAD,
CoASH.
Inorgnico:
Fe
2+
, Mn
2+
, Zn
2+
,etc.
Grupo Prosttico

Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad
de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un
minuto.

La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por
miligramo de protena (U/mg protena) o por mililitro de disolucin
(U/mL).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha
definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de
enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta
unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 10
6
moles y 1 minuto
son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 10
6
U. Esta
unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los
submltiplos como el microkatal (kat, 10
-6
kat) o el nanokatal
(nkat, 10
-9
kat).

Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el nmero
de centros activos por molcula de enzima, las medidas de
actividad enzimtica permiten calcular el nmero de recambio del
enzima, o sea, el nmero de reacciones elementales que realiza
el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.