CITOGENTICA

CONVENCIONAL
RUSMER PUMAPILLO LAGUNA.
Estudio de cromosomas, estructura y herencia.
Los transtornos cromosmicos constituyen una entidad
dentro de las enfermedades genticas.

CITOGENTICA CONVENCIONAL
Estudio Citogentico/
Cromosmico

Clulas estn divisin celular (Mitosis)
Anlisis cromosmico (morfologa y patrn de bandas)
en Metafase.
Algunas clulas normalmente en proceso de
proliferacin y diferenciacin por lo que no necesitan de
un estimulante mitognico para que entren divisin.
Otras clulas ya diferenciadas requieren de un
estimulante mitgeno para que entren en mitosis.
Cultivos Indirectos y Cultivos Directos
Cultivos a corto plazo y cultivos a largo plazo
Cultivo Celular Directo

La clula no requiere de un estimulante mitognico para entrar
en divisin celular.
Cultivo de Clulas Fetales
Cultivo a largo plazo (10-14 d)
Muestra: Liquido Amnitico obtenido por Amniocentesis
alrededor de la 16 semana de gestacin.
Dx prenatal de una alteracin cromosmica.
Cultivo de Vellosidades Coriales
Cultivo corto plazo (24 48 horas) y Cultivo largo plazo (10-
14 d)
Muestra: Biopsia aspiracin de Vellosidades Corinicas
alrededor de la 10 sem. de gestacin.
Dx prenatal de una alteracin cromosmica.
Cultivo de Restos Endouterinos
Cultivo largo plazo (10-14 das)
Muestra: Legrado uterino y/o producto abortado
Detectar una anomala cromosmica del producto.
Procedimiento (Cultivo Directo de
Lquidos Orgnicos )

Centrifugar a 1000 RPM
por 10min.
Eliminar sobrenadante y
colectar los sedimentos
Adicionar 6 ml. De
Solucin Hipotnica ( ClK
0.075 M ) agitar con
Pipeta Pasteur
Incubar a 37C por 30
min.
Centrifugar a 1000 RPM
por 10 min. Eliminar el
sobrenandante.

Procedimiento (Cultivo Directo
de Lquidos Orgnicos )

Aadir 5 ml de Fijador. Agitar
con Pipeta Pasteur y dejar a TA
por 30 min.
Centrifugar a 1000 RPM por 10
min, eliminar sobrenandante y
aadir 5 ml de Fijador. Repetir
este paso 2 o 3 veces.
Colocar 3 a 4 gotas sobre una
lmina portaobjeto y fijarlo al
calor.
Coloracin convencional
(Giemsa).
Bandeo Cromosmico (Banda
GTG).
Observacin Microscpica.

Cultivo Celular Indirecto

La clula requiere de un estimulante mitognico
para que entre en divisin celular.
Cultivo de Linfocitos
Cultivo a corto plazo (72 horas)
Muestra: Sangre Perifrica
Se realiza para detectar cualquier alteracin
cromosmica constitucional (que el defecto
cromosmico este presente en todas las clulas
de nuestro organismo).
Se utiliza para detectar las autosomopatas
(Sndromes Down, Patau, Edwards, etc.) y las
Gonosomopatas (Sndromes de Turner,
Triple X, Klinefelter, etc.)
Cultivo Celular: MEDIOS DE CULTIVO
CELULAR


Contienen todos los aminocidos, vitaminas,
cofactores, coenzimas, enzimas, sales, iones,
indicadores de pH. Todo lo necesario para que la
clula pueda dividirse in vitro.
Existen distintos medios de cultivo los cuales se
seleccionan dependiendo del tipo de muestra o
tipo de clula a cultivar y lograr que estos
respondan adecuadamente con un crecimiento
celular.
Cultivo Celular
Medios de Cultivo ms Utilizados
1. Medio McCoys 5A Modified
Cultivo Sangre Perifrica
(Linfocitos)

2. Medio RPMI 1640:
Cultivo Sangre Perifrica
(Linfocitos)

3. Medio Tc199:
Cultivo Sangre Perifrica
(Linfocitos)

4. Medio Ham F10 Ham F12
Cultivo de clulas fetales
Cultivo Celular
SUPLEMENTOS
Las clulas requieren para su crecimiento y divisin
celular de suplementos, los cuales sern utilizados
dependiendo del tipo de clulas que se desea
cultivar y del tipo de estudio citogentico
requerido.

1.- SUERO BOVINO FETAL (SBF) : Se utiliza a
diferentes concentraciones:
20% para el cultivo de SP
30% para el cultivo de clulas fetales
Cultivo Celular
2.- PENICILINA + ESTREPTOMICINA: Utilizado como
antibiticos para evitar la contaminacin bacteriana.

3.- ANTIMICOTICOS: Fungizona para evitar el
crecimiento de hongos, si es que fuera necesario.

4.- L- GLUTAMINA: Aa que en su forma levgira mejora
el crecimiento celular.

5.- ESTIMULANTE MITOGENICO: Utilizado para
estimular el proceso de mitosis en el cultivo de
linfocitos.
Fitohemaglutinina (PHA)
Cultivo Celular
Medios de Cultivo y Suplementos
Formas de presentacin :Medio
Lquido y en polvo
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Toma de Muestra
. Condiciones de
asepsia
. Anticoagulante
heparina
. Volumen de muestra
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Seleccin de los medios de cultivo y suplementos
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Sedimentar la mx 2h aprox.

CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Eliminar el
P.G (dejar un
pequeo remanente)
dejando la interfase
(Globulos blancos)
y el plasma.
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Se utilizar para la
siembra( 20 gotas).
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. Incubar a 37c por
72 horas
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. El ndice mximo de
mitosis se obtiene a las
70-72horas. Por lo
tanto
habrn ms clulas en
metafase
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. Diariamente se
debe mezclar el
frasco de cultivo.
. Controlar cambios
de color que indica
cambios del ph o
turbidez que indica
contaminacin.
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. COSECHA
1. Colchicinizacin
. Agregar Colchicina
100 uL. Mezclar
suavemente


CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. Incubar a 37C por
15 minutos
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Eliminar el
sobrenadante.
Trabajar siempre
con el sedimento
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
2. Hipotonizacin
. Adicionar solucin
hipotnica: Cloruro
de Potasio 0.075 M
7mL y homogenizar.
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. Incubar a 37C
por 12
minutos.
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
3. FIJACIN:
. Adicionar Fijador
(Metanol +Acido
Actico Glacial )
V/V
. Sacar el tubo de la estufa y
adicionar 5 mL de fijador Carnoy
para detener la accin de la
solucin hipotnica.
Observar color marrn oscuro.
. Homogenizar
. Centrifugar 2500 RPM por 12
minutos.
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
. Eliminar el
sobrenadante y
repetir el paso
anterior 3 veces
hasta que ya no
haya turbidez.
El ltimo sedimento
resuspender con
1mL de fijador.
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
4. Preparado Cromosmico
. Adicionar 3 a 4 gotas
sobre
una lmina portaobjetos
helada.
. Secar al calor de un
mechero.
. Guardar en una gradilla
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Coloracin Convencional: Bandeo GTG
- Tripsina 1% (buffer)
- Solucin Salina Fisiolgica
- Giemsa 4%
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
Cromosomas con Bandas G
CULTIVO DE SANGRE PERIFERICA
(LINFOCITOS)
CULTIVO DE SANGRE
PERIFERICA (LINFOCITOS)

Elaboracin del Cariograma
GRACIAS