Petruccio Tenrio Medeiros

CROMATOGRAFIA
Histrico
M. TSWEET (1903): Separao de misturas de
pigmentos vegetais em colunas recheadas com
adsorventes slidos e solventes variados.
ter de
petrleo
CaCO
3
mistura de
pigmentos
pigmentos
separados
Cromatografia =
kroma [cor] + graph [escrever]
(grego)
CROMATOGRAFIA
Princpio Bsico
Separao de misturas por interao diferencial dos seus
componentes entre uma FASE ESTACIONRIA (lquido ou
slido) e uma FASE MVEL (lquido ou gs).
CROMATOGRAFIA
Modalidades e Classificao
FM = Lquido
FM = Gs
Cromatografia
Lquida
Cromatografia
Gasosa (CG)
Em CG a FE
pode ser:
Slida
Lquida
Cromatografia
Gs-Slido (CGS)
Cromatografia
Gs-Lquido (CGL)
CROMATOGRAFIA GASOSA
Histrico
Presentemente:
Vendas de equipamentos e acessrios para CG nos EUA
estimadas em mais de US$ 750.000.000 (1995).
1940
1950
1960
CGS rudimentar
CGL proposta (Martin e Synge)
Separao de cidos orgni-
cos por CGL: primeiro cro-
matgrafo (Martin e J ames)
Primeiro equipamento comer-
cial (Griffin & George)
Detector por Densidade de
Gs (Martin e James)
Detector por Ionizao em
Chama (McWillian e Dewar)
Detector por Captura de Eletrons
(Lovelock e Lipsky)
Colunas Capilares (Golay)
CROMATOGRAFIA GASOSA
Aplicabilidade
Quais misturas podem ser separadas por CG ?
Misturas cujos constituintes sejam
VOLTEIS (=evaporveis)
(para uma substncia qualquer poder ser
arrastada por um fluxo de um gs ela
deve ser dissolver - pelo menos parcialmente -
nesse gs)
DE FORMA GERAL:
CG aplicvel para separao e anlise
de misturas cujos constituintes tenham
PONTOS DE EBULIO de at 300
o
C
e que termicamente estveis.
O Cromatgrafo a Gs
1
2
3
4
6
5
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso.
2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra.
3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna.
4 - Detector.
5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal.
6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).
Observao: em vermelho: temperatura controlada
INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Fase Mvel em CG: NO interage com a amos-
tra - apenas a carrega atravs da coluna. Assim
usualmente referida como GS DE ARRASTE
Requisitos:
INERTE No deve reagir com a amostra, fase
estacionria ou superfcies do instrumento.
PURO Deve ser isento de impurezas que
possam degradar a fase estacionria.
Impurezas tpicas em gases e seus efeitos:
oxida / hidroliza algumas FE
incompatveis com DCE
H
2
O, O
2
hidrocarbonetos

rudo no sinal de DIC
INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Requisitos:
CUSTO Gases de altssima pureza podem ser
muito caros.
COMPATVEL COM DETECTOR Cada detector
demanda um gs de arraste especfico para
melhor funcionamento.
Seleo de Gases de Arraste em Funo do Detector:
He , H
2

DCT

DIC

N
2
, H
2

DCE

N
2
(SS), Ar + 5% CH
4

C
U
S
T
O

PUREZA
A
B
C
A = 99,995 % (4.5)
B = 99,999 % (5.0)
C = 99,9999 % (6.0)
INSTRUMENTAO
Alimentao de Gs de Arraste
Componentes necessrios linha de gs:
controladores de vazo / presso de gs
dispositivos para purificao de gs (traps)
1
2
3
4
5
6
1 - Cilindro de Gs
2 - Regulador de Presso Primrio
3 - Traps para eliminar impurezas do gs
4 - Regulador de Presso Secundrio
5 - Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo)
6 - Medidor de Vazo (Rotmetro)
Nota: Tubos e Conexes: Ao Inox ou Cobre
INSTRUMENTAO
Dispositivos de Injeo de Amostra
Os dispositivos para injeo (INJETORES ou
VAPORIZADORES) devem prover meios de
introduo INSTANTNEA da amostra na
coluna cromatogrfica
Injeo instantnea:
Injeo lenta:
t = 0
t = x
t = 0
t = x
INSTRUMENTAO
Injetor on-column Convencional
1
2
3
4
1 - Septo (silicone)
2 - Alimentao de gs de arraste)
3 - Bloco metlico aquecido
4 - Ponta da coluna cromatogrfica
INSTRUMENTAO
Injeo on-column de lquidos
1 2 3
1 - Ponta da agulha da microseringa introduzida no
incio da coluna.
2 - Amostra injetada e vaporizada instantneamente
no incio da coluna.
3 - Plug de vapor de amostra forado pelo gs de
arraste a fluir pela coluna.
INSTRUMENTAO
Parmetros de Injeo
TEMPERATURA DO INJETOR Deve ser sufi-
cientemente elevada para que a amostra vapo-
rize-se imediatamente, mas sem decomposio
Regra Geral: T
inj
= 50
o
C acima da temperatura
de ebulio do componente menos voltil
VOLUME INJETADO Depende do tipo de
coluna e do estado fsico da amostra
COLUNA
Amostras
Gasosas
Amostras
Lquidas
empacotada
C = 3,2 mm (
1
/
4
)
0,1 ml ... 50 mL 0,2 L ... 20 L
capilar
C = 0,25 mm
0,001 ml ... 0,1 mL 0,01 L ... 3 L
Slidos: convencionalmente se dissolve em um
solvente adequado e injeta-se a soluo
INSTRUMENTAO
Microsseringas para Injeo
LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 L, 5 L e 10 L
mbolo
corpo (pirex)
agulha (inox 316)
Microseringa de 10 L:
Microseringa de 1 L (seo ampliada):
corpo
guia
mbolo (fio de ao
soldado ao guia)
agulha
INSTRUMENTAO
Colunas: Definies Bsicas
EMPACOTADA
C = 3 a 6 mm
L = 0,5 m a 5 m
Recheada com slido pul-
verizado (FE slida ou FE
lquida depositada sobre
as partculas do recheio)
CAPILAR
C = 0,1 a 0,5 mm
L = 5 m a 100 m
Paredes internas recober-
tas com um filme fino (fra-
o de m) de FE lquida
ou slida
INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
Alm da interao com a FE, o tempo que um
analito demora para percorrer a coluna depende
de sua PRESSO DE VAPOR (p
0
).
p
0
= f
Estrutura qumica
do analito
Temperatura
da coluna
Temperatura
da
coluna
Presso
de
vapor
Velocidade
de
migrao
ANALITO ELUI MAIS RAPIDA-
MENTE (MENOR RETENO)
INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
T
E
M
P
E
R
A
T
U
R
A

D
A

C
O
L
U
N
A

CONTROLE CONFIVEL DA TEMPERATURA
DA COLUNA ESSENCIAL PARA OBTER
BOA SEPARAO EM CG
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno:
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURA DE
USO Pelo menos de T
ambiente
at 400
o
C.
Sistemas criognicos (T < T
ambiente
) podem
ser necessrios em casos especiais.
TEMPERATURA INDEPENDENTE DOS
DEMAIS MDULOS No deve ser
afetado pela temperatura do injetor e
detector.
TEMPERATURA UNIFORME EM SEU
INTERIOR Sistemas de ventilao interna
muito eficientes para manter a
temperatura homognea em todo forno.
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno:
FCIL ACESSO COLUNA A operao
de troca de coluna pode ser frequente.
AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO
RPIDO Importante tanto em anlises de
rotina e durante o desenvolvimento de
metodologias analticas novas.
TEMPERATURA ESTVEL E
REPRODUTVEL
A temperatura deve ser mantida com
exatido e preciso de 0,1C.
Em cromatgrafos modernos (depois de 1980),
o controle de temperatura do forno totalmente
operado por microprocessadores.
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno:
FCIL ACESSO COLUNA A operao
de troca de coluna pode ser frequente.
AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO
RPIDO Importante tanto em anlises de
rotina e durante o desenvolvimento de
metodologias analticas novas.
TEMPERATURA ESTVEL E
REPRODUTVEL
A temperatura deve ser mantida com
exatido e preciso de 0,1C.
Em cromatgrafos modernos (depois de 1980),
o controle de temperatura do forno totalmente
operado por microprocessadores.
INSTRUMENTAO
Programao Linear de Temperatura
Misturas complexas (constituintes com
volatilidades muito diferentes)
separadas ISOTERMICAMENTE:
T
COL
BAIXA:
- Componentes mais
volteis so separados
- Componentes menos vol-
teis demoram a eluir, saindo
como picos mal definidos
T
COL
ALTA:
- Componentes mais vol-
teis no so separados
- Componentes menos vol-
teis eluem mais rapidamente
INSTRUMENTAO
Programao Linear de Temperatura
A temperatura do forno pode ser variada
linearmente durante a separao:
Consegue-se boa
separao dos
componentes da
amostra em menor
tempo
TEMPO
T
E
M
P
E
R
A
T
U
R
A

t
INI
t
FIM

T
INI

T
FIM

R
Parmetros de uma programao de temperatura:
T
INI
Temperatura Inicial
T
FIM
Temperatura Final
t
INI
Tempo Isotrmico Inicial
t
FIM
Tempo Final do Programa
R Velocidade de Aquecimento
INSTRUMENTAO
Programao Linear de Temperatura
Possveis problemas associados PLT:
VARIAES DE VAZO DO GS DE ARRASTE
A viscosidade de um gs aumenta com a
temperatura.
viscosidade vazo
DERIVA (DRIFT) NA LINHA DE BASE Devido
ao aumento de volatilizao de FE lquida
INSTRUMENTAO
Detectores
Dispositivos que examinam continuamente o
material eluido, gerando sinal quando da pas-
sagem de substncias que no o gs de arraste
Grfico Sinal x Tempo = CROMATOGRAMA
Idealmente: cada substncia separada aparece
como um PICO no cromatograma.
INSTRUMENTAO
Detectores
Mais Importantes:
DETECTOR POR CAPTURA DE ELTRONS
(DCE OU ECD) Supresso de corrente
causada pela absoro de eltrons por
eluatos altamente eletroflicos.
DETECTOR POR CONDUTIVIDADE TRMICA
(DCT OU TCD) Variao da condutividade
trmica do gs de arraste.
DETECTOR POR IONIZAO EM CHAMA (DIC
OU FID) ons gerados durante a queima
dos eluatos em uma chama de H
2
+ ar.
REGISTRO
DE
SINAL
ANALGICO
Registradores XY
DIGITAL
Integradores
Computadores
TEORIA BSICA
Tempo de Reteno Ajustado, t
R

t
R

t
M

t
R
= t
R
- t
M

TEMPO
S
I
N
A
L

t
R
= Tempo de Reteno (tempo decorrido entre a in-
jeo e o pice do pico cromatogrfico)
t
M
= Tempo de Reteno do Composto No-Retido
(tempo mnimo para um composto que no interaja
com a FE atravesse a coluna)
t
R
= Tempo de Reteno Ajustado (tempo mdio que
as molculas do analito passam sorvidas na FE)
O parmetro diretamente mensurvel de
reteno de um analito o
TEMPO DE RETENO AJUSTADO, t
R
:
TEORIA BSICA
Volume de Reteno Ajustado, V
R

Embora no diretamente mensurvel, o par-
metro fundamental de reteno o
VOLUME DE RETENO AJUSTADO, V
R
:
vazo do gs de arraste
M R R
t t t =
'
x
C
F
V
R
= Volume de Reteno (volume de gs de arraste
necessrio para eluir um analito)
V
M
= Volume de Fase Mvel (volume de gs de ar-
raste contido na coluna; volume morto)
V
R
= Volume de Reteno Ajustado (volume de gs
de arraste consumido enquanto o analito est
sorvido na FE)
V
R
= f
Fatores termodinmicos
Parmetros dimensionais da coluna
TEORIA BSICA
Constante de Distribuio, K
C

Coluna cromatogrfica: srie de estgios inde-
pendentes onde acontece o equilbrio entre o analito
dissolvido na fase estacionria e no gs de arraste:
Ocorre um quase-equilbrio en-
tre o analito sorvido na FE e dis-
solvido no gs de arraste.
M
S
C
A
A
K =
K
C
= Constante de Distribuio
[A]
S
= concentrao do analito na FE
[A]
M
= concentrao do analito no gs
MENOR RETENO !!!
Volatilidade
[A]
M

Afinidade pela FE
[A]
S

TEORIA BSICA
Fator de Reteno, k
Exprimindo o equilbrio em termos da MASSA do
analito em cada fase, ao invs da concentrao:
M
S
W
W
k =
FATOR DE RETENO, k:
razo entre as massas de
analito contidas na FE
(W
s
) e gs de arraste (W
M
)
S
M
V
V
= |
RAZO DE FASES, |:
razo entre volumes de FE
e gs de arraste na coluna
O fator de reteno k depen-
de da constante termodi-
nmica de distribuio K
C
e
da razo de fases | da coluna
TEORIA BSICA
Razo de Fases,
Depende das DIMENSES da coluna:
L = comprimento da coluna
r
C
= raio
da coluna
d
f
= espessura
do filme de FE
f C
f C
d r
d r
2
2

= |
r
C
>> d
f

d
C
/ mm d
f
/ m
|
0.10 0.10 250
0.20 0.11 455
0.20 0.33 152
0.25 0.25 250
0.25 1.00 63
0.32 0.17 471
0.32 0.52 154
0.32 1.00 80
0.53 0.88 151
0.53 2.65 50
0.53 5.00 27
Valores de | para
colunas capilares de
dimenses tpicas:
Empacotadas:
5 < | < 50
TEORIA BSICA
Relaes entre V
R
, K
C
e
V
R
pode ser definido em funo de K
C
e |:
V
R
depende diretamente da constante de dis-
tribuio do soluto entre a FE e o gs de arraste e
das dimenses da coluna.
Outra
combinao
possvel:
possvel estimar
tanto o fator de
reteno quanto a
constante de
distribuio a partir do
cromatograma
TEORIA BSICA
Eficincia de Sistemas Cromatogrficos
A migrao um
analito pela coluna
provoca
inevitavelmente o
alargamento da sua
banda:
TEMPO
Efeitos do alargamento excessivo de picos:
Separao deficiente de
analitos com retenes
prximas.
Picos mais largos e
menos intensos = menor
detectabilidade
EFICINCIA Capacidade de eluio com o
mnimo de disperso do analito.
TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
Supondo a coluna cromatogrfica como uma srie de
estgios separados onde ocorre o equilbrio entre o
analito, a FE e o gs de arraste:
Cada estgio de
equilbrio chamado de
PRATO TERICO
O nmero de pratos te-
ricos de uma coluna (N)
pode ser calculado por:
Coluna mais
eficiente
t
R

w
b

N
TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO TERI-
CO (H) Tamanho de cada estgio de equilbrio
Valores tpicos de H e N:
d
C
d
f
H N
0.10 0.25 0.081 370370
0.25 0.25 0.156 192308
0.32 0.32 0.200 150000
0.32 0.50 0.228 131579
0.32 1.00 0.294 102041
0.32 5.00 0.435 68966
0.53 1.00 0.426 70423
0.53 5.00 0.683 43924
2.16 10% 0.549 3643
2.16 5% 0.500 4000
Capilares, L = 30 m
Empacotadas, L = 2 m
Valores de H para colunas capilares e empacotadas
so prximos, mas como L para capilares MUITO
maior tipicamente elas so mais eficientes
(L = comprimento da coluna)
TEORIA BSICA
Otimizao da Eficincia
A altura equivalente a um prato torico funo
da velocidade linear mdia do gs de arraste u:
H

u
u
MAX

H
MIN

O valor de H
pode ser
minimizado
otimizando-
se a vazo
de gs de
arraste
Relaes algbricas entre H e u:
- Colunas Empacotadas: Equao de van Deemter
- Colunas Capilares: Equao de Golay
(A, B, C = constantes)
(B, C
M
, C
S
= constantes)
FASES ESTACIONRIAS
Conceitos Gerais
LQUIDOS Depositados sobre a superfcie de: s-
lidos porosos inertes (colunas empacotadas) ou de
tubos finos de materiais inertes (colunas capilares)
FE
lquida
SUPORTE
Slido inerte
poroso
Tubo capilar de
material inerte
SLIDOS Colunas recheadas com material
finamente granulado (empacotadas) ou depositado
sobre a superfcie interna do tubo (capilar)
Para minimizar a perda de FE lquida por
volatilizao, normalmente ela :
Entrecruzada: as
cadeias polimricas
so quimicamente
ligadas entre si
Quimicamente ligadas:
as cadeias polimricas
so presas ao suporte
por ligaes qumicas
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
SELETIVA Deve interagir diferencialmente
com os componentes da amostra.
Regra geral: a FE deve ter caractersticas tanto
quanto possvel prximas das dos solutos a serem
separados (polar, apolar, aromtico ...)
FE Seletiva:
separao
adequada dos
constituintes da
amostra
FE pouco Seletiva:
m resoluo
mesmo com coluna
de boa eficincia
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURAS
DE USO Maior flexibilidade na otimizao
da separao.
BOA ESTABILIDADE QUMICA E
TRMICA Maior durabilidade da coluna,
no reage com componentes da amostra
POUCO VISCOSA Colunas mais
eficientes (menor resistncia transferncia
do analito entre fases)
DISPONVEL EM ELEVADO GRAU DE
PUREZA Colunas reprodutveis; ausncia
de picos fantasma nos cromatogramas.
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas: Adsoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela
interao analito + FE slida a ADSORO
A adsoro ocorre na interface entre o gs de
arraste e a FE slida
ADSORO
Slidos com grandes
reas superficiais
(partculas finas, poros)
Solutos polares
Slidos com grande
nmero de stios ativos
(hidroxilas, pares de
eletrons...)
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas
Caractersticas Gerais:
- Slidos finamente granulados (dimetros de par-
tculas tpicos de 105 m a 420 m).
- Grandes reas superficiais (at 10
2
m
2
/g).
Mais usados:
Polmeros Porosos Porapak (copolmero estireno-divi-
nilbenzeno), Tenax (polixido de difenileno)
Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen (carves
ativos grafitizados), Alumina, Peneira Molecular (argila
microporosa)
GASES DE REFINARIA
Coluna:Carboxen-1000 60-80
mesh; 15 x 1/8
T
COL
: 35
o
C a 225
o
C / 20
o
C. min
-1

Gs de Arraste: He @ 30 ml.min
-1
Detector: TCD
Principais Aplicaes:
- Separao de gases fixos
- Compostos leves
- Sries homlogas
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
POLIGLICIS Muito polares; sensveis a
umidade e oxidao; ainda muito importantes.
Principal: Polietilenoglicol (nomes comerciais:
Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, etc.)
CH
2
CH
2
O H OH
n
Estrutura Qumica:
AMINAS ALIFTICAS
Coluna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH
T
COL
: 200
o
C (isotrmico) Gs de Arraste: N
2
@ 20 mL.min
-1
Detector: FID Amostra: 0,01 L da mistura de aminas
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Maior parte das aplicaes em CG moderna
Quatro grandes grupos estruturais:
PARAFINAS Apolares; alta inrcia qumica;
praticamente abandonadas. Principais: esqua-
lano (C
30
H
62
), Apiezon (graxas para vcuo).
POLISTERES steres de dilcoois com di-
cidos. Polares; altamente sensveis a umidade
e oxidao; uso em declnio. Principais: DEGS,
EGA, EGS.
STERES METLICOS DE
CIDOS GRAXOS
Coluna:5%DEGS-PS s/ Supel-
coport 100/120 mesh; 6 x 1/8
T
COL
: 200
o
C (isotrmico)
Gs de Arraste: N
2
@ 20 ml.min
-1
Detector: FID
Amostra: 0,5 L de soluo em
clorofrmio contendo 0,5 g de
cada ster
FASES ESTACIONRIAS
FE Lquidas: Absoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela
interao analito + FE lquida a ABSORO
A absoro ocorre no interior do filme de FE
lquida (fenmeno INTRAfacial)
ABSORO
Filmes espessos de FE
lquida
Interao forte entre a
FE lquida e o analito
(grande solubilidade)
Grande superfcie
lquida exposta ao gs
de arraste
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
SILICONES (polisiloxanas) As FE mais em-
pregadas em CG. Cobrem ampla faixa de pola-
ridades e propriedades qumicas diversas.
Si
CH
3
H
3
C
CH
3
O Si
R
1
R
2
O Si
CH
3
CH
3
CH
3
n
R
1
, R
2
= qualquer
radical orgnico
- Ligao Si-O extremamente estvel = elevada
estabilidade trmica e qumica das FE.
- Silicones so fabricados em larga escala para
diversas aplicaes = minimizao de custo do
produto + tecnologia de produo e purificao
largamente estudada e conhecida.
- Praticamente qualquer radical orgnico ou inorgnico
pode ser ligado cadeia polimrica = FE ajustveis a
separaes especficas + facilidade de imobilizao
por entrecruzamento e ligao qumica a suportes
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Substituintes Nomes Comerciais Observaes
- - SE-30 OV-1 OV-101 SP-2100 mais apolares da srie
pouco seletivas
carborano ? - Dexsil 300GC similar a PDMS
estvel at > 400
o
C
fenil 5 % - SE-52 SE-54 OV-3 OV-5
OV-73
pouco polar
cianopropil 7% fenil 7% OV-1701 SPB-7 CP-Sil 19CB moderadamente polar
fenil 50 % - OV-17 SP-2250 HP-50+
SPB-50
moderadamente polar
retm aromticos
trifluoropropil 50% - OV-210 QF-1 moderadamente polar
retm compostos carbonlicos
cianopropil 50% fenil 50% OV-225 SP-2300 CP-Sil
43CB
polar
retem doadores de eltrons
cianopropil 100% - SP-2340 SP-2330 Silar-9 CP altamente polar
FE derivadas de polidimetilsiloxano (PDMS) por
substituio de -CH
3
por radicais orgnicos, em
ordem crescente aproximada de polaridade:
Diferenas entre FE de composio similar
provenientes de fornecedores diferentes:
pureza, viscosidade.
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de pesticidas - FE = 100 % PDMS
1 - TCNB
2 - Dichloram
3 - Lindano
4 - PCNB
5 - Pentacloroanilina
6 - Ronilano
7 - Antor
8 - pp-DDE
9 - Rovral
10 - Cypermetrin
11 - Decametrin
Coluna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 m)
T
COL
:195
o
C (6,5 min) / 195
o
C a 275
o
C (10
o
C.min
-1
)
Gs de Arraste: He @ 35 cm.min
-1
Detector: FID
Amostra: 2L de soluo dos pesticidas on-column
17 min
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de piridinas - FE = 100 % CNpropilsilicone
1 - piridina
2 - 2-metilpiridina
3 - 2,6-dimetilpiridina
4 - 2-etilpiridina
5 - 3-metilpiridina
6 - 4-metilpiridina
3 min
Coluna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10 mm x 0,2 m)
T
COL
:110
o
C (isotrmico)
Gs de Arraste: N
2
@ 16 cm.min
-1
Detector: FID
Amostra: 0,1L de soluo 1-2% das piridinas em
3-metilpiridina
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de fenis - FE = fenilmetilsilicones
50% Ph
50% Me
5% Ph
95% Me
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Separao de ismeros ticos:
FRMACOS Em muitos frmacos apenas um dos
ismeros ticos tm atividade farmacolgica.
PRODUTOS BIOLGICOS Distino entre pro-
dutos de origem sinttica e natural (natural = normal-
mente substncias oticamente puras; sinttico = mui-
tas vezes so misturas racmicas).
Propriedades fsico-qumicas de ismeros ticos so
MUITO SIMILARES
FE convencionais no interagem diferencialmente com
ismeros ticos
Separao de misturas de ismeros
ticos s possvel com FE oticamente
ativas
=
FE Quirais
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
FE oticamente ativas mais importantes:
O Si
CH
3
CH
2
CH CH
3
C
O N
H
C*
C
O
H
CH CH
3
CH
3
NH C
CH
3
CH
3
CH
3
Si
CH
3
CH
3
O
n
Chiralsil-Val
Derivados de aminocidos:
Misturas de compostos
formadores de pontes de
hidrognio.
Organometlicos:
Separao de
enantimeros formadores
de complexos.
n
O Si
CH
3
CH
2
Si
CH
3
CH
3
O
CH
2
O
O
Ni
C
3
F
7
/ 2
Chiralsil-Metal
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Derivados de ciclodextrinas alquiladas:
|-ciclodextrina:
oligosacardeo
cclico quiral
Chiralsil-Dex
- Introduzidas em 1983
- Quando ligadas a cadeias de polisiloxano: uso
extremamente favorvel como FE lquida (viscosidade
baixa, estabilidade ...)
- Podem ser quimicamente imobilizadas nas colunas
- Colunas disponveis comercialmente
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
leo essencial artificial de limo: separao de
terpenos primrios
1 - (+/-) o-pineno
2 - sabineno
3 - (+/-) |-pineno
4 - (+/-) limoneno
Coluna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 m)
T
COL
: 1 min a 40C / 2C min
-1
/ 3 min a 200C
Gs de Arraste: H
2
@ 80 cm.min
-1
Detector: FID
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
leo essencial natural Essncia artificial
Aroma de bergamota: distino entre aroma
natural e artificial
Coluna: Rt-DEXse (30 m x 0.32 mm x 0.25 m)
T
COL
: 1 min a 40C / 4C min
-1
/ 200C
Gs de Arraste: He @ 80 cm.min
-1
Detector: MS
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Anfetaminas: resoluo dos ismeros
Coluna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x 0.25 m)
T
COL
: 1 min a 120C / 1,5C min
-1
/ 3 min A 175C
Gs de Arraste: He @ 25 cm.min
-1
Detector: MS
COLUNAS EMPACOTADAS
Definies Bsicas
Tubo de material inerte recheado com FE slida gra-
nulada ou FE lquida depositada sobre suporte slido.
MATERIAL
DO
TUBO
= 3 mm a 6 mm
L = 0,5 m a 5 m
ao inox
vidro pirex
nquel
TEFLON
Granulometria
do
recheio
80 - 100 mesh
149 - 177 m
100 - 120 mesh
125 - 149 m
60 - 80 mesh
177 - 250 m
MESH d
p

Eficincia maximizada com:
- Diminuio de d
C

- Diminuio de d
p

- Recheio regular
Limitados pela resistncia
passagem de gs de
arraste
COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
A FE lquida deve ser
disposta sobre um
SUPORTE slido
rea superficial entre 0,5 e 10 m
2
.g
-1

microporos regulares (~ 1 m)
NO interagir com a amostra
boa resistncia mecnica
Uso quase universal: TERRA DIATOMCEA
Esqueletos fsseis
(SiO
2
+ xidos
metlicos) de algas
microscpicas
Chromosorb
Anachrom
Supelcoport
...
secagem
calcinao
fuso com soda
lavagem com cido
silanizao
COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
Chromosorb - caractersticas gerais

r
e
a

S
u
p
e
r
f
i
c
i
a
l
D
e
n
s
i
d
a
d
e

A
p
a
r
e
n
t
e
T
a
m
a
n
h
o

d
e

P
o
r
o
%

M

x
.

d
e

F
E
NOME
m
2
.g
-1
g.ml
-1
m
Chromosorb P 4,0 0,47 0,4 - 2 30
Chromosorb W 1,0 0,24 8 - 9 15
Chromosorb G 0,5 0,58 - 5
O
r
d
e
m

c
r
e
s
c
e
n
t
e

d
e

i
n

r
c
i
a

Tratamentos especiais:
AW Lavado com cido, para remoo de metais
HP ou DMCS ou HDMS Silanizados (menor adsoro)
NAW Sem lavagem com cido
Chromosorb P Rseo, muito ativo.
Chromosorb W Branco, mais inerte que o P.
Chromosorb G Similar ao W, maior resistncia mecnica
COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Carga de FE
TIPICAMENTE % FE = 1 % a 30 % do recheio
Maiores volumes de amostra
Melhor blindagem dos stios adsortivos do suporte
Melhor reprodutibilidade no preparo do recheio
Maior eficincia (d
f
= N)
Menor sangria da FE com temperatura programada
Separaes rpidas e em temperaturas menores
% FE
d
f
= f (% FE no recheio)
COLUNAS CAPILARES
Definies Bsicas
Tubo fino de material inerte com FE lquida ou slida
depositada sobre as paredes internas.
MATERIAL
DO
TUBO
= 0,1 mm
a 0,5 mm
L = 5 m
a 100 m
slica fundida
vidro pirex
ao inox
Nylon
Silcosteel
Colunas de slica so revestidas externamente com camada de
polmero (poliimida) para aumentar resistncia mecnica e qumica
Colunas Capilares x Empacotadas:
C
A
P
I
L
A
R
E
S

L = N Colunas mais eficientes
F
C
= 1 ... 10 mL.min
-1
Controle de vazo mais difcil
V
i
Dispositivos especiais de injeo
Famlias de Colunas Capilares :
PLOT (Porous layer open tube) Camada de FE slida presa s
paredes internas
SCOT (Support coated open tube) Predes internas revestidas
com material de recheio similar ao das colunas empacotadas
WCOT (Wall coated open tube) FE liquida deposida (ligada //
entrecruzada) sobre as paredes internas.
COLUNAS CAPILARES
Dimetro Interno
d
C
= Eficincia
0,10 mm
0,25 mm
0,32 mm
0,53 mm
1 2 3
Valores comuns:
1
Colunas de altssima eficincia (amostras
complexas, Fast GC); capacidade volumtrica
limitada de processamento de amostra
2
Dimetros mais comuns; capacidade
volumtrica limitada de amostra requer
dispositivos especiais de injeo
3
Colunas megabore: menor eficincia, mas
maior capacidade de processamento permite
uso de injetores convencionais
COLUNAS CAPILARES
Fast GC: Colunas Capilares Finas
Destilao simulada de leo diesel:
Coluna: HP-1 (1 m x 0.10 mm x 0.40 m)
T
COL
: 35C / 40C min
-1
/ 0,75 min A 310C
Gs de Arraste: He @ 90 ml.min
-1
Detector: FID
Alm de colunas finas: necessrio controle
acurado de vazo (controle eletrnico de presso)
e altas velocidades de aquecimento da coluna.
COLUNAS CAPILARES
Colunas Capilares: Injeo
1
2
3
4
5
6
1 - Septo;
2 - Entrada de gs de arraste;
3 - Liner (misturador);
4 - Coluna Capilar
5 - Purga de gs de arraste;
6 - Vlvula de controle de
purga.
Baixa capacidade de processamento de amostra
(sub-microlitro)
Injeo direta com microseringa muito difcil !!!
Injetores com diviso (splitters) Sistema
pneumtico despreza frao da amostra injetada
- Menor sensibilidade (boa parte da amostra desprezada)
- Diviso da amostra raramente uniforme (frao purgada
dos constituintes menos volteis sempre menor)
- Ajuste da razo de diviso mais uma fonte de erros
COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Combinando injetores com temperatura programada, vl-
vulas controladas por microprocessador e pr-colunas pode
ser feita injeo de grandes volumes (> 100 L) de amostra
1 Colunas e
injetor frios;
vlvula de purga
aberta (solvente
eliminado)
2 Colunas e
injetor aquecidos;
vlvula de purga
fechada
(constituintes de
interesse
transferidos para
coluna analtica)
COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Separao de PAH com LVI (V
inj
= 25 L, soluo 400
ppb em CH
2
Cl
2
)
Coluna: HP-5 (30 m x 0.25 mm x 0.25 m)
T
COL
: 5 min a 50C / 20C min
-1
/ 2 min A 320C
Gs de Arraste: He @ 2 ml.min
-1
Detector: FID
COLUNAS CAPILARES
Colunas Multicapilares
Feixes paralelos de
colunas capilares
com d
C
convencional
- Eficincia prxima das colunas convencionais
- Capacidade similar das colunas empacotadas
- Colunas mais curtas: anlises mais rpidas
Separao de
explosivos em coluna
multicapilar (OV-17,
1000 capilares x 6 m)
1 - 2,6-DNT
2 - 2,4-DNT
3 - 2,4,6-TNT
4 - 3,4,5-TNT
5 - 2,3,4-TNT
6 - RDX ?
7 - tetryl
DETECTORES
Definies Gerais
Dispositivos que geram um sinal eltrico
proporcional quantidade eluida de um analito
~ 60 detectores j usados em CG
~ 15 equipam cromatgrafos comerciais
4 respondem pela maior parte das aplicaes
DCT TCD
Detector por
Condutividade
Trmica
DIC FID
Detector por
Ionizao em
Chama
DCE ECD
Detector por
Captura de
Eletrons
EM MS
Detector Es-
pectromtrico
de Massas
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
QUANTIDADE MNIMA DETECTVEL Massa de
um analito que gera um pico com altura igual a trs
vezes o nvel de rudo
S
I
N
A
L

(
S
)

RUDO (N)
= 3
S
N
RUDO Qualquer componente do sinal gerado pelo
detector que no se origina da amostra
Fontes
de
Rudo
Contaminantes nos gases
Impurezas acumuladas no detector
Aterramento eltrico deficiente
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
LIMITE DE DETEO Quantidade de analito que
gera um pico com S/N = 3 e w
b
= 1 unidade de tempo
Mesmo detector, nvel de rudo e massa de analito MAS
diferentes larguras de base:
w
b

QMD = f
Detector (sinal gerado, rudo)
Largura do pico cromatogrfico
Definindo limite de deteco como:
LD independente da eficincia do sistema
cromatogrfico !
[QMD] =
massa
(ng, pg ...)
[LD] =
massa / tempo
(ng.s
-1
, pg.s
-1
...)
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
VELOCIDADE DE RESPOSTA Tempo decorrido
entre a entrada do analito na cela do detector e a
gerao do sinal eltrico.
63,2% FSD

TEMPO
S
I
N
A
L

Constante de
Tempo, t : tempo
necessrio para o
sinal chegar a 63,2
% FSD (full scale
deflection = fundo
de escala) aps a
entrada de amostra
A constante de tempo do sistema (detector + dispositivos
de registro de sinal) igual ou menor a 10% da largura a
meia altura (w
0.5

) do pico mais estreito do cromatograma
>> w
0.5

t
R

medido > t
R
real
w medida > w real
Deformao no pico (cauda)
Diminuio do rudo (damping)
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
SENSIBILIDADE Relao entre o incremento de
rea do pico e o incremento de massa do analito
MASSA

R
E
A

Fator de
Resposta, S:
inclinao da
reta rea do pico
x Massa do
analito
o mesmo incremento
de massa causa um
maior incremento de
rea
Sensibilidade
S
Na ausncia de erros determinados:
A = rea do pico cromatogrfico
m = massa do analito
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
FAIXA LINEAR DINMICA Intervalo de massas
dentro do qual a resposta do detector linear
MASSA

R
E
A

A partir de
certo ponto o
sinal no
aumenta mais
linearmente
O fim da zona de linearidade pode ser detectado
quando a razo (rea / Massa) diverge em mais de 5
% da inclinao da reta na regio linear:
MASSA

R
E
A

/


M
A
S
S
A

0,95 S
1,05 S
DETECTORES
Classificao
UNIVERSAIS:
Geram sinal para qualquer
substncia eluida.
SELETIVOS:
Detectam apenas substncias
com determinada propriedade
fsico-qumica.
ESPECFICOS:
Detectam substncias que
possuam determinado elemento
ou grupo funcional em suas
estruturas
DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
PRINCPIO Variao na condutividade trmica do
gs quando da eluio de um analito.
Cela de Deteco do DCT:
1
2
3
5
4
i
1 Bloco metlico (ao)
2 Entrada de gs de arraste
3 Sada de gs de arraste
4 Filamento metlico (liga W-
Re) aquecido
5 Alimentao de corrente
eltrica para aquecimento do
filamento
A taxa de transferncia de calor entre um corpo
quente e um corpo frio depende da
condutividade trmica do gs no espao que
separa os corpos
Se a condutividade trmica do gs diminui, a
quantidade de calor transferido tambm diminui
- o corpo quente se aquece.
DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
Configurao tradicional do DCT: bloco metlico com
quatro celas interligadas em par - por duas passa o
efluente da coluna e por duas, gs de arraste puro:
CELAS DA AMOSTRA
CELAS DE
REFERNCIA
C
O
R
T
E

S
U
P
E
R
I
O
R

CELAS DA
AMOSTRA
CELAS DE
REFERNCIA
C
O
R
T
E

L
A
T
E
R
A
L

Quando da eluio de um composto com condutividade
trmica menor que a do gs de arraste puro:
Diferena de
resistncia
eltrica entre
os filamentos
de amostra e
referncia
Filamentos nas
celas de amostra
se aquecem
Resistncia eltrica
dos filamentos nas
celas de amostra
aumenta
Filamentos nas
celas de
referncia no se
aquecem
Resistncia
eltrica dos
filamentos nas
celas de referncia
fica constante
DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
Os filamentos do DCT so montados numa ponte de
Wheatstone que transforma a diferena de resistncia
quando da eluio de amostra numa diferena de voltagem:
V Fonte de CC / Bateria (18 V a 36 V, tpico)
F Ajuste da corrente nos filamentos
I Medida da corrente nos filamentos (100 mA - 200 mA, tpico)
B
1
B
2
Balanceamento / ajuste de zero
R
1
R
2
Filamentos das celas de referncia
A
1
A
2
Filamentos das celas de amostra
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
SELETIVIDADE Observa-se sinal para qualquer subs-
tncia eluida diferente do gs de arraste = UNIVERSAL
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE Dependendo da
configurao particular e do analito: QMD = 0,4 ng a 1
ng com linearidade de 10
4
(ng - dezenas de g)
VAZO DE GS DE ARRASTE O sinal proporcional
concentrao do analito no gs de arraste que
passa pela cela de amostra.
VAZO DE GS DE ARRASTE
CONSTANTE DURANTE A
ELUIO
VARIAO DA VAZO DE GS
DE ARRASTE DURANTE A
ELUIO
F
c
= 0
Com DCT, a rea dos picos cromatogrficos MUITO
dependente da vazo do gs de arraste !!!
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
NATUREZA DO GS DE ARRASTE Quanto maior a
diferena A entre a condutividade trmica do gs de
arraste puro,
A
, e do analito,
X
, maior a resposta.
QUANTO MENOR A MASSA MOLECULAR DO GS DE
ARRASTE, MAIOR A RESPOSTA
Como: (M = massa molecular)
Gs de arraste com DCT: He ou H
2

outro
gs
1
2
He ou H
2

1
2
1
Usando He ou H
2
como gs de arraste, A
maximizado: MAIOR RESPOSTA
2
Com outros gases, eventualmente

X
>
A
: PICOS NEGATIVOS
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
FATORES DE RESPOSTA Quanto menor a condutividade
trmica do analito, maior o sinal.
Quantidades iguais de substncias diferentes geram
picos cromatogrficos com reas diferentes !!!
Os fatores de resposta dependem da
condutividade trmica do analito
Mistura de quantidades
equimolares de:
Etano = 17,5
Clorofrmio = 6,0
Etanol = 12,7
C
2
H
6

CHCl
3

C
2
H
5
OH

X

A
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
TEMPERATURAS DE OPERAO Quanto maior a
diferena entre a temperatura dos filamentos e do bloco
metlico maior a resposta.
Temperatura do filamento, T
F
: entre 300
o
C e 350
o
C.
funo da corrente de alimentao dos filamentos, i.
i T
F
Sinal
Limitaes:
- Correntes excessivas podem fundir o filamento
( tpicos do filamento = 20 m)
- Diminuio do tempo de vida til dos filamentos
(oxidao por traos de O
2
no gs de arraste)
Temperatura do bloco, T
B
: mantida to baixa quanto
possvel
T
B
Sinal
Limitao:
- Temperaturas excessivamente baixas podem
provocar a condensao de analitos nas celas
(erros analticos, danos aos filamentos)
DETECTORES
DCT: Aplicaes
1 Separao e quantificao de compostos que no geram
sinal em outros detectores (gases nobres, gases fixos)
2 Por ser um detector no-destrutivo, pode ser usado em
CG preparativa ou deteco sequencial com dois
detectores em tandem
Coluna: CP Sil 5CB
(50 m x 0.32 mm x 5 m)
Gs de Arraste: He @ 3 ml.min
-1
T
COL
: 40C Detector: DCT
1 N
2
2 CH
4

3 CO
2
4 n-C
2

5 NH
3
6 n-C
3

7 i-C
4
8 n-C
4

Separao de Gases Fixos e Hidrocarbonetos:
DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
PRINCPIO Formao de ons quando um composto
queimado em uma chama de hidrognio e oxignio
O efluente da coluna
misturado com H
2
e O
2
e
queimado. Como numa
chama de H
2
+ O
2
no
existem ons, ela no conduz
corrente eltrica.
Quando um composto
orgnico elui, ele tambm
queimado. Como na sua
queima so formados ons, a
chama passa a conduzir
corrente eltrica
DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
COLETOR
FLAME TIP
BLOCO
AR
H
2

COLUNA
O ar e o H
2
difundem para o
interior do coletor, onde se
misturam ao efluente da coluna
e queimam:
Uma diferena de potencial
eltrico aplicada entre o flame
tip e o coletor - quando se
formam ons na chama, flue uma
corrente eltrica:
DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
Qumica da Chama de Hidrognio:
Incandescncia
Reao
Quebra
Estrutura da chama
trs regies bsicas
Regio de quebra Mistura dos gases, pr-aquecimento,
incio da quebra das molculas de H
2
, O
2
e dos analitos.
Zona de reao Reaes exotrmicas com produo e/ou
consumo de radicais H, O, OH, HO
2
(provenientes do H
2
), CH
e C
2
(proveniente do analito) e ons CHO
+
(analito).
Zona de incandescncia Emisso de luz por decaimento de
espcies excitadas: OH (luz UV), C
H
e C2 (visvel).
Queima de substncias
com ligaes C-H
CH + O CHO
+
+ e
-

1 on formado a cada ~10
5
tomos
de C queimados
Queima de H
2

Formam-se apenas
radicais !!!
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
SELETIVIDADE Seletivo para substncias que contm
ligaes C-H em sua estrutura qumica.
(como virtualmente todas as substncias analizveis por CG so
orgnicas, na prtica o DIC UNIVERSAL)
Compostos que NO produzem resposta no DIC:
Gases nobres
H
2
, O
2
, N
2

CO, CO
2
, CS
2

CCl
4
, peralogenados
NH
3
, N
x
O
y

SiX
4
(X = halognio)
H
2
O
HCOOH, HCHO *
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD tpicas = 10 pg
a 100 pg com linearidade entre 10
7
e 10
8
(pg a mg)
DIC
DCT
N
2

CH
4

CO
2

O
2

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
VAZES DE GASES Alm do gs de arraste, as
vazes de alimentao de ar (comburente) e
hidrognio (combustvel) devem ser otimizadas.
Grficos Sinal x Vazo de Gases tpicos:
S
I
N
A
L

150 300 450 600 15 30 45 60
AR H
2

O sinal se mantm aproximadamente constante em
uma larga faixa de vazes de ar e H
2

VARIAES NAS VAZES DE AR E H
2
AFETAM
APENAS MARGINALMENTE O SINAL = MAIORES
REPRODUTIBILIDADE E REPETIBILIDADE
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
TEMPERATURA DE OPERAO O efeito da
temperatura sobre o sinal do DIC negligencivel.
TRATAMENTO DE SINAL Por causa da baixa
magnitude da corrente eltrica gerada (pA a nA) ela
deve ser amplificada para poder ser registrada.
1
2
3
4
Diagrama
eletrnico
simplificado de
um DIC
1 Flame tip / Chama / Coletor
2 Bateria ou Fonte de CC Voltagens de operao
normais de 200 V a 300 V (no varivel - valor
depende da geometria especfica do detector).
3 Amplificador Eletromtrico Deve amplificar o
sinal e converter uma corrente varivel em uma
voltagem varivel (pA mV).
4 Sada de Registro de Sinal
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
FATORES DE RESPOSTA O fator de resposta de um
determinado composto aproximadamente proporcional ao
nmero tomos de carbono. Presena de heteroelementos
diminui o fator de resposta.
Nmero Efetivo de Carbonos (NEC) Prev com ~20% de
aproximao o fator de resposta de um composto.
tomo X
C aliftico +1,00
C aromtico +1,00
C olefinco +0,95
C carbonila +0,00
O lcool prim. -0,60
Cl aliftico -0,12
(X = Contribuio de cada
tomo ao NEC)
C
2
H
6
NEC = 2,00
C
2
H
5
OH NEC = 1,40
CH
3
CHO NEC = 1,00
Mistura com quantidades
equimolares de:
DETECTORES
Detector de Nitrognio - Fsforo
Modificao do DIC altamente seletiva para compostos
orgnicos nitrogenados e fosforados
Prola de sal de metal alcalino:
RbCl (normal), KCl
Seletividade S para fosforados ou
nitrogenados: 10.000 x - 100.000 x em
relao a hidrocarbonetos similares
QMD = 0,4 pg a 10 pg (N) e 0,1 a 1 pg (P)
Pesticidas Triaznicos usando DNP:
1 Desetilatrazina
2 Desisopropilatrazina
3 Atraton
4 Atrazina
5 Trietazina
6 Secbumeton
7 Sebutilazina
8 Simetrin
9 Dipropretrina
10 Dimetametrina
11 Metroprotrina
(100 pg cada)
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
PRINCPIO Supresso de um fluxo de eletrons
lentos (termais) causada pela sua absoro por
espcies eletroflicas
Um fluxo contnuo de
eletrons lentos
estabelecido entre um
ando (fonte radioativa
| -emissora) e um catodo.
Na passagem de uma
substncia eletroflica
alguns eletrons so
absorvidos, resultando
uma supresso de
corrente eltrica.
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
1
2
3
4
5
1 Ando (fonte radioativa | - emissora)
2 Sada de gases 3 Catodo
4 Cavidade 5 Coluna cromatogrfica
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
Mecanismo de Captura de Eletrons
1 Gerao de eletrons lentos pela interao entre a ra-
diao |, molculas do gs de arraste G e molcu-
las de bloqueador (quencher) Q
|
-
+ G G
+
+ e
-
+ e* energia
|
-
+ G G* + Q G + e
-
+ Q energia
2 Eletrons lentos so capturados pela espcie eletro-
flica AB
AB + e
-
AB
-
+ energia
O decrscimo na corrente eltrica fluindo pela cela de
deteco proporcional concentrao a da espcie
absorvente no gs de arraste
I
b
corrente de repouso
I
e
corrente na eluio do analito
K constante de captura
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
FONTE RADIOATIVA O ando deve estar dopado
com um istopo radioativo | - ou o- emissor
Emprego universal em DCE comerciais:
3
H (|
-
, 0,02 MeV)
Sob a forma de Ta
3
H
3

T
det
deve ser < 225
o
C
Maior sensibilidade
63
Ni (|
-
, 0,06 MeV)
Usado como
63
Ni
0

Maior linearidade
til at ~400
o
C
85
Kr,
90
Sr,
99
Tc,
147
Pm,
241
Am,
226
Ra
Raramente
usados:
63
Ni preferido em
equipamentos
modernos
- Maior durabilidade (t
1/2
= 100 a x 12 a
para
3
H)
- Maior estabilidade trmica
- Menor risco de uso (radioatividade)
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
TEMPERATURA DO DETECTOR Dependncia do sinal
com temperatura de operao bastante significativa
Variao de 3
o
C na temperatura
Erro de ~ 10% na rea dos picos
Magnitude e sinal do erro depende do composto analisado !
POLARIZAO DOS ELETRODOS Vrios modos de
polarizao possveis
VOLTAGEM PULSADA Menos anomalieas eltricas:
maior sensibilidade e linearidade.
VOLTAGEM CONSTANTE Pouco usada modernamente
- picos cromatogrficos podem ser deformados.
TEMPERATURA DO DCE DEVE SER
RIGIDAMENTE CONTROLADA
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
GS DE ARRASTE Funcionamento do DCE muito
dependente da natureza do gs de arraste
MAIS USADOS:
N
2

Ar + 5% CH
4

Geram eletrons lentos
quando bom-
bardeados com |
-

O gs deve ser o mais puro possvel !!!
(traos de H
2
O e O
2
comprometem o sinal do DCE)
VAZO DE GS DE ARRASTE Sinal depende dire-
tamente da vazo de gs fluindo no detector
Sinal
F
!
Adsoro de
contaminantes sobre
os eletrodos causa
deformao nos picos
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD = 0,01 pg a 1 pg
(organoclorados), linearidade ~ 10
4
(pg a ng)
10 fg Lindano (C
6
H
6
)
-ECD HP-6890
PESTICIDAS
1 tetracloro-m-xileno
2 o - BHC
3 Lindano
4 Heptachlor
5 Endosulfan
6 Dieldrin
7 Endrin
8 DDD
9 DDT
10 Metoxychlor
10 decaclorobifenila
~250 fg cada analito
O DCE O DETECTOR PREFERENCIAL PARA
ANLISES DE TRAOS DE ORGANOALOGENADOS E
SIMILARES
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
SELETIVIDADE / FATORES DE RESPOSTA Valores
de S maximizados para compostos eletroflicos
hidrocarbonetos e esteres alifticos, dienos
lcoois, cetonas e aldedos alifticos, aminas, nitrilas,
mono - Cl, mono - F
enis, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F
tri - Cl, cloretos de cidos, alquil - Pb, anidridos
mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS
2

di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 - dicetonas,
fumaratos, organo - Hg
S tpicos (clorobenzeno: S = 1)
Comparando-se
organoalogenados:
I > Br > Cl > F
Terc > Sec > Prim
Tri > Di > Mono
o > | >
trans > cis
DETECTORES
DCE: Aplicaes
Contaminantes em ar atmosfrico - deteco paralela DIC
+ DCE
DIC
DCE
1, 2, 3 - Hidrocarbonetos aromticos
4, 5, 6 - Hidrocarbonetos clorados
ANLISE QUALITATIVA
Conceitos Gerais
Fontes de Informaes Qualitativas
RETENO Uso de dados de reteno de um analito
para sua identificao
DETECO Detectores que fornecem informaes
estruturais sobre as substncias eludas
Identificao individual das
espcies contidas na amostra
Determinao da identidade da
amostra propriamente dita
Aplicaes
Qualitativas
de CG
Para anlise qualitativa confivel por CG
recomendvel combinao de dados
provenientes de pelo menos duas fontes
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
t
R
= f
Interaes analito / FE
Presso de vapor do analito
Condies operacionais (T
COL
, F
C
...)
Fixas as condies operacionais, o tempo de
reteno ajustado de um analito uma constante
AMOSTRA
PADRO
Comparao de
cromatogramas
da amostra e
de uma
soluo padro
do analito
suspeito
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Identificao por t
R
muito pouco confivel:
Dependncia com F
C
e T
COL
Variaes nestas
condies afetam sensivelmente os t
R

VARIAO DE
1% NO t
R

AT
COL
= 0,1%
AF
C
= 1%
Sobrecarga na coluna Aumento excessivo na
massa de material eluido deforma o pico croma-
togrfico e altera o seu t
R

M
A
S
S
A

Saturao da
coluna
cromatogrfica
com aumento de
massa eluida
provoca cauda
frontal no pico
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Comparao de t
R
usando dopagem (spiking)
da amostra com o analito suspeito: aumento da
confiabilidade de identificao.
Amostra complexa:
incerteza nos tR
medidos pode levar a
identificao errnea
Comparao com
cromatograma da
amostra dopada permite
identificao mais
confivel do
desconhecido
ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
FUNDAMENTO Os t
R
isotrmicos para uma srie
homloga de compostos dependem logaritmicamente
do nmero de tomos de carbono na cadeia.
Separao isotrmica de
uma mistura de n-alcanos
(n-C
4
, n-C
5
, ... n-C
16
)
Um grfico de log(t
R
) em
funo do nmero de
tomos de carbono do
analito n
C
LINEAR
ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
O ndice de reteno de Kovts I para um analito
definido por:
t
R
(A) Tempo de reteno
ajustado do analito A
t
R
(N) Tempo de reteno
ajustado do n-alcano com N
carbonos
t
R
(n) Tempo de reteno
ajustado do n-alcano com n
carbonos (n = N + 1)
Ex.: um analito com I = 874 teria um tempo de
reteno ajustado equivalente ao de um n-alcano
hipottico com cadeia de 8,74 tomos de carbono
Interpolao
logartmica dos
t
R

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
REPETIBILIDADE - REPRODUTIBILIDADE Os efeitos
de T
COL
e F
C
nos ndices de Kovts so pequenos
ANALITO
AI/AT
CHCl
3
+0,02 %
CH
3
CH
2
OH -0,12 %
CH
3
CHO -0,05 %
CH
3
(CO)CH
3
-0,04 %
Dependncia de I para
algumas substncias em
uma coluna apolar na
faixa de T
COL
= 70
o
C a
T
COl
= 130
o
C
Identificao por ndices de reteno muito
confivel que comparaes baseadas em t
R

NDICE DE RETENO DE KRATZ Para programao
linear de temperatura a relao entre t
R
e n
C
linear:
clculo dos ndices de reteno modificado
ANLISE QUALITATIVA
Retention Time Locking (RTL)
PRINCPIO Em cromatgrafos com: controles
pneumticos e trmicos microprocessados, injetores
automticos e colunas cromatogrficas de qualidade
excepcional possvel alta repetibilidade nos t
R

CORRIDA #1
T
COL
(1)
F
C
(1)
Coluna A
CORRIDA #2
T
COL
(2)
F
C
(2)
Coluna B
O software RTL (Hewlett-Packard) automaticamente ajusta
as condies operacionais em um segundo CG para
reproduzir os t
R
obtidos em um primeiro equipamento
Cromatogramas obtidos
em diferentes
equipamentos e colunas
com condies
operacionais da segunda
corrida ajustadas pelo
software de RTL
ANLISE QUALITATIVA
Mtodos de Deteco Qualitativos
Mtodos de deteco que fornecem informaes
qualitativas sobre os analitos eludos:
Cromatografia Gasosa com Deteo
Espectromtrica por Absoro no Infra-
Vermelho (CG-EIV)
Cromatografia Gasosa com Deteo
Espectromtrica de Massas (CG-EM)
Cromatografia Gasosa com Deteo
Espectromtrica por Emisso Atmica
(CG-EA)
Identificao muito confivel quando combinados a
tcnicas de identificao baseadas em reteno
ANLISE QUALITATIVA
Espectrometria de Massas
PRINCPIO A amostra fragmentada e ionizada em
um padro caracterstico da espcie qumica.
1 Molculas da amostra so bombardeadas por eltrons
(electron impact = EI) ou ons (chemical ionization = CI):
ABCDE + e
-
ABCDE
.
+
+ 2 e
-
2 O on formado se fragmenta:
ABCDE
.
+
AB
.
+ CDE
+
ABCDE
.
+
AB
+
+ CDE
.
ABCDE
.
+
A
+
+ BCDE
.
3 Os fragmentos inicos formados so separados
magneticamente de acordo com suas massas
moleculares e contados:
A
B
U
N
D

N
C
I
A

MASSA / CARGA
O grfico do nmero de
ons formados em funo
da razo Massa / Carga
dos ons o ESPECTRO
DE MASSAS do analito
ANLISE QUALITATIVA
Espectrmetro de Massas
1
2
3
4
1 Cmara de Ionizao Eletrons gerados por um
filamento aquecido bombardeam a amostra. Os fragmentos
ionizados (carga +1) so repelidos pelo eletrodo positivo e
conduzidos ao separador magntico.
2 Sada de Vcuo Todo o interior do EM deve estar sob
alto vcuo (natm).
3 Separador Magntico A ao do campo magntico
deixa apenas ons com determinada razo Massa / Carga
atravessar esta rea do equipamento.
4 Detector Uma vlvula fotomultiplicadora ou um fotodiodo
gera um sinal eltrico proporcional ao nmero de ons que
incide sobre o elemento.
ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Massas
m/Z = 118
m/Z = 80
m/Z = 79
- CO
- (CO + H)
m/Z = 90
20 40 60 80 100 120 0
m / Z
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Interface cromatgrafo - espectrmetro:
CG EM
Vcuo
Separador Molecular
O gs de arraste leve
(He) difunde mais
rapidamente que o
analito e tende a ser
drenado para o vcuo.
Cmara
de Ionizao
Coluna
Capilar
Interface Capilar Direta
Com colunas capilares
a vazo baixa de gs de
arraste pode ser
drenada pelo sistema
de vcuo.
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Sistema de Controle e Aquisio de Dados:
MANDATRIO que
sistemas CG-EM sejam
totalmente controlados
por microcomputador.
Sistema de Controle e Aquisio de Dados:
1 Gerencia e monitora o funcionamento dos mdulos de
CG e EM.
2 Coleta e arquiva espectros de massa em intervalos
regulares de tempo e constroi o cromatograma.
3 Aps a corrida, compara espectros coletados com
bases de dados para identificao dos eluatos.
COMPUTADORES RPIDOS E COM GRANDE
CAPACIDADE DE ESTOCAGEM DE DADOS
ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: Gerao do Cromatograma
Espectros de massas completos coletados e
arquivados em intervalos regulares de tempo
Gerao do cromatograma a partir dos espectros:
CROMATOGRAMA DE ONS TOTAIS (TIC = To-
tal Ion Chromatogram)
Para cada espectro o nmero total de ons detectados
na faixa de massas varrida somado e plotado em
funo do tempo, gerando o cromatograma.
MONITORAMENTO DO ON SELECIONADO
(SIM = Single Ion Monitoring)
Seleciona-se um fragmento resultante da fragmentao
da espcie de interesse. Gera-se o cromatograma
plotando-se o nmero de ond detectados com a massa
desse fragmento em funo do tempo.
TIC
Universal
Similar a DIC
SIM
Seletivo
Maior Sensibilidade
ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: TIC x SIM
Aroma de polpa industrializada de caj aps
extrao por SPME
TIC
Aparecem os picos
correspondentes a
todas substncias
eludas
SIM (m/z = 149)
Cromatograma
construido a partir dos
mesmos dados acima,
mas apenas usando
fragementos com
massa = 149 (ftalatos:
plastificante)
ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
TEMPO
C
O
N
T
A
G
E
N
S

MASSA / CARGA
C
O
N
T
A
G
E
N
S

1 Seleo manual ou automtica do espectro de
massa correspondente a um eluato.
2 Interpretao manual do espectro e / ou com-
parao automtica com biblioteca de espectros
padro do equipamento.
ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
Busca automtica em bibliotecas de espectros:
comparao estatstica ( Probability Based Matching )
BIBLIOTECA DE
ESPECTROS
ESPECTRO
DESCONHECIDO
PBM
Lista com possveis
candidatos +
porcentagem de
confiabilidade
# NOME FRM. %
1 1-dodeceno C
12
H
24
99
2 1-dodecanol C
12
H
26
O 91
3 ciclododecano C
12
H
24
91
4 2-dodeceno C
12
H
24
66
5 1-undeceno C
11
H
22
35
6 8-metil-3-undeceno C
12
H
24
32
PBM de um eluato
desconhecido
(1-dodeceno)
LIMITAES:
Identificao pouco confivel de es-
pectros muito simples
Limitada pelo tamanho da base de
dados (NIST = 66.000 espectros)
Diferenas entre espectros gerados
por diversos EM
ANLISE QUALITATIVA
Emisso Atmica em Plasmas
PRINCPIO A amostra fragmentada num plasma, os
fragmentos so excitados e emitem luz ao
retornarem aos seus estados fundamentais.
1 Amostra fragmentada ao colidir com molculas
excitadas do gs de suporte do plasma.
ABCD + He
m
A
+
+ B + CD + He + e
-
2 Fragmentos so excitados eletronicamente.
A
+
+ B + CD + He
m
A
+
* + B* + CD* + He
3 Ao retornarem aos seus estados fundamentais os
fragmentos excitados emitem luz em comprimentos de
onda caractersticos.
A
+
* A
+
+ hv
1

B* B + hv
2

CD* CD + hv
3

O MONITORAMENTO DA EMISSO NOS COMPRIMENTOS
DE ONDAS CARACTERSTICOS DE CADA FRAGMENTO
GERA CROMATOGRAMAS ELEMENTO-ESPECFICOS
ANLISE QUALITATIVA
Gerao e Sustentao de Plasmas
PLASMA Gs ionizado por aplicao de uma descarga
eltrica e sustido por um campo eltrico oscilante
Eletrons da descarga
eltrica colidem com o gs
gerando ons
ons formados so acelerados
pelo campo eltrico aplicado
gerando continuamente mais
ons e espcies excitadas
Gs de Suporte: HLIO (espcies formadas tem
energia suficiente para excitar tomos e fragmentos
de no metais)
Sustentao: MICROONDAS (outros tipos de campos
eltricos oscilantes no mantm plasmas estveis de
He a presso atmosfrica de forma conveniente)
ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Emisso Atmica
Mistura de raias de emisso atmicas e moleculares de frag-
mentos do analito e raias de emisso do plasma e impurezas
200 nm 800 nm

n-Hexano
Fragmentos:
C
2
CN
OH NH
456 nm
566 nm

Fsforo
Bromo
Cloro
Naled (C
4
H
7
Br
2
Cl
2
O
4
P)
ANLISE QUALITATIVA
Esquema Tpico de um CG-DEA
1 Cromatgrafo Gasoso
2 Alimentao de Gs de Suporte do Plasma (He)
3 Linha de Transferncia (acoplamento CG - DEA)
4 Cavidade Ressonante (gerao do plasma)
5 Lente de Focalizao
6 Monocromador / Policromador
7 Detector de Luz (fotomultiplicadora / diode array)
8 Amplificao / Digitalizao de Sinal
9 Computador
ANLISE QUALITATIVA
DEA: Gerao de Plasma
Uma cavidade ressonante focaliza potncia gerada por uma
fonte de microondas no interior de uma cela de deteco por
onde passa o gs de suporte.
CELA DE
DETECO
PLASMA
CABO DE
ALIMENTAO DE
MICROONDAS
CAVIDADE
RESSONANTE
He
Cavidade Ressonante Beenaker TM
010
:
Permite plasmas de He estveis a presso
atmosfrica e potncias de microondas < 100 W
CELA DE DETECO Tubo de material isolante
eltrico e altamente refratrio (quartzo, alumina, BN)
ANLISE QUALITATIVA
Interface CG - DEA
Plasmas de He se extinguem pela passagem de grandes
quantidades de material (~ 1 L de lquido vaporizado)
Interface para colunas empacotadas:
COLUNA
He
CELA
PURGA
VLVULA
DIVERSORA
Antes de ser
misturado ao He,
o efluente da
coluna passa por
uma vlvula
diversora
Quando da
eluio de
grandes
quantidades de
analito o fluxo da
coluna desviado
para a purga
Colunas capilares: no h necessidade de diverso.