UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS

ESCUELA DE TECNOLOGIA MEDICA
AREA DE LABORATORIO CLINICO

EXAMENES CITOGENETICOS EN LA REPRODUCCION


LIC. ALEJANDRA HUATO

EXAMENES CITOGENETICOS EN LA REPRODUCCION
EL DIAGNOSTICO PRENATAL
Los antecedentes clnicos de la pareja son de importancia para predecir la
eventual aparicin de alteraciones congnitas.
Antecedente de prdidas recientes (abortos) sin causa determinante, al igual que el
nacimiento de un hijo malformado
No toda malformacin congnita es producto de alteraciones cromosmicas.
Algunos factores ambientales pueden ser causa de dao embrionario
o fetal, sobre todo si actan en el periodo de organognesis. El antecedente de
contacto con sustancias qumicas o agentes fsicos
(como los rayos X), o la ingestin de algunos medicamentos de reconocido efecto
teratognico, ser de valor clnico para justificar el empleo
de la tecnologa diagnstica.

En qu consiste el diagnstico prenatal cito gentico:

Los cromosomas son los portadores del material hereditario y se requiere
una integridad numrica y estructural de los mismos, para el desarrollo
normal del beb. Una de las anomalas cromosmicas ms frecuentes, es la
trisoma 21 que produce lo que conocemos como Sndrome de Down o
mongolismo.
El diagnstico prenatal citogentico es el estudio cromosmico del embrin
o del feto, realizado en material obtenido de la embarazada, a travs de una
puncin transabdominal.

Indicaciones del diagnstico prenatal
citogentico:

1. Madres con 35 aos de edad o mayores. La incidencia de anomalas cromosmicas
aumenta con la edad de la madre. El riesgo de tener una descendencia con una de estas
anomalas se dobla aproximadamente cada 2,5 aos cuando la edad de la mujer alcanza
los 35 aos.
2. Padres con 50 aos de edad o mayores. Es menor que el de la edad materna. Si el
padre tiene 50 aos o ms, el riesgo de tener un hijo con sndrome de Down puede ser
un poco superior.
3. Nacimiento anterior de un hijo con sndrome de Down o cualquier otra anomala
cromosmica. Muchos estudios han demostrado que si una pareja tiene un hijo con
sndrome de Down u otra anomala cromosmica, el riesgo de que el hecho se repita es
de alrededor del 1%. A causa de este incremento del riesgo, la mayora de los genetistas
y asesores genticos recomiendan el diagnstico prenatal a estas familias.

4. Translocacin equilibrada de cromosomas en uno de los padres. Por ejemplo,
si un cromosoma 21 se encuentra pegado al 14, hay una probabilidad del 50% de
que este progenitor transfiera esta translocacin 14/21 a su descendencia.
5. Padres con alteraciones cromosmicas. Aunque la mayora de las personas que
tienen una anomala cromosmica de importancia no tendrn probablemente hijos,
algunos pueden tenerlos.

Riesgos
Los riesgos estn relacionados en gran medida con la experiencia del grupo profesional
actuante. Se estima en 0,5% el riesgo de aborto relacionado directa o indirectamente con
la biopsia corinica o con la amniocentesis llegando hasta el 5% en caso de la
cordocentesis por lo cual esta tcnica queda limitada a casos excepcionales.
MTODOS NO INVASIVOS

Los controles prenatales no invasivos, no generan riesgo alguno en el
cuidado sobre la maternidad.
Consiste en realizar pruebas sanguneas y ecogrficas en momentos
especficos del embarazo con el fin de descartar problemas genticos en el
feto. Este tipo de exmenes no son de diagnstico, sino de tamizaje. Es
decir, detectan a las pacientes con un riesgo elevado, para llevarlas
posteriormente a un examen de diagnstico invasivo
Estas pruebas son:

Sanguneas. Establecen los niveles de la fraccin libre de las hormonas
gonadotropina corinica humana (HCG)

Ecografa de tamizaje gentico. Despus de la prueba de riesgo, entre las
semanas 11 a 14 de embarazo (
Tcnicas no invasivas

Analtica. Entre la semana 9 y 12, pueden cuantificarse dos protenas del
embarazo. La Beta-HCG y la PAPP-A (protena plasmticas A

Ecografa. Mtodo de exploracin imprescindible en el mbito del
diagnstico prenatal

Estudios combinados. Es el llamado Test Combinado del primer Trimestre
o EBA-Screening (Screening Ecogrfico y Bioqumico de Aneuploidas).
Consiste en la combinacin y estudio informatizado para calcular un ndice
de riesgo de enfermedad cromosmica (especialmente del Sndrome de
Down), empleando la edad de la gestante, marcadores analticos (los dos
comentados anteriormente) la medida de la translucencia nucal. Los
resultados tienen una tasa de deteccin cercana a un 90%, con una
aceptable tasa de falsos positivos de un 3%.
TRIPLE TEST

Se realiza entre las semanas 14 y 16 del embarazo.
Se basa en el dosaje en sangre materna de tres sustancias (protenas y
hormonas, algunas fetales y otras placentarias). Para encontrar anomalas
cromosmicas como sndrome de down y trisoma de los pares 13 y 18, etc.
Se podra considerar un test de tamizaje, para profundizar en los estudios
en caso de resultados adversos.
Este test no puede identificar ningn defecto del desarrollo por s mismo.
Sin embargo, alerta sobre la posibilidad de que el beb por nacer padezca
Sndrome de Down o un defecto en el cierre del tubo neural (por ejemplo,
espina bfida abierta).
NT Plus

Entre las semanas 11 y 14. Se dosa una hormona en sangre materna, la
alfafetoprotena y se realiza una ecografa de alta resolucion por un
profesional calificado que se especialice en ecografas obsttricas, no
necesariamente debe ser una ecografa 3D/ 4D, es ms importante que
sea un especialista.Para encontrar anomalas cromosmicas (sndrome
de down, entre otras).
ALFAFETOPROTENA SRICA
Generalmente, se lleva a cabo entre las semanas 16 y 18, contando desde la ltima
menstruacin. Es un anlisis de sangre que se le realiza a la madre y que mide los
niveles de esta sustancia que es producida por el hgado del beb. Estos niveles
varan segn la edad gestacional, por lo tanto en esta medicin se deber conocer la
edad exacta del beb.
Este anlisis identifica los embarazos que tienen un riesgo mayor que el promedio
de gestar bebs con ciertos defectos congnitos graves, como la espina bfida y el
Sndrome de Down. Es importante aclarar que un resultado fuera de lo normal.

ALFAFETOPROTENA SRICA


ECOGRAFA CON TRASLUCENCIA
NUCAL

Entre las semanas 11 y 14
Es parte del NT Plus. Muchos mdicos slo realizan este estudio como
aproximacin, o para descartar patologas. En caso de un resultado
desfavorable, se contina con otros estudios.

Suponen algn riesgo para el embarazo. Estas tcnicas implican cierto riesgo de
prdida fetal por lesin accidental al feto. Este riesgo vara de acuerdo con la tcnica y
la experiencia del operador. Este mtodo tiene un altsimo porcentaje de certeza
diagnstica Se practican nicamente en pacientes con riesgos de enfermedades
genticas muy altas, debido a que pueden llegar a provocar un aborto.
MTODOS INVASIVOS
AMNIOCENTESIS
Se realiza entre las semanas 15 y 18, posteriores a la ltima menstruacin. Este
estudio no se efecta en todos los embarazos puesto que conlleva un determinado
riesgo sobre el beb.
La amniocentesis es un procedimiento mdico por el cual se obtiene una muestra
del lquido amnitico, para su posterior anlisis.
Es altamente preciso. Se utiliza el ultrasonido para guiar las acciones del mdico,
que insertar una aguja a travs del abdomen materno para llegar hasta el lquido
amnitico para extraer clulas fetales desprendidas que se encuentren inmersas en
el lquido.
Con el material se realiza un cariotipo, que es un anlisis de los cromosomas
Detecta anomalas tanto numerales como estructurales.
AMNIOCENTESIS PRECOZ

Se realiza antes de la semana 20 y su finalidad suele ser un diagnstico de
enfermedades cromosmicas o hereditarias
Las indicaciones de las amniocentesis precoz
Edad materna superior a los 37 aos.
Progenitor con translocaciones cromo-smicas.
Familias con enfermedades recesivas autosmicas ligadas al sexo, cuyo
diagnstico sea posible a partir del lquido amnitico.
Hijo anterior con defecto del tubo neural.

AMNI OCENTESI S I NTERMEDI A
Entre las semanas 20 a 35, justificada, sobre todo, por un problema de
inmunizacin Rh.
3,16

AMNI OCENTESI S TARD A
Despus de la semana 35, suele tener por objeto la evaluacin de la madurez de la
gestacin y del posible sufrimiento fetal.
Una vez definida la indicacin de la amniocentesis, previamente a la puncin se
aplica una exploracin ultrasnica simultnea para diagnosticar o conocer:
3

Gestaciones mltiples.
Viabilidad fetal.
Edad gestacional.
Localizacin de la placenta, as como del polo ceflico fetal.
Malformaciones fetales, as como la existencia de una mola o enfermedad gentica.

MUESTRA DE VELLOSIDADES CORINICAS

Este procedimiento se lleva a cabo entre las semanas 11 y 14 de gestacin.
Sirve para detectar la presencia de anomalas cromosmicas, como por
ejemplo Sndrome de Down. Es altamente preciso.
Con control ecogrfico, a travs de la piel del abdomen o por va vagina, se
extraen clulas fetales de la cara placentaria de la placenta. Con el material
se realiza un anlisis de los cromosomas.
La ventaja de este anlisis, por sobre la amniocentesis, es que la muestra de
las vellosidades corinicas puede realizarse en una etapa ms temprana del
embarazo.
DOPPLER OBSTTRICO (MATERNO-FETAL)

Est indicado desde el segundo trimestre en embarazos de alto riesgo, como los de madres
hipertensas, diabticas, antecedentes de feto muerto intratero o gemelares con crecimiento
discordante, etc.
Es un mtodo similar a la ecografa, que opera con ultrasonido para obtener imgenes precisas
del calibre de los vasos y las arterias.
Es un estudio de flujos, es decir cmo llega la sangre al feto, a travs de la arteria umbilical,
y cmo se distribuye ese flujo sanguneo (monitoreo del sistema circulatorio del beb).
Permite diagnosticar y evaluar fetos con retardo de crecimiento intrauterino, colgenoptas,
gemelares con crecimiento discordante,.

ECOCARDIOGRAFA

Desde el segundo trimestre en adelante, especialmente si hay antecedentes decardiopatas
congnitas en la familia.
Es una ecografa del corazn fetal exclusivamente. Debe hacerla s o s un profesional
ecografista especializado en obstetricia.
Estudio del corazn fetal, para detectar cardiopatas y polihidrmnios (aumento de lquido
amnitico que sea signo de cardiopata fetal).

Tiene como objetivo la obtencin de tejido placentario, por va abdominal o por va transcervical, para el
estudio de los cromosomas fetales, o estudios ms sofisticados como el ADN o enzimas fetales. Presenta
una ventaja clara respecto a la amniocentesis: su realizacin es ms precoz, en las semanas 11 y 12, con
una tasa de complicaciones similar.

BIOPSIA CORIAL.
FUNICULOCENTESIS.

Es la obtencin de sangre fetal, mediante la puncin de un vaso umbilical
guiada por ecografa. Se practica a partir de la semana 19-20. Es una
tcnica con indicaciones mucho ms selectivas, siendo til para el estudio
rpido de cromosomas fetales y para confirmar infecciones o enfermedades
graves del feto.
OTROS

CARIOTIPO (Anlisis cromosmico)


Es una prueba para examinar cromosomas en una muestra de clulas, lo cual puede ayudar a
identificar problemas genticos como la causa de un trastorno o enfermedad. Por medio de
esta prueba se puede:
Contar el nmero de cromosomas
Buscar cambios estructurales en los cromosomas
El examen se puede realizar en una muestra de sangre, de mdula sea, de lquido amnitico o
de tejido de la placenta, el rgano que se desarrolla durante el embarazo para alimentar al
beb en crecimiento.
La muestra se coloca en un plato especial y se deja crecer en el laboratorio. Posteriormente, se
toman clulas de la muestra y se tien. La muestra teida se fotografa para obtener un
cariotipo, el cual muestra la disposicin de los cromosomas.
Ciertas anomalas se pueden detectar a travs del nmero o disposicin de los cromosomas.
Los cromosomas contienen miles de genes que estn almacenados en el ADN, el material
gentico bsico.

Razones por las que se realiza el examen

Este examen generalmente se realiza para evaluar a una pareja con antecedentes de abortos
espontneos o para examinar una apariencia anormal del cuerpo que sugiere una anomala
gentica.
El examen de mdula sea o de sangre se puede hacer para identificar el cromosoma
Filadelfia que se encuentra aproximadamente en el 85% de aquellas personas con leucemia
mielgena crnica (LMC).
El examen de lquido amnitico se hace para verificar la presencia de anomalas
cromosmicas en un feto en desarrollo.

VALORES NORMALES
Mujeres: 44 autosomas y 2 cromosomas sexuales (XX), lo que significa 46, XX
Hombres: 44 autosomas y 2 cromosomas sexuales (XY), lo que significa 46, XY

Significado de los resultados anormales

Los resultados anormales pueden deberse a:
Sndrome de Down
Sndrome de Klinefelter
Trisoma 18
Sndrome de Turner
Las afecciones adicionales por las cuales se puede realizar el examen son:
Leucemia mielgena crnica (LMC) u otros tipos de leucemia
Defectos congnitos mltiples
Genitales ambiguos

En algunos casos, se puede presentar una anomala a medida que las clulas estn creciendo en la caja de
Petri en el laboratorio. Las pruebas para el cariotipo se deben repetir para confirmar que se est presentando
realmente un problema anormal en los cromosomas en el cuerpo del paciente.

HIBRIDACIN IN SITU CON FLUORESCENCIA
(FISH: FLUORESCENT IN SITU HYBRIDIZATION)

Utiliza molculas fluorescentes para localizar genes o fragmentos de DNA. Esta tcnica es
especialmente til para mapear genes o localizar anormalidades cromosmicas.
La tcnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, llamadas sondas,
que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar. Estas
sondas se "marcan" con molculas fluorescentes [p.ejemplo con biotina o fluorescena]. Esta
sondas se hibridan o unen al DNA complementario y, como estan marcadas con molculas
fluorescentes, permiten localizar las secuencias en las que se encuentran. A diferencia de otras
pruebas utilizadas para estudiar los cromosomas que requieren que las clulas se encuentren
en divisin activa, la hibridacin fluorescente in situ puede ser llevada a cabo en clulas no
activas

La FISH utiliza tres tipos de sonda:
Sondas especficas de un locus: estas sondas se hibridan a una regin particular de un gen.
Esta sonda es til cuando se ha aislado una pequea parte de un gen y se quiere averiguar en
que cromosoma se encuentra.

Sondas alfoides o centromricas: son sondas que contienen secuencias complementarias de
las secuencias repetidas que se encuentran en los centrmeros de los cromosomas. Como
pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera
distinta, con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el nmero correcto de
cromosomas o si tiene un cromosoma extra

Sondas para cromosomas completos: son colecciones de sondas de un tamao reducido,
cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma.
Utilizando estas librerias de sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un
cariotipo espectral.

FISH de metafase

La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para detectar microdeleciones
especficas ms all de la capacidad de resolucin de la citogentica de rutina, o
para identificar material extra de origen desconocido. Adems, la FISH de metafase
puede detectar algunos de los reordenamientos especficos que se observan en
ciertos tipos de cncer.

El nmero de sndromes de microdelecin diagnosticados por FISH est
aumentando con rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos
mejor que la de la citogentica de rutina, pero depende del sndrome en concreto.
En algunos, la sonda es especfica para el gen defectuoso, como en el Sndrome de
Williams, donde en el 96% de los pacientes con diagnstico confirmado se ha
encontrado una delecin en el gen de la elastina.

FISH de interfase

La FISH se puede usar sobre clulas en interfase para determinar el nmero de copias de uno o varios
cromosomas, as como para detectar algunas reorganizaciones especficas que son caractersticas de ciertos
tipos de cncer. La ventaja principal de la FISH de interfase es que se puede realizar muy rpidamente si es
preciso, normalmente en 24 horas, porque no requiere crecimiento de las clulas.
Un buen ejemplo es el ensayo de aneuploida, que se realiza sobre clulas del fluido amnitico cuando hay
una fuerte indicacin clnica de una de las trisomas ms comunes. Se desnaturalizan los ncleos de la
muestra, se hibridan con sondas especficas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y habitualmente en 24
horas se dispone de los resultados. La prueba de aneuploida suele incluir tambin una citogentica de
rutina para confirmar los resultados o detectar cualquier anomala no detectada por la FISH de interfase.



Ejemplos de FISH de metafase


Ejemplos de FISH de metafase
jemplo de una clula en metafase que se ha hibridado con la sonda diseada para detectar el
sndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen,. Permite identificar
rpidamente los dos cromosomas 22. La seal roja est situada en la regin DiGeorge, en
22q11.2. Puesto que ambos cromosomas 22 tienen la seal roja, en esta clula no hay
microdelecin en la regin DiGeorge y este paciente no tendra el sndrome DiGeorge.

Ejemplos de FISH de metafase
jemplo de una clula en metafase que se ha hibridado con la sonda diseada para
detectar el sndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen, causado
por una microdelecin en el cromosoma 22.
ANLISIS DE MICROARREGLO CROMOSMICO

Es un nuevo anlisis que se utiliza para detectar desequilibrios cromosmicos a una resolucin ma
yor que las tcnicas cromosmicas estndar actuales o las tcnicas FISH.

Una muestra del ADN del individuo a examinar y una muestra de ADN para control se disponen
en un orden (arreglo) particular sobre un portaobjetos de vidrio.
A las muestras de ADN se aade colorante fluorescente. Luego se colocan los portaobjetos en un
lector especial que mide el brillo de cada rea fluorescente.

Este proceso busca identificar un cambio en el nmero de copias de ADN.
BANDEO CROMOSOMICO

Bandeo G:
Los cromosomas son sometidos a digestin con la enzima tripsina de manera controlada. Los
cromosomas se desnaturalizan mediante calor en solucin salina (esto desnaturalizar ADN
con abundantes AT) y, a continuacin,se tien con Giemsa que es un colorante qumico que
enlaza ADN. Las bandas oscuras de tincin positiva, son las bandas G. Las plidas son G
negativas, se denominan bandas R.
Bandeo Q:
Se tien los cromosomas con un colorante fluorescente que se enlaza preferentemente a ADN
abundante en AT y se observan mediante fluorescencia UV. Las bandas fluorescentes indican
los mismos segmentos que las bandas G.





Bandeo T:
Identifica un subgrupo de bandas R que estan concentradas sobre todo en los telmeros. Las
bandas T son las R que se tieron de manera ms intensa.
Bandeo C:
Muestra heterocromatina constitutiva sobre todo en los centrmeros. Se
hace mediante un tratamiento alcalino drstico.





Mtodos dinmicos:

Se aplica sobre las clulas en cultivo. Uno de ellos es aadir istopos
radiactivo, como la timidina tritiada, en un periodo temprano de la
replicacin, para que se vaya aadiendo al ADN. El resultado es un patrn
de bandas de replicacin temprana, que suele coincidir con las bandas R. Si
se hubiese aadido la timidina tritiada en un momento tardo de la
replicacin, las bandas coincidirian con las G.


GRACIAS