UNIDAD IV

BIOTECNOLOGA
MICROBIANA


Sonia H. Palomino Felices





PRODUCCIN COMERCIAL DE MICROORGANISMOS

(1) Protenas de Origen Microbiano

Constituyen una de las grandes promesas de la
biotecnologa al sector alimentario.

Su produccin surgi como una alternativa de solucin
a la escasez alimentaria que reinaba en Alemania, en
la poca de la Primera Guerra Mundial, sobre todo con
fines de alimentacin de animales domsticos.

Hasta ahora es un producto relativamente caro y los
estudios en estn orientados a lograr mayor
competitividad en precio, frente a las protenas
comerciales vegetales (harina de soya) y animales
(harina de anchoveta y leche en polvo).


La perspectiva es la alimentacin humana, pero hay
dos barreras: cambiar los hbitos y comportamientos
alimentarios del hombre; y su alto contenido en cidos
nuclicos.









CONTENIDO DE PROTENAS Y CIDOS NUCLEICOS
DE PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS COMESTIBLES

ORGANISMO GRUPO Prot. Acid. Nuc.
(%) (%)

Methylophilus methylotrophus bacteria s 83 15-25
Candida utilis levaduras 52 5-15
Fusarium graminearum mohos 54 2-10
Spirulina maxima microalgas 65 3-4
Vegetales superiores eucariotas 19 1-2
Animales eucariotas 21 2-3







(2) Cultivos Iniciadores o Starter para la Industria

Industria de panificacin: hinchamiento de la masa
del pan. Ejem. Saccharomyces cerevisiae.

Industria lctea: leches fermentadas (yogur, buttermilk,
yakult, kefir, koumiss), fabricacin de quesos. Ejem.
Lactococcus lactis.

Industria crnica: embutidos fermentados, donde los
m.o. reducen nitratos a nitritos con la formacin de
color, sabor y olor; y producen cido lctico. Ejem.
Pediococcus cerevisiae, Micrococcus auranticus,
Debaryomyces, Penicillium.









(3) Hongos Comestibles

Introduccin:

La produccin de championes tuvo su origen en Pars,
Francia, hacia 1650, cuando se observ su aparicin en
las pilas de compostage durante la produccin de abono
orgnico para el cultivo de melones.

Posteriormente, Agaricus campestris se comercializ,
recin, por primera vez en Pars, durante el Siglo XIX
(las primeras championeras).

Sin embargo, el cultivo artificial de Lentinus eodes y
Volvariella olvacea data desde hace ms de 2,000 aos
en los pases asiticos.


Actualmente se utiliza Agaricus bisporus y su cultivo es
una actividad que ofrece buenas oportunidades de inversin
y de generacin de empleo; por necesitar mucha mano
de obra, que abunda en pases en desarrollo, representa
un excelente potencial.

Los carpforos de Agaricus bisporus contienen 82-85%
de humedad; 7.75% de protenas ricas en todos los Aas
esenciales, sobre todo lisina y leucina (ausentes en granos
bsicos), pero carentes en metionina y cistina (presentes
en la carne); 3.5-5% de carbohidratos; pobres en materias
grasas; ricos en K, P, Fe y Mn; altos contenidos de
vitaminas del complejo B (c. flico), C (c. ascrbico), H
(biotina), D
2
(ergosterina).




Agaricus bisporus champin
Pleurotus ostreatus hongo ostra
Lentinus eodes shiitake





CLASIFICACION DE LOS HONGOS COMESTIBLES
SEGUN EL TIPO DE SUSTRATO
__________________________________________________
(1) Que crecen en residuos vegetales frescos o casi frescos:
Lentinus eodes : Hongo Shiitake
(2) Que crecen en material parcialmente descompuesto:
Volvariella volvacea : Hongo de la paja
Pleurotus ostreatus : Falsa seta de cardo
Hongo ostin
(3) Que crecen en material descompuesto por ms tiempo:
Agaricus bisporus : Champin
(4) Que crecen en el humus y suelo:
Lepiota procera : Hongo parasol
(5) Que crecen asociados en raices:
Tuber melanosporum : Trufa
(6) Que pueden crecer en fermentadores grandes conteniendo
soluciones azucaradas:
Morchella esculenta : Colmenilla









Aspectos Tcnicos:

Comprende dos fases distintas:

- La produccin de compost; y
- El cultivo del champin propiamente dicho.

(1) Produccin de Compost:

El compost es una mezcla de sustancias orgnicas
parcialmente descompuestas, donde el componente
principal es la paja de trigo y el estircol preferentemente
de caballo.

El champin crece en l aprovechando sustancias de
difcil descomposicin, tales como la celulosa y la lignina,
que son prcticamente inutilizables para los dems
microorganismos.






(2) Cultivo del Champin:

Se realiza en invernaderos, cobertizos o cmaras
de cultivo, especialmente construidos, donde se
pueden controlar bien las condiciones de:

- Humedad relativa
- Temperatura
- Aireacin.
(4) Inoculantes para Leguminosas y no Leguminosas

Inoculantes a base de rizobios:
Las bacterias del gnero Rhizobium se emplean como
inoculantes para mejorar la produccin de leguminosas
de grano (frijol, arveja, haba, soya, tarwi) y forrajeras
(alfalfa, trbol blanco, trebol rojo, vicia, esparceta).

La simbiosis consiste bsicamente en que los rizobios
proporcionan nitrgeno a las leguminosas y reciben
de la planta principalmente carbohidratos.

La fijacin del nitrgeno atmosfrico (diazotrofia) es una
propiedad de los organismos procariotas.

La mayor espectativa consiste en lograr la transferencia
de los genes de la fijacin del nitrgeno de las bacterias
a las plantas.
PRINCIPALES GRUPOS DE MICROORGANISMOS
DIAZOTROFOS SIMBIOTICOS

I. BACTERIAS HETEROTROFAS
Formadoras de ndulos en raices:
Rhizobium leguminosarum : frijol
Rhizobium meliloti : alfalfa
Rhizobium trifolii : trbol
Rhizobium phaseoli : haba
Rhizobium lupini : tarwi
Bradyrhizobium japonicum : soya
No formadoras de ndulos en raices:
Azotobacter paspali : trigo, cebada, maz
Azospirillum lipoferum : trigo, cebada, maz
Formadoras de ndulos en tallos areos y sumergidos:
Azorhizobium caulinodans : sesbania (Africa)
II. ACTINOMICETOS
Frankia spp. : aliso, casuarina
III. CIANOBACTERIAS
Anabaena azollae : helechos acuticos (Azolla)
Nostoc spp. : musgos (Blasia)


PRINCIPALES GRUPOS DE MICROORGANISMOS
DIAZTROFOS LIBRES

I. BACTERIAS HETEROTROFAS:
Azomonas, Azotobacter,Azotococcus, Beijerinckia, Derxia,
Xanthobacter, Vacillus, Clostridium, Desulfotomaculum,
Arthrobacter, Citrobacter, Enterobacter, Erwinia, Escherichia,
Klebsiella, Methylobacter, Methylococcus, Methylocystis,
Methylosinus, Propionibacterium, Aquaspirillum, Thiobacillus,
Desulfovibrio

II. BACTERIAS AUTOTROFAS:
Chlorobium, Pelodictyon, Amoebobacter, Chromatium,
Ectothiorhodospira, Thiocapsa, Thiocystis, Rhodomicrobium,
Rhodoseudomonas, Rhodospirillum

III. CIANOBACTERIAS:
Cylindrospermun, Oscillatoria, Pleurocapsa, Spirulina
Inoculantes a base de micorrizas arbusculares:

Son hongos filamentosos pertenecientes a las especies:
Glomus mosseae
Gigaspora margarita
Scutellospora castenea

Se usan para mejorar la produccin de no leguminosas
como: pino, papa, maz y trigo.

La simbiosis consiste bsicamente en que las micorrizas
ayudan a solubilizar los minerales del suelo y estimulan
la ramificacin del sistema radicular y reciben de la planta
principalmente carbohidratos.
Micorrizas arbusculares





(5) Inculos Microbianos y Enzimas para el
Tratamiento de Desechos

Se utilizan los metangenos que realizan la digestin
anaerobia de residuos orgnicos; tambin se utilizan
bacterias como Pseudomonas spp., Acinetobacter spp.
y Nocardia spp. para la degradacin de alcanos y
desechos resistentes; o bien bacterias productoras de
enzimas extracelulares para hidrolizar las protenas,
los carbohidratos y las grasas de los desechos tanto
domsticos como industriales.








PROBITICOS Y PREBITICOS

Probiticos

Son microorganismos vivos incorporados como
suplementos a algunos alimentos para beneficiar la
salud del hospedador humano o animal a travs del
mantenimiento de un balance microbiano intestinal
adecuado.

Los ms utilizados son las bacterias acidolcticas (BAL):
Lactobacillus
Lactococcus
Leuconostoc
Streptococcus
Pediococcus.
Las especies de mayor inters son aquellas que
tienen mayor capacidad de implantarse en la flora
intestinal:

Lactobacillus casei
Lactobacillus acidophilus

Otros microorganismos, incluyen:

Saccharomyces boulardii
Bifidobacterium spp
Enterococcus spp.
Las BAL se han venido utilizando tradicionalmente en
la industria porque proporcionan la textura, aroma, sabor,
calidad preservativa y valor nutricional a los productos
lcteos y otros.

Sin embargo, en los ltimos 10 15 aos se ha
desarrollado un creciente inters por sus propiedades
probiticas en los humanos, tanto en el sector cientfico
como en el industrial, particularmente en los pases
europeos, en Japn, en EUA y Canad.
Accin probitica de las BAL:

1.- Inhiben el crecimiento de microorganismos patgenos,
debido a la competencia por los nutrientes y a la
produccin de inhibidores como el cido lctico,
derivados del perxido de hidrgeno (p.ej., hipotiocianito
y tiocianato) y las bacteriocinas (p.ej., nisina, una
potente sustancia antimicrobiana, con amplia historia
de aplicacin en la preservacin de alimentos,
especialmente en productos lcteos, vegetales en
conserva y bebidas alcohlicas).

2.- Restablecen la flora bacteriana saprfita luego de la
antibioticoterapia.

3.- Promueven la sntesis de citokinas adhirindose a
la superficie de las clulas intestinales.

4.- Producen cido butrico, el cual por un lado
estimula el trofismo del enterocito y por otro
neutraliza los carcingenos dietarios.


Caractersticas de las cepas probiticas:

Para la utilizacin de las BAL como probiticos, es
necesario que las cepas sean capaces de:

a) Adherirse a las clulas intestinales, lo que constituye
un pre-requisito para la colonizacin.
b) Soportar el bajo pH del estmago, la baja tensin
superficial, la presencia de cidos biliares y las
interacciones con los otros microorganismos
presentes en el tracto intestinal.
c) Producir sustancias antimicrobianas.
d) Resistir a la accin de los antibiticos.
Prebiticos

Son ingredientes alimenticios no digeribles que influyen
benficamente en el hospedador por la estimulacin
selectiva del crecimiento y/o actividad de una o un grupo
limitado de bacterias en el colon, mejorando as la salud
del hospedador.

Se refieren bsicamente a carbohidratos:

OLIGOSACARIDOS:
Galactooligosacridos
Fructuooligosacridos
Resisten la digestin en la parte superior del tracto
gastrointestinal, no se absorben en cantidades
significativas y son en consecuencia fermentados
en el colon.

Se consideran tambin prebiticos a ciertas protenas
de la leche como la lactoferrina y la lactotransferrina,
que estimulan el desarrollo selectivo de bacterias
probiticas en el tracto gastrointestinal.
NUTRACUTICOS

Son alimentos enriquecidos nutricionalmente o
medicinalmente que los convierte en alimentos
con propiedades muy especiales.

Se vienen produciendo, por un lado, con sustancias
que se extraen o son producidas principalmente por
algas marinas y hongos; y por otro, obteniendo
variedades transgnicas de vegetales tales como
la canola, soya y maz de las que se pueden extraer
aceites sin contenido en cidos grasos trans.

Se ha sugerido que quienes se beneficiarn primero
con la biotecnologa marina sern los productores de
azcares y polisacridos, frmacos, colorantes,
biofloculantes, pigmentos, vitaminas, lpidos y aceites.
En general, a partir de las algas pueden obtenerse
dos clases de productos:

(a) Sustancias intracelulares que actan como
osmorreguladores en la clula (p.ej., glicerol,
sorbitol, manitol, etc.) y las que no (p.ej., almidn,
amilasa, amilopectina, glucgeno, etc.).

(b) Productos celulares, principalmente polisacridos
(p.ej., glucana, manana, quitina, etc.), hidrocarburos
o poliacrilatos

La importancia de las algas radica en que existen
especies que contienen entre 1 a 85 % de cidos
grasos omega-3 poliinsaturados y por otro lado, hay
especies que son fuente para la extraccin de
diversos frmacos.

Los cidos grasos se clasifican segn el nmero de
dobles enlaces que poseen.

Las grasas saturadas no contienen dobles enlaces,
las monoinsaturadas contienen uno y las
poliinsaturadas dos o ms.

Los cidos grasos poliinsaturados se clasifican adems
en dos familias, segn la posicin del primer doble enlace:


Acidos grasos omega-3 poliinsaturados

* cidos grasos omega-3 (o n-3): tienen el primer doble
enlace en el tercer tomo de carbono de la cadena y se
derivan principalmente del cido alfa-linolnico.

EPA : cido Eicosapentanoico C20:5 n-3 (aceites de pescado)
DHA : cido Docosahexanoico C22:6 n-3 (aceites de pescado)

* cidos grasos omega-6 (o n-6): tienen el primer doble
enlace en el sexto tomo de carbono de la cadena y se
derivan principalmente del cido linoleico.

cido Linoleico C18:2 n-6 (aceites vegetales)
cido Araquidnico C20:4 n-6 (grasa de cerdo, aves)


Los efectos fisiolgicos de los cidos grasos omega-3
han sido observados en tres reas mdicas:

(1) Corazn y circulacin: prevencin o tratamiento
de la arterioesclerosis, trombosis, hipertriglicerinemia
y presin arterial alta.

(2) Inflamacin: tratamiento del asma, artritis, migraa,
psoriasis y nefritis.

(3) Cncer: tratamiento de los cnceres de pecho,
colon y prstata.
CATEGORIAS DE NUTRACUTICOS

CATEGORIA DESCRIPCION EJEMPLO DISPONIBILIDAD



Suplemento
diettico
Una sustancia
producida por
aislamiento o
purificacin de
cultivos
microbianos, que
aporta beneficios a
la salud


Acido
docosahexanoico
(DHA)


Cualquier
supermercado o
tienda naturista


Alimento funcional
Un alimento que es
manipulado por
ingeniera gentica
o suplementado
para dar un valor
nutritivo superior

Aceite de canola
transgnica sin
cidos grasos trans

Cualquier
supermercado o
tienda naturista

Alimento medicinal
Un alimento que
tiene propiedades
medicinales
intrnsecas

Pltano conteniendo
una vacuna contra el
clera

Solamente por
receta mdica
ALIMENTOS RICOS EN LOS DISTINTOS TIPOS DE CIDOS GRASOS
Tipo de grasa Fuentes

Saturada
Mantequilla, queso, carne, productos crnicos (salchichas,
hamburguesas), leche y yogur enteros, tartas y masas, manteca,
sebo de vaca, margarinas duras y grasas para pastelera, aceite
de coco y aceite de palma.

Monoinsaturada
Olivas, colza, frutos secos (pistachos, almendras, avellanas,
nueces), man, palta y sus aceites.




Poliinsaturada
Grasas poliinsaturadas omega-3: Salmn, caballa, peces
azules, trucha (especialmente ricos en cidos grasos omega-3
de cadena larga, EPA o cido eicosapentanoico y DHA o cido
docosahexanoico). Nueces, semillas de colza, semillas de soja,
semillas de lino y sus aceites (espacialmente ricos en cido alfa-
linolnico).
Grasas poliinsaturadas omega-6: Semillas de girasol, germen de
trigo, ssamo, nueces, soja, maz y sus aceites.
Algunas margarinas (ver etiquetas).
PRODUCCIN DE INSECTICIDAS
MICROBIANOS

Antecedentes

De los diferentes tipos de plaguicidas, los compuestos
organoclorados y organofosforados son los plaguicidas
que se utilizan ms ampliamente en la agricultura
mundial (97.5%).

A pesar de que son duramente cuestionados por su:

1) Naturaleza recalcitrante
2) Alta toxicidad
3) Biomagnificacin

Siguen siendo los agentes indispensables debido a su:

1) Alta efectividad
2) Confiabilidad
3) Facilidad de manejo
4) Economa
5) Amplia disponibilidad

Frente a la aparicin de resistencia en los insectos
plaga, surgieron dos alternativas:

* La sntesis qumica de compuestos ms txicos,
pero menos persistentes en el ambiente; y
* El empleo de los propios enemigos naturales
de los insectos plaga
Aunque el control biolgico ya se haba iniciado como
una nueva ciencia a mediados del Siglo XIX; la produccin
de bioinsecticidas y su uso en la agricultura es mucho ms
reciente y todava de poco impacto en la agricultura(2%).




Microorganismos Entomopatgenos

Dentro de los principales grupos se consideran a los
siguientes:

Bacterias
Baculovirus
Hongos filamentosos
Nemtodos
Protozoarios

Actualmente existen productos comerciales principalmente
a base de bacterias (90%) o baculovirus. Los otros grupos
se encuentran en fase de I+D.
PRINCIPALES GRUPOS Y ESPECIES DE ORGANISMOS ENTOMOPATGENOS
Grupo/Especie Insecto blanco
BACTERI AS:
Bacillus thuringiensis
Bacillus sphaericus
BACULOVI RUS:
Cydia pomonella VG
Lymantria dispar VPN
Mamestra brassicae VPN
Neodiprium sertifer VPN
Orgyia psoudotsugata VPN
Spodoptera littoralis VPN
HONGOS:
Beauveria bassiana
Metarhizium anisoplae
Verticellum lecanii
Paecilomyices fumosoroseus
NEMATODOS:
Heterorhabditis bacteriophora
Steinernema feltiae
PROTOZOARI OS:
Nosema locustae
Lepidpteros, Dpteros, Colepteros, etc
Lepidpteros, Dpteros, Colepteros, etc
Palomilla de la manzana
Palomilla gitana
Lepidpteros
Avispa sierra del pino
Gusano peludo del abeto
Gusano del algodn
Catarinita de la papa, langosta migratoria
Escarabajos, chinches
Afidos
Mosquita blanca
Gorgojo de la uva
Lepidpteros
Grillos, chapulines
Payne,1988
Introduccin

El primer aislamiento de BT fue hecho por Ishiwata (1902)
a partir de Bombix mori (gusano de seda).

BT es patgeno de los primeros estados larvarios de
lepidpteros, colepteros y dpteros.

Bacillus thuringiensis
Toxicidad y Mecanismo Patognico

BT produce varios tipos de toxinas, siendo la
d-endotoxina la ms importante (cryIIIA).

Esta toxina est contenida en un cristal parasporal
protenico, que es termolbil y soluble en disoluciones
alcalinas.

El cristal se produce despus de que la bacteria inicia
la esporulacin y generalmente es de forma bipiramidal.
La d-endotoxina produce primero parlisis del intestino
y luego parlisis general.

La muerte se produce entre 1-7 das despus de la
ingestin de los cristales, tanto por inanicin,
deshidratacin y septicemia.
Cristal Parasporal de Bacillus thuringiensis


Produccion Comercial

Es complicado definir cules son los materiales ms
apropiados para la obtencin de un bioinsecticida
que demuestre ventajas desde el punto de vista de
la productividad, rendimiento y economa.

Las diferentes fuentes de carbono y de nitrgeno
que se utilizan influyen en la formulacin del medio
de cultivo, tiempo de esporulacin, tamao del cristal
y nivel toxicolgico.

Por esta razn, no existe un nico modelo; sino ms
bien, lo mejor sera seleccionar cepas nativas a partir
del suelo, larvas enfermas o muertas y desarrollar el
proceso para la zona o regin donde se desee
aplicar el bioinsecticida.
El desarrollo de una tecnologa debe tomar en cuenta
tres aspectos:

1.- La efectividad de la cepa
2.- El mecanismo de accin
3.- La posibilidad tecnolgica y econmica de
su produccin masiva.
El proceso bsico, comprende las siguientes etapas:

1.- Fermentacin
2.- Separacin de cristales por centrifugacin
y/o por secado atomizado
3.- Estandarizacin, normalmente por bioensayos,
para determinar la toxicidad
4.- Formulacin, ya sea como polvo humectante,
suspensin, grnulos o croquetas
5.- Empacado
Hay dos tipos de formulaciones:

Formulaciones slidas: polvos humectantes o grnulos
dispersables, que se obtienen al mezclar las esporas y
cristales proteicos de BT con materiales inertes como
minerales orgnicos (borosilicatos, carbonatos, sulfatos
o fosfatos) o con materiales biolgicos (raspa de la
mazorca del maz despus de desgranado); incluyen
adems fotoprotectores, adyuvantes para la dispersin,
agentes estabilizantes, etc.

Formulaciones lquidas: que pueden ser de base
acuosa o no acuosa y se emplean como espumas,
geles, suspensiones o concentrados emulsificables;
otros ingredientes incluyen agentes reolgicos,
surfactantes, emulsificantes, dispersantes y polmeros
Costos

VECTOLEX
Formulacin slida en fcula de maz, es producida
por Abbott Lab:

- Principio activo : B. sphaericus serotipo H5a5B
- Composicin : 50 Bs ITU/mg (07.5%)
Ingredientes inertes (92.5%)
- Efectividad : contra Culex y Anopheles
- Precio : $ 160.00 por bolsa de 18.14 Kg
- Aplicacin : 1 g/m
2
de cuerpo de agua
Antecedentes y Caractersticas

Los primeros registros de enfermedades virales en
insectos se obtuvieron en Bombix mori (gusano de seda)
y Apis mellifera (abeja) por Maestri y Cornalia (1856).

Su nombre proviene del latn baculum que significa bastn
o varilla, debido a la forma que posee la partcula viral.

Son virus de ADN, con un tamao molecular de 80
a 200 kpb.

Producen epizootias en poblaciones naturales de
insectos.
Baculovirus

Pueden permanecer en el suelo por largos
perodos; pero la luz UV los inactiva.

Su rango de hospederos son los artrpodos;
y en mayor proporcin insectos (de los 337
tipos, 280 provienen de lepidpteros).
prueba

POLIEDROS
Componentes Estructurales y Fenotipos

a) Cuerpos de Oclusin:
Son los poliedros y grnulos, estructuras de resistencia
que protegen a la partcula viral.
Estn formados de una protena bsica de 29-31 kDa,
la poliedrina para los VPN y granulina para los VG.
A su vez, estn rodeados por una envoltura a base de
polisacridos y cuando sta se rompe el virin se degrada.

b) Viriones:
b.1) Envoltura de la nucleocpside:
Es una verdadera membrana celular, que es sintetizada
de novo o bien a partir de la gemacin de la nucleocpside
a travs de la membrana plasmtica de las clulas del
hospedero. En el fenotipo extracelular esta envoltura
est provista de peplmeros.

b.2) Nucleocpside:
Presenta una forma de bastn, pudiendo medir de
250-300 m de longitud por 40-60 m de dimetro.
El ADN se encuentra unido a una protena de 6.9 kDa la
cual facilita su condensacin para empaquetarse dentro
de la nucleocpside.

b.3) ADN:
Es 120 veces ms largo que la nucleocpside, por lo que
se compacta de una manera ordenada dentro de la misma.

Fenotipos de Baculovirus
Compactacin del ADN de Baculovirus
Clasificacin

Los baculovirus son miembros de la familia Baculoviridae,
la cual se subdivide en dos subfamilias:

Eubaculoviridae (VPN y VG)
Nudibaculoviridae (VNO)

Ambas familias poseen un solo gnero, Baculovirus, el
cual comprende bsicamente 3 grupos o subgneros de
acuerdo a su morfologa.






Mecanismo Patognico

Normalmente los poliedros o grnulos ingresan dentro
de la larva por ingestin y llegan al lumen del intestino.

Luego se degradan y los viriones penetran y se replican
en las clulas del epitelio intestinal donde se ocluyen
(infeccin primaria).

O pueden tambin cambiar al fenotipo extracelular y
migrar a los hemocitos (infeccin secundaria).

El signo tpico es que las larvas adquieren una
coloracin blanco-lechosa.
Larvas Virsicas
Mecanismo Patognico de Baculovirus
Control de la polilla de la papa con Baculovirus

Phthorimaea operculella, es considerada como una
de las principales plagas de la papa.

Las larvas daan los brotes de la planta, barrenan el tallo,
minan las hojas y atacan a los tubrculos tanto en campo
como en almacn.

El Programa de Manejo Integrado de Plagas del CIP
ha desarrollado una tecnologa alternativa para controlar
larvas de esta plaga con un virus de la granulosis
altamente especfico, denominado Baculovirus
phthorimaea.

Formulacin slida (espolvoreo): a la preparacin
anterior se le aade 1 Kg de talco (silicato de magnesio)
como soporte inerte y luego se mezcla hasta obtener una
pasta, que se deja secar en un plstico, bajo sombra,
de 1-2 semanas. Luego se muele. Dosis: 5 Kg por
tonelada de papa, por una sola vez, al momento del
almacenamiento.

Formulacin lquida (aspersin): 20 larvas infectadas,
molidas en un mortero, se diluyen en un litro de agua ms
Tritn al 0.2%, como agente dispersante. Dosis: para una
hectrea de papa se necesitan 36.5 g de larvas
(unas 2,000 larvas). La aplicacin del virus produce entre
70 y 100% de mortalidad larval y se ha registrado
persistencia del virus hasta los 60 das despus de la
aplicacin.

PRODUCCION DE VIRUS ENTOMOPATGENOS
IN VIVO
CRA DE INSECTOS
IN VITRO
CULTIVO DE TEJIDOS
Alto costo
cras y dieta
Instalaciones especiales
VPN en el cepario de Control Biolgico
(SENASA)
VPN para control de Spodoptera eridania
VPN para control de Spodoptera frugiperda
VPN para control de Spodoptera ochrea
VPN para control de Dione juno
VPN para control de Euprosterna eleasa
VG en el cepario de Control Biolgico
(SENASA)

VG para control de P. operculella.
VG para control de Erinnys ello.
VG para control de Spodoptera eridania.
VG para control de Spodoptera frugiperda.
VG para control de Diatraea saccharalis
Hongos Entomopatgenos
Produccin Masiva
Agitacin en medio
lquido durante 72 h
Siembra, incubacin y secado
Molido de sustrato esporulado
Control de Calidad

Tipificacin del hongo entomopatgeno

Control de Calidad

Concentracin de
conidias 10
9
con/ml
Germinacin de
conidias
Pureza
Patogenicidad

Aplicacin en Campo

Control de plagas con hongos entomopatgenos
en el Per

ESPECIE PLAGA CULTIVO

Beauveria bassiana Hypothenemus hampei Caf
Cosmopolites sordidus Pltano
Metamasius hemipterus Pltano
Liriomyza huidobrensis Frejol
Epinotia aporema Frejol
Spodoptera frugiperda Maz
Bemisia tabaci Frejol, pallar
Ruselliana solanicola Papa

Beuaveria brongniartii Premnotrypes spp Papa
Adioristus spp Papa
Epitrix spp. Papa
Diabrotica spp. Papa

ESPECIE PLAGA CULTIVO
Lecanicillium lecanii Bemisia argentifolii Algodn, frejol,
esprrago,
tomate,
cucurbitceas
Bemisia tabaci Algodn, frejol
esprrago
Aleurodicus cocois Frutales,
Ctricos
Aphis citricida Ctricos
Aphis craccivora Alfalfa
Tetranychus urticae Ctricos

Paecilomyces fumosoroseus Bemisia argentifolii Algodn, frejol
esprrago,
tomate
cucurbitceas
Bemisia tabaci Algodn, frejol
esprrago,
tomate
ESPECIE PLAGA CULTIVO

Paecilomyces fumosoroseus Bemisia argentifolii Algodn, frejol
esprrago, tomate
cucurbitceas
Bemisia tabaci Algodn, frejol
esprrago, tomate

Paecilomyces farinosus Bemisia tabaci Papa, algodn

Metarhizium anisopliae Plutella xylostella Brcoli, col
Schistocerca interrita Vegetacin silvestre,
Cultivos varios
S. piceifrons peruviana Vegetacin silvestre,
Cultivos varios
Spodoptera frugiperda Maz
Aphis craccivora Alfalfa
CAF
Una de las plagas ms importantes de este
cultivo es la broca del caf Hypothenemus
hampei.
Entre las medidas de control estn la
utilizacin de sus enemigos naturales y entre
estos la aplicacin del hongo Beauveria
bassiana y M. anisopliae.


Broca del caf
Dosis : 2 - 4 kg / 200 L de agua.
Aplicacin : ms del 50% de brocas en
posicin A B.
Evaluacin : 7 das despus de la
aplicacin.
N aplicaciones : de acuerdo a las
evaluaciones.

Broca del caf
Hypothenemus hampei

Gorgojo negro del pltano
Cosmopolites sordidus
Mosca Blanca
Lecanicillium lecanii y Paecilomyces
fumosoroseus para el control de
Bemisia spp. en algodn, esprrago,
aj piquillo, hortalizas, cereales, etc.

Temas propuestos para investigacin con
hongos y virus entomopatgenos
Identificacin y seleccin de microorganismos entomopatgenos.
Desarrollo de hongos en sustratos de la zona (evaluar rendimiento, pureza,
concentracin)
Pruebas de patogenicidad en campo de diferentes cepas de hongos y virus
existentes en el laboratorio de entomopatgenos del SENASA, en papa,
camote, caf, tomate, esprrago, ctricos, algodn y palma aceitera.
Formulacin de hongos y virus (viabilidad en el tiempo, caractersticas
insecticidas inalterables, pureza, dosis letal media, adyuvantes, protectores
solares, aplicacin con equipos convencionales, aplicaciones ultra bajo
volumen).
Sinergismo entre hongos entomopatgenos; virus entomopatgenos.
Sinergismo y compatibilidad entre hongos entomopatgenos con pesticidas
permitidos en la agricultura orgnica.
Deteccin de epizootias, evaluacin y aislamiento de microorganismos
benficos de especies virulentas.
Evaluacin del efecto de cepas virulentas contra fauna benfica.
Ampliar investigaciones en reas como salud pblica y veterinaria.
PRODUCCIN DE BEBIDAS
FERMENTADAS






VINOS

Introduccin
El vino es la bebida proveniente exclusivamente de la
fermentacin alcohlica de uva madura y fresca o de mosto
de uva fresca, con las adiciones permitidas por Ley,
particularmente anhidrido sulfuroso (SO
2
); y contiene de
8 a 13% de etanol.

Vitis vinifera : vinos de crianza (Europa)
Vitis labrusca : vinos comerciales (Amrica)

* Existen otros vinos: vino de naranja, vino de pera, vino de
arroz o sake (Japn), etc.
* Vinos del terruo: vinos obtenidos por vinificacin artesanal
y basados en conocimientos tradicionales.
* Composicin qumica compleja: los cidos como tartrico,
mlico y ctrico provienen de la uva; mientras que succnico,
lctico y actico provienen de la fermentacin .
Aspectos Tcnicos

Vino Tinto
* Luego del despalillado y estrujado y antes de la primera
fermentacin se realiza el sulfitado del mosto, por adicin
de dixido sulfuroso o metabisulfito de potasio
(mnimo 30 g/hectolitro), que inhibe las enzimas
oxidantes y el crecimiento de m.o. indeseables.
* La fermentacin primaria o tumultuosa (alcohlica),
se realiza en las cubas, junto con las cscaras y pepitas,
durante 3-10 das o ms, a 20-30C, evitndose
una excesiva extraccin de tanino, por la formacin
de etanol.

* El bazuqueado del orujo consiste en hundirlo con un palo
cada cierto tiempo.

* La fermentacin secundaria o lenta (malolctica), se
realiza en pipas, toneles o barricas de madera (roble,
castao, raul, guindo, etc.); y ms recientemente en
tanques de acero inoxidable (50,000 l), a 25-30C por
tiempos variables (desde unas pocas semanas hasta
dos aos, antes del embotellado), donde se dan algunas
reacciones qumicas como oxidacin y esterificacin.
* Es deseable la fermentacin malolctica, para ello se
retrasa la separacin del vino y las levaduras, lo que
permite liberar por autlisis algunos aminocidos que
favorecen el crecimiento de las bacterias responsables.

* El vino se va refinando por floculacin y filtracin; se
realizan por lo menos tres trasiegos: a los 8 das, a los
15 das y a los 45 das.

* Una vez embotellado, el vino tinto puede almacenarse por
tiempos variables:

Vinos de crianza : 1 ao
Vinos de reserva : 2 aos
Vinos de gran reserva : 3 aos
* Rendimiento : 3,000 Kg de uva dan 1,000 litros de vino.

* Consumo per capita:

Francia : 60-70 litros
EUA : 40 litros
Per : 10 ml

* Impuestos : 38%

Vino Blanco

* Luego del despalillado, estrujado y sulfitado, la fermentacin
primaria o tumultuosa se realiza en las cubas, nicamente
con el mosto claro, a 15-20C, durante 20-21 das.

* Una vez separado el mosto, ya sea por centrifugacin,
filtracin o sedimentacin, la fermentacin secundaria o
lenta se realiza inoculando con cultivos puros de levaduras
no debiendo exceder de 38C.

* No es deseable la fermentacin malolctica.
Champagne

* Primero se obtiene el vino blanco.
* Luego se adicionan levaduras tolerantes al etanol y azcar.
* Se deja fermentar hasta 5 atm de presin de CO
2
en botellas
con tapones de acero, a 11-13C, durante 25-30 das.
Pisco

* Bebida alcohlica tpicamente peruana.
* Se obtiene por destilacin del mosto de uva en alambiques:
Pisco puro : uva Quebranta
Pisco aromtico : uva Italia
Pisco acholado : Quebranta + Italia
* Rendimiento : 4,000 litros de mosto fermentado de uva
quebranta dan 1,000 litros de pisco.
* Impuestos : 48%

Aspectos Microbiolgicos

* La capa cerosa de las uvas maduras, llamada pruina,
contiene m.o. deseables y no deseables: levaduras,
hongos y bacterias.

* El empleo de levaduras seleccionadas como:
Saccharomyces bayanus, S. ellipsoideus, S. cerevisiae,
S. uvarum trae mayores ventajas:

- Inicio ms rpido de la fermentacin primaria.
- Fermentacin ms regular y homognea, con mayor
rendimiento de etanol
- Buena conservacin de los vinos, siendo bien secos,
es decir, excentos de azcares reductores fermentables.
CERVEZAS
* La cerveza es la bebida obtenida por fermentacin
alcohlica de mosto de un cereal malteado, generalmente
malta de cebada; es facultativa la adicin de otra materia
prima amilcea o de lpulo y, en general, contiene de
3-8 % de etanol.

* En general, hay dos tipos de cervezas: las de tipo ALE
(p.ej., Porter, Stout) y las de tipo LAGER (p.ej.,
Cristal, Pilsen).

* Las de tipo ALE son fabricadas por fermentacin superficial
o alta con Saccharomyces cerevisiae; mientras que las
de tipo LAGER, son las ms comunes en todo el mundo
y se fabrican por fermentacin profunda o baja con
S. carlsbergensis o S. uvarum.

Aspectos Tcnicos
Materias primas: cebada, lpulo, agua y levadura.
Adjuntos cerveceros: maz y arroz.
Lpulo: producto obtenido de la planta Humulus lupulus,
especie dioica, se utilizan las flores femeninas que estn
agrupadas en cachos; los cachos contienen un material
resinoso denominado lupulina; esta planta necesita un
fotoperodo de 18 h (pases nrdicos). Se importa de
Alemania, Checoslovaquia, EUA e Inglaterra.
Se comercializa como flores secas, polvo, granulado,
pasta, extracto, etc.

Malteado
Remojo de la cebada entre 10-25C por 48-60 h.
Germinacin entre 15-21C, donde las amilasas y proteasas
actan durante y despus del malteado.
Secado y almacenamiento en silos.
Molienda.
Cocimiento

* Inicialmente, en la cuba-filtro la malta molida se mezcla con
agua tratada, hasta unos 67C, para complementar la
hidrlisis del almidn. Luego se separa la parte slida o
afrecho y el mosto filtrado pasa a la paila de ebullicin.

* En la paila de ebullicin, el mosto se mezcla con el lpulo y
se somete a cocimiento por 8 h. Esto permite detener la
actividad enzimtica, precipitar las protenas presentes y
extraer del lpulo las sustancias aromticas.
Fermentacin

Comprende dos etapas: una fermentacin primaria o
tumultuosa y una fermentacin secundaria o lenta.

Para iniciar la fermentacin primaria, el mosto se inocula
con las levaduras (10
7
clulas/ml), dando lugar a la
fermentacin alcohlica. Se realiza en tanques cnicos
a 7C durante 7 das. La biomasa llega a quintuplicarse.

La fermentacin secundaria o maduracin se realiza en
los mismos tanques, pero a 0C por 14 das. El producto
no llega a congelarse por la formacin de etanol.
Acabado y Embotellado

* Filtracin del mosto maduro.
* Enchapado.
* Pasteurizacin por 45 minutos (cerveza) y 3 minutos (shop).
* Etiquetado.
* Estabilidad de la cerveza: 6 meses.
* Tiempo total de fabricacin: 23 das.

Antecedentes

Los maestros del arte culinario japons utilizaban el caldo del alga
marina Laminaria japonica para preparar comidas, resultando ms
sabrosas que otras (gran cantidad de glutamato en estado libre).

En 1908, el profesor Kikunae Ikeda de la Universidad de Tokyo,
demostr que el cido glutmico que haba logrado aislar de las
algas secas, era la clave del sabor especial y delicioso del caldo
tradicional japons.

El profesor Ikeda estaba convencido de que el cristal que haba
aislado, formaba la base del umami; el sabor que exista aparte
y adicionalmente a los cuatro sabores llamados bsicos: dulce,
cido, salado y amargo.


PRODUCCIN DE GLUTAMATO
MONOSDICO (GMS)
La produccin comercial se inici en 1909, extrayndose GMS del
gluten de trigo.

Posteriormente fueron desarrollados los procesos de fermentacin
(en la dcada de los 60), emplendose melaza de caa de azcar,
melaza de beterraga o hidrolizados de almidn como sustratos.

AJI-NO-MOTO significa la esencia del sabor.

Actualmente el GMS est declarado con estatus GRAS y no hay
lmite de consumo en humanos de todos los grupos etreos.

Aspectos Tcnicos


(1)Tanque inculo (1.5 l): se cultiva Brevibacterium lactofermentum
a 35C por 24 h en un medio compuesto de: glucosa 40 g;
K
2
PO
4
1 g; MgSO
4
.7H
2
O 0.5 g; extracto de levadura 1 g; urea 8 g;
agua corriente 1 litro.

(2) Preparacin del medio de fermentacin: la melaza de caa de
azcar, conteniendo aproximadamente 55 % de sacarosa, es
previamente descalcificada y sometida a una hidrlisis cida a
55C, a un pH de 2.5. Luego se le aade rea como fuente de N,
antiespumante (AZ Emulgen), QB (cido graso saturado,
principalmente cido oleico, que ayuda a la excrecin de
glutamato), fosfato y se ajusta el pH inicial a 7.6.
(3)Tanque semilla (8,000 l): el inculo preparado en la etapa (1)
se transfiere cuantitativamente al tanque semilla conteniendo
el medio de fermentacin estandarizado y se cultiva a 35C
por 24 h, en condiciones de agitacin y aireacin moderada.


(4)Tanque produccin (130,000 l): se carga el tanque y luego se
transfiere cuantitativamente la semilla. El sistema mantiene una
agitacin moderada de 150 rpm, una tasa de aireacin moderada
y una concentracin de glucosa de 8%. La temperatura inicial es
de 31.5C y una vez que se ha iniciado el crecimiento del cultivo
(aproximadamente a las 14 h) se aumenta la temperatura a 35C.
La fermentacin dura aproximadamente 31 horas, alcanzndose
un rendimiento de 90-100 mg/l.

(5) Separacin y cristalizacin: el licor mixto es sometido a
un proceso de filtracin y luego cristalizacin. Los cristales
de cido glutmico se purifican en resinas especiales, se
colocan en columnas con carbn activado, se neutralizan
con NaOH y finalmente se secan en evaporadores a
120-130C para garantizar la estabilidad durante su
comercializacin. Luego viene el pesado y el envasado.
Aspectos Microbiolgicos

El aislamiento de Corynebacterium glutamicum se realiz en 1957,
lo que dio lugar al inicio de los estudios acerca de su produccin
por fermentacin.

Posteriormente, se identificaron otras cepas industrialmente
importantes con capacidad de secrecin de cido L-glutmico
de al menos 30 mg/l, como por ejemplo: Brevibacterium
flavum (acetato), Brevibacterium divaricatum (glucosa +
acetato amnico), Corynebacterium hydrocarboclastus
(n-alcanos), Corynebacterium alkanolyticum (n-alcanos),
Arthrobacter paraffineus (n-alcanos), etc.

Introduccin

Se consideran legalmente como aditivos alimentarios a aquellas
sustancias aadidas intencionadamente a los alimentos para
mejorar sus propiedades fsicas, sabor, conservacin, etc., pero
no a aquellas aadidas con el objetivo de aumentar su valor nutritivo.

En aquellos casos en los que la sustancia aadida es eliminada, o la
cantidad de ella que queda en el alimento no tiene funcin alguna,
no se considera un aditivo sino un agente auxiliar de fabricacin
(p.ej., las enzimas). La sal en general no es considerada como
un aditivo.

Algunos aditivos, como la sal o el vinagre, se utilizan desde tiempos
muy antigos. Las consideraciones ligadas a la proteccin de la
salud hacen que los aditivos estn sometidos a un control legal
estricto en todos los pases.


PRODUCCIN DE ADITIVOS ALIMENTARIOS
Los grupos de aditivos alimentarios ms importantes, son:

Colorantes naturales (betalanas, carotenoides, cido
carmnico, antraquinonas)
Conservantes (acido actico, nitratos, nitritos, sulfitos)
Antioxidantes (cido ascrbico, tocoferoles)
Secuestrantes de metales (fosfatos, celulosa
microcristalina, CMC)
Gelificantes y Estabilizantes (dextrano, xantana,
alginato, agar, carragenano)
Emulsionantes (polisorbatos)
Potenciadores de sabor (glutamato monosdico)
Edulcorantes bajos en caloras (aspartame = 200;
sacarina = 300; miraculina = 1500; taumatina = 3,000 )

Algunos Aditivos de Inters Biotecnolgico

Betalainas:

Colorantes naturales (betacianinas = rojo a rojo-violeta; y
betaxantinas = amarillo) utilizados en productos alimenticios
(helados, productos lcteos, embutidos, conservas, gelatinas
y dulces), farmacuticos y cosmticos; los cuales se obtienen
por cultivo de lneas celulares vegetales de Amaranthus
tricolor, Beta vulgaris, Opuntia mycrodasys, Teloxis
ambrosoides y Escontria chiotilla.

Celulosa Bacteriana Microcristalina (BMCC):

Un tipo de celulosa pura que se obtiene por fermentacin
aerobia a partir de Acetobacter xylinum.
Aspartame:

Dipptido compuesto por los aminocidos: cido asprtico
y fenilalanina, es 180 veces ms dulce que la sacarosa.

Fue descubierto en 1965, accidentalmente, durante la sntesis
de un tetrapptido para un bioensayo.

La sntesis de aspartame se ha venido haciendo en forma
qumica y actualmente existen mtodos biotecnolgicos
que incluyen procesos enzimticos o fermentativos.

Aunque se encuentra en I+D, las etapas generales de la
produccin de aspartame por ingeniera gentica, incluyen:
(1) Sntesis qumica del mensaje gentico necesario.

(2) Polimerizacin de los dodecanucletidos, dando lugar
a un polmero sinttico de ADN.

(3) Incorporacin del ADN sinttico en el vector pWT121
(ligacin) e introduccin del plsmido recombinante en
Escherichia coli (transformacin).

(4) Obtencin de miniclulas conteniendo como complemento
gentico el plsmido recombinante.

(5) Lisis de las miniclulas y empleo de la termolisina
proveniente de Bacillus thermoproteolyticus para producir
el dipptido aspartame a partir del polipptido n(Asp-Fen).
Esteviosa:

Sustancia 300 veces ms dulce que la sacarosa. Se extrae de
Stevia rebaudiana, planta arbustiva originaria del noreste de
Paraguay. Su produccin biotecnolgica se encuentra en I+D.

Taumatina (Talina):

Protena 3,000 veces ms dulce que la sacarosa. Se extrae
de la fruta Thaumatococcus daniellii originaria de Ghana (Africa).
El gen se ha clonado en E. coli, B. subtilis, Streptomyces lividans,
S. cerevisiae; an se encuentra en I+D.
Monelina:

Otra protena 2,500 veces ms dulce que la sacarosa.
Se extrae de la fruta Discoreophyllum cumminsii, tambin africana.
Su produccin biotecnolgica se encuentra en I+D.

Miraculina:

Glicoproteona 1,500 veces ms dulce que la sacarosa.
Se extrae de la fruta Richarella dulcifica, del oeste africano.
Su produccin biotecnolgica se encuentra en I+D.