ELECTROFORESIS

DE LIPOPROTEINAS:

ASPECTOS TECNICOS
Y APLICACIONES
CLINICAS
Servi-Med
BIOL. CARLOS BEJAR LOZANO

Jefe del Departamento de Inmunologa
Servi-Med Laboratorios Clnicos
Laboratorios Clnicos
EVOLUCION BIOLOGICA Y
EVOLUCION CULTURAL
Diabetes
Dislipidemia
Hipertensin
Sedentarismo
S
e
r
v
i
-
M
e
d

L
a
b
o
r
a
t
o
r
i
o
s

C
l

n
i
c
o
s

OBESIDAD: Cuestin cultural ?
Cuestin de pases desarrollados ?
Cuestin gentica ? o TODO..?
Mxico disputa el
Primer Lugar 2013
en Obesidad en
el Mundo.
S
e
r
v
i
-
M
e
d

L
a
b
o
r
a
t
o
r
i
o
s

C
l

n
i
c
o
s

Importante un
Sistema de Clasificacin
Medicin y seguimiento
en dislipidemias.
CLASIFICACION
SOBREPESO / OBESIDAD
I.M.C. = Kg peso (Altura m)
2

S
e
r
v
i
-
M
e
d

L
a
b
o
r
a
t
o
r
i
o
s

C
l

n
i
c
o
s

Si Lincoln hubiera tenido pc
Si David hubiera viajado a EEUU
Mi IMC: 84.0 kg (1.80)
2


84.0 3.24 = 25.9
FACTORES DE RIESGO
VIEJOS Y EMERGENTES
Sndrome Metablico / Sndrome de Resistencia a la Insulina
Dislipidemia Hipertensin Diabetes
Sndrome
metablico
- Desfibrilador (60s)
- Unidad Coronaria (80s)
- Betabloqueadores
LOS AVANCES DE LA
CARDIOLOGIA MODERNA
Era de Reperfusin (80s)
Trombolisis + Stents
Disminucin de Mortalidad
Intrahospitalaria
NO PREVIENEN TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!
MORBILIDAD Y MORTALIDAD
ASOCIADA A DISLIPIDEMIAS
Cada hora mueren 7 personas en Mxico por
infarto, de los que el 70 % est relacionado
con dislipidemias e hipertensin.
http://www.invdes.com.mx/anteriores/Abril2001/htm/infarto.html
Es la tercer causa de muerte en Mxico,
despus de diabetes y cncer.
http://sinais.salud.gob.mx/mortalidad/tabs/m_009.xls
Se estima que al menos un tercio de la
poblacin mexicana tiene algn grado de
obesidad y dislipidemia, muchos de ellos
asociados a diabetes.
Como medida de control de factores de
riesgo, se debe controlar el nivel de
lpidos, as como otros factores de riesgo
asociados (hipertensin, tabaquismo y
sedentarismo y hbitos alimenticios).
Mortalidad Mundial
22.3
19.3
12.6
9.7
9
6.3
0 5 10 15 20 25 30
Aterosclerosis
Enfermedad infecciosa
Cncer
Accidentes
Enfermedad pulmonar
SIDA
Causas de mortalidad (%)
The World Health Report 2001. Geneva. WHO. 2001.
El papel del Laboratorio Clnico:
Proporcionar elementos medibles para el control de este padecimiento
Tendencias a buscar en la medicina..
LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS
FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A:

- SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA
- DIABETES / DISLIPIDEMIAS,
- HTA / TROMBOSIS

LA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVA
Origen de las Dislipidemias:
Dislipidemias primarias
Causas genticas (primarias)
de Dislipidemias:

Gentica Familiar

- Hipercolesterolemia Familiar
- Dislipidemia Familiar Combinada
- Hipercolesterolemia Polignica
- Hiperquilomicronemia familiar
- Hipertrigliceridemia familiar
- Dficit congnito de HDL
Enfermedades mas comunes
asociadas a desnutricin:
Gen Ob en cr7 que codifica para Leptina.
Se expresa (produce) en adipocitos, y bajo
condiciones normales, ser en proporcin directa a
la masa de tejido adiposo.
Leptina
Aumento de tejido adiposo
Pptidos anorxicos
- Ghrelina
- Serotonina
- Colecistoquinina
- Neuropptido Y
Lipognesis
Liplisis
Apetito
Origen de las Dislipidemias:
Dislipidemias Secundarias
- Diabetes: Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de
quilomicrones y VLDL

- Obesidad: Mayor cantidad de lpidos en circulacin y valores elevados
de insulina (resistencia a la insulina)

- Hipotiroidismo: Disminucin del receptor de LDL y depuracin lenta de
las LDL

- Nefropatas: Insuficiencia renal crnica y depuracin lenta de VLDL
con aumento de produccin de LDL. Retencin de colesterol para
compensacin onctica.

- Colestasis: Bloqueo de va excretoria de la bilis con aumento del paso
colesterol y fosfolpidos al plasma

- Alcoholismo: Estimula la secrecin de VLDL por parte del hgado y
sntesis heptica de triglicridos

- Terapia sustitutiva de Estrgenos: Mayor sntesis de VLDL y HDL
Objetivo del estudio de Lpidos:
1. Proporcionar una medida que valore el riesgo
de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis)
asociada a dislipidemias, mediante el

Indice de Riesgo = CT cHDL


2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a
hiperlipidemia (cifras absolutas de CT y TG) de
acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis,
hgado graso, etc.
Solo se puede conocer lo que se puede medir
Valoracin de las Dislipidemias por Laboratorio
Medicin de Colesterol + Triglicridos.
Medicin del Perfil de Lpidos
Colesterol
cHDL + cLDL + cVLDL LIPIDOS TOTALES..???
Triglicridos
Test de Quilomicrones: Se deja reposar el suero a 4C durante 24 hs;
cuando existen quilomicrones, aparece un sobrenadante cremoso en la
superficie. En sueros normales, esto nunca aparecer.
Medicin de Perfil de Lpidos + Electroforesis de Lipoprotenas
- Colesterol
- cHDL + cLDL + cVLDL
- Triglicridos
- Indice de Riesgo Aterognico
C.T. / cHDL
- Alfa
- Pre-Beta
- Beta
- Indices de Riesgo Aterognico
Pre-Beta / Alfa
Beta / Alfa
CALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DE
COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLD
Frmula de Friedewald para calcular las distintas
fracciones de colesterol:

- Medicin directa de Colesterol (CT),
- Medicin directa de Triglicridos (TG)
- Medicin directa de cHDL

- Calcular cLDL y cVLDL mediante las frmulas:

* cLDL = CT ((Tg / 5 ) + cHDL)

* cVLDL = CT (cLDL + cHDL)
No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemia
cVLDL = TG / 5
METODOS PARA VALORACION
DE RIESGO ATEROGNICO
Medicin de Colesterol y Triglicridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y
cVLDL, para obtener el riesgo aterognico derivado de alteraciones del
colesterol y las lipoprotenas de transporte.
No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemia
Normal
(mg/dL)
Ejemplo 1 Ejemplo 2
Ejemplo 3 Ejemplo 4
Colesterol Total 100 200 200 200 250 314
Triglicridos 50 170 170 170 400 245
cHDL > 50 35 50 60 46
cLDL < 100 131 116 110 219
cVLDL < 21 34 34 80 49
Riesgo
Aterognico
C T / cHDL
< 4.5 5.7 4.0 4.1 6.8
METODOS PARA VALORACION
DE RIESGO ATEROGNICO
Medicin de Colesterol y Triglicridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y
cVLDL, para obtener el riesgo aterognico derivado de alteraciones del
colesterol y las lipoprotenas de transporte.
No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemia
Normal
(mg/dL)
Ejemplo 5 Ejemplo 6
Ejemplo 7 Ejemplo 8
Colesterol Total 100 200 185 180 205 344
Triglicridos 50 170 400 679 754 3 018
cHDL > 50 37 42 56 65
cLDL < 100 68 2 - 1 - 324
cVLDL < 21 80 136 150 603
Riesgo
Aterognico
C T / cHDL
< 4.5 5.0 4.3 3.6 :-) 5.3
VALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CON
CIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDL
Datos de Riesgo y Teraputica del Toronto Working Group, 1998
Factor de
Riesgo
Coronario
Nivel de
riesgo
Riesgo EC
a 10 aos
Tratamiento, si:
LDL(mg) CT/HDL
4
Muy alto 40% 135 >5
3
Alto 20 a 39% 174 >6
2
Normal 10 a 19% 193 >7
1
Bajo <10% 232 >8
Las lipoprotenas estn formadas por:

- Fraccin proteica o Apo (Apoprotena)
Funcin primordial en acoplamiento a
receptores.

- Colesterol total y esterificado

- Triglicridos.
COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS
COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS
PROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
CAUSAS Y CLASIFICACION
DE LAS DISLIPIDEMIAS
PROCESO DE LA ATEROSCLEROSI S
IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DEL
PACIENTE CON DISLIPIDEMIA
Cual es su riesgo aterognico..??

NO HAY REGLA: Hay flacos con hipercolesterolemia o
hipertrigliceridemia, y flacos normolipmicos.

Hay gordos con hipercolesterolemia y/o hipertrigliceridemia
y gordos normolipmicos.

Se pueden clasificar las dislipidemias y medir el riesgo
aterognico con solo medir colesterol y triglicridos ?
Causas de obesidad ?

Causas de talla baja ?
ESTUDIO DE DISLIPIDEMIAS
La ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ofrece un mtodo
sensible y accesible para valoracin de riesgos aterognicos, tanto
asociados a hipercolesterolemia como hipertrigliceridemia.

Patolgico: Aumento de LDL y VLDL con agravamiento por
presencia de quilomicrones. Disminucin de sntesis de HDL.
Tendencia ptima: Aumentar HDL y disminuir LDL, IDL y VLDL
Clasificacin de
Dislipidemias
Teraputica especfica Riesgo EC
Respuesta
A tratamiento
Electroforesis de
Lipoproteinas
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
ELECTROFORESIS DE MICROZONA
Clasificacion de las Dislipidemias
(OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963)
- Tipo I: Quilomicrones.
- Tipo IIa: Betalipoprotenas (LDL)
- Tipo IIb: LDL + VLDL (Beta y p-Beta)
- Tipo III: IDL (Beta ancha)
- Tipo IV: VLDL (pre-Betalipoprotenas)
- Tipo V: VLDL + Quilomicrones
Mtodo semi-
cuantitativo

Debe interpretarse
junto con los valores de
colesterol y triglicridos.
Banda en el punto de aplicacin
corresponde a la presencia de
quilomicrones,

Banda ancha que abarca beta y
prebeta sugiere un acmulo
anormal de IDL y/o de
remanentes de quilomicrones.

Banda Pre- (Lipoalbmina)
aparece cuando hay cidos
grasos libres y lecitina unida a
albmina (no patolgica).
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa)
Punto de aplicacin
Lipoprotenas Beta (LDL)
Lipoprotenas Pre-Beta (VLDL)
Lipoprotenas Alfa (HDL)
Sitio de aparicin de
los quilomicrnes
Mtodo electrofortico que permite separar e identificar y medir las distintas
fracciones lipoproteicas, mediante su tincin con Sudn Negro y su integracin
densitomtrica en un lipidograma.
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
HDL
VLDL LDL
q
u
i
l
o
m
i
c
r
o
n
e
s

Integracin densitomtrica de la electroforsis
MUESTRA A USAR?
El SUERO contiene Lipoprotein Lipasa, que es activa y estar
degradando lipoprotenas en la muestra.
La Lipoprotein Lipasa es activada por la HEPARINA, por lo que no
es una muestra til para una electroforesis de lipoproteinas.

El EDTA inhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por lo
que es la muestra ideal a utilizar, ya sea EDTA -Na, -K, o -Li.

NO HAY CAMBIOS SIGNIFICATIVOS SI SE EMPLEA UNA
MUESTRA DE SUERO Y SE EFECTUA LA ELECTROFORESIS
ANTES DE 48 HORAS EN SUERO REFRIGERADO.

Si no se procesar antes de 48 horas de obtenida la muestra, ser
mas conveniente una muestra de plasma y refrigerar para procesar.
Datos del
paciente
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
REPORTE
Corrimiento
electrofortico
Datos de
interpretacin
clnica
Integracin de
electroforesis
PROPORCIONAR AL
MEDICO, TODA LA
INFORMACION POSIBLE
PARA EL CORRECTO
APROBECHAMIENTO
DEL ESTUDIO
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
PATRON NORMAL
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IIa: Hiper-Betalipoproteinemia
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IIb: Hiperlipidemia Mixta
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO III: Beta Ancha
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS
FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
Principales problemas y alternativas:
Muy baja cantidad de lpidos (ppalm tg) Prescribir a pacientes dislipidmicos
Uso de sueros envejecidos (> 2 das)
Procesar al menos 3 veces por semana
Usar plasma si se procesara despus de 48 hs
Uso de sueros/plasmas congelados No congelar. Ideal refrigerar a 4C
Uso de Buffer equivocado o deteriorado Recambio de buffer y uso de secantes
Dficit Congnito
de HDL ..?
Usar un suero normal como
Control Interno
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
Principales problemas
Principales problemas de corrimientos:
1. Deficiente preparacin de acetatos por no recambio de filtros Habr
aparicin de artificios en el corrimiento
2. Envejecimiento de reactivos Teido deficiente
3. Uso de amortiguador impropio Corrimiento anormal
4. Muestras envejecidas Desaparicin o atenuamiento de bandas
5. No coincide lo que veo en el corrimiento con lo que integra el integrador
densitomtrico Limpieza y mantenimiento de los sensores o
fotoceldas de cada canal de integracin.

Sugerencias:
- En lo posible, meter suero normal para comparar patrones anormales.
- Recambio de papel filtro de puentes y desecantes.
- Procesamiento 3 veces por semana
- Programacin de mantenimiento preventivo al menos una vez al ao
Corrimientos de
lipoproteinas con
muestras frescas
(izquierda) y
misma muestra
con 5 dias de
almacenamiento
(imagen derecha).