UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO GRANDE DO SUL

UNIDADE UNIVERSITRIA EM BENTO GONALVES

COMPONENTE CURRICULAR: CULTURA CELULAR
Prof. Dra. ANA CAROLINA TRAMONTINA
Avanos Biomdicos
da Cultura de Tecidos

Acadmica: Thaise Sutil
ABRIL DE 2014
Titulo do Artigo: Biomedical advances from tissue culture
Autores: Tetsuji Okamoto , J. Denry Sato, David W. Barnes,
Gordon H. Sato
Publicao: Recebido 20 de Maro de 2013 / Aceito: 29 Maio
de 2013 / Publicao online : 5 Julho de 2013

INTRODUO
A importncia da cultura de clulas aumentou desde o momento
em que explantes de tecidos animais utilizados em aplicaes
mdicas passaram a serem mantidos durantes perodos
prolongados.


Por exemplo, culturas de clulas de galinha, humanas e de
macaco, foram utilizados para estudar a dinmica da infeco
viral e para desenvolver vacinas contra a poliomielite, varicela,
sarampo e outras doenas virais.

Explante: Fragmento de rgo ou tecido retirado de um
organismo para ser submetido a processo de cultura.

INTRODUO
Neste trabalho iremos descrever alguns obstculos intelectuais e
tcnicas que tiveram de ser superados antes da cultura de tecidos
ter sido amplamente utilizada.

Iremos apresentar exemplos em que as descobertas bsicas de
cultura de tecidos tm contribudo para avanos significativos na
cura do cncer.
INTRODUO
No final dos anos 1950 as culturas de clulas animais raramente
demonstravam propriedades diferenciadas do seu tecido de
origem.

Normalmente, as clulas que cresceram a partir de explantes de
diferentes tecidos perderiam propriedades diferenciadas e
adquiririram um fentipo comum ao longo do tempo in vitro.

Devido a isto, acreditava-se que as clulas em cultura eram
submetidos a um processo de desdiferenciao.
Desdiferenciao: Processo em que uma clula ou tecido
perdem seus traos especficos.
INTRODUO
Em 1960 a equipe do laboratrio do Sato fez uma experincia
definitiva demostrando que a falta de propriedades diferenciadas
em cultura no foi devido desdiferenciao, mas para a seleo
de um tipo de clula especfico.

Experimento
Nesta experimento foi isolado o tecido do fgado de um rato e foi
divido em 3 pores.

1. Uma parte no foi tratada.
2. A outra parte foi tratada com antisoro antiparnquima heptico
especfico e complementar.
3. A terceira parte foi tratada com antisoro antifibroblastos e
complemento.

Nenhum efeito deste tratamento foi observado sendo assim o
crescimento foi equivalente ao de controle no tratado.
A SOLUO!
Uma vez que ficou claro que clulas diferenciadas estavam
ausentes por causa do crescimento excessivo dos fibroblastos na
cultura foi possvel a busca de solues para este problema.


Um protocolo de cultura de enriquecimento que possibilitou as
clulas diferenciadas uma vantagem seletiva sobre os
fibroblastos.

Tumores animais funcionalmente diferenciadas foram
alternadamente passados atravs de culturas vrias vezes.
A SOLUO!
A justificativa era que cada passagem in vitro as clulas tumorais
diferenciadas eram mais capazes de competir com os fibroblastos
na cultura.

Em 10 anos, muitas outras linhagenss celulares funcionais foram
desenvolvidas com este mtodo, incluindo o crescimento de
clulas secretoras de hormnios hipofisrios, clulas gliais
antgeno-especficas, as clulas de neuroblastoma de sntese de
neurotransmissores entre outras.

Hiptese de desdiferenciao
Meios de Cultura
Enquanto as linhagens de clulas diferenciadas funcionais foram
sendo estabelecidas, as composies de meios de cultura de
tecidos foram sendo otimizado por pesquisadores como Harry
guia et al. (1956 ), Puck e Sato ( Fisher et al . 1,959 ), e Ham
(1965 ).
Meios de Cultura
Na decada de 80 Ham e os seus colegas contriburam muito para a
formulao de meios de cultura para clulas de mamferos por
meio da otimizao das concentraes de componentes.

Em paralelo Sato e seus colegas perceberam que uma das
principais funes do soro em culturas de clulas era fornecer
hormnios peptdeos e fatores de crescimento.

Esta linha de pensamento levou formulao de meios especficos
para o tipo de clula hormonalmente definidos isentos de soro e
para a descoberta de novos fatores de crescimento de polipptidico,
que foram incorporados no meio de cultura celular para tipos
especficos de clulas.
Meios de Cultura
Nos anos seguintes meios livres de soro hormonalmente definidos
foram utilizado para varios tipos de clulas.


O conceito de que as clulas podem ser cultivadas em meio
definido hormonalmente adequadamente formuladas de modo a
que eles representam com preciso o seu tecido de origem no
amplamente reconhecida entre endocrinologista.

Meios de Cultura
As respostas celulares descobertos em cultura deve ser testado em
animais e os fatores de crescimento podem ser testados in vivo.

Esta abordagem pode revelar complexidades at ento
desconhecida que necessria para explicar os mecanismos
essenciais de controle que operam dentro dos tecidos.

Hormnios autcrinos, por exemplo, foram descobertos graa a
cultura celular.

Os avanos na manipulao gentica, tecnologias de
sequenciamento de DNA, anlise genmica fornecem meios
adicionais de caracterizar da funo dos fatores de crescimento.
Clulas-tronco
Definiu-se que era fundamental para o desenvolvimento de terapias
baseadas em clulas a criao de clulas-tronco embrionrias e
clulas-tronco pluripotentes induzidas a partir de clulas
diferenciadas reprogramados, proporcionaram um avano
substancial, unindo a pesquisa de cultura de tecido bsico e
aplicaes clnicas.
Clulas-tronco
O potencial clnico dessas clulas depende dos fatores ambientais
que afetam a proliferao e diferenciao celular.

O que est altamente ligado ao uso de cultura de tecidos isento de
soro.

Um meio isento de soro definido hormonalmente tem sido
desenvolvida, que permite o crescimento de clulas-tronco
embrionrias e clulas-tronco pluripotentes induzidas.

Clulas Cancergenas
O conceito de meio hormonalmente definidos levo os
pesquisadores a se perguntarem se as clulas cancergenas
tinham requisitos hormonais que poderiam ser exploradas para
novas terapias.

Em um momento que muitos se concentraram em identificar
antignios especficos de cncer que poderiam ser alvo de
anticorpos monoclonais, Sato e colegas propuseram bloqueio de
hormnios estimulantes com anticorpos para seus receptores.
Clulas Cancergenas
Esta idia de direcionamento de crescimento estimulando vias
de sinalizao nas clulas cancergenas foi testado
experimentalmente.

Experimental foram testados vrios anticorpos anti-receptores
de EGF (estimula o crescimendo de clulas normais e malignas).

Foram selecionados os anticorpos monoclonais que inibiram a
ligao de EGF ao seu receptor de superfcie celular.
Clulas Cancergenas
Estes anticorpos neutralizantes para o receptor de EGF
bloqueram o crescimento de clulas A431na cultura e inibiram a
formao de tumores em ratos.

Pesquisas sobre molculas sinalizadoras como alvos de remdios
para tratar o cncer, confirmou ainda que clulas em cultura
representam com preciso as clulas in vivo.

Os anticorpos foram licenciados por uma empresa de
biotecnologia, e uma verso de anticorpo quimrico 225, Erbitux
(cetuximab), foi aprovado pela Food and Drug Administration
para o tratamento de cncer de clon.
Clulas Cancergenas
A validao do receptor EGF como um alvo para o tratamento
do cncer inspirou o desenvolvimento de anticorpos humanos
monoclonais (panitumumab) e inibidores de quinases (gefitinib e
erlotinib) que inibem a sinalizao do receptor de EGF e foram
eficientes para o tratamento de cncer de clon e pulmo.

O desenvolvimento de Erbitux como uma terapia para tratar o
cncer demonstra as dificuldades conceituais que tiveram de ser
superadas para cultura de tecidos se tornar uma tecnologia de
sucesso.
CONCLUSES
Desdiferenciao de clulas em cultura no ocorrer.

As clulas cancergenas funcionalmente diferenciadas foram
estabelecidos, foram caracterizados no que diz respeito aos seus
requisitos hormonais e expresso do receptor de superfcie da
clula.

Linhagens diferenciadas de hibridomas que segregam anticorpos
monoclonais para um receptor hormonal foram produzidos,
clonados e expandidos.

CONCLUSES
Estes anticorpos que inibiram o crescimento de clulas tumorais
do receptor de EGR na cultura, inibiram o crescimento de tumores
em ratos.

Os testes ao longo dos ltimos 30 anos de crescimento respostas
estimulantes in vitro de linhagens de clulas malignas e tipos de
tumores aos hormnios e fatores de crescimento vem auxiliando
diretamente no desenvolvimento de drogas experimentais que
visam vias de sinalizao.

A eficcia destes frmacos um indicador de quo bem os
mtodos de cultura de tecido refletem as propriedades de clulas
no corpo.

MUITO OBRIGADA
PELA ATENO!
Referncias
OKAMOTO, Tetsuji. Biomedical advances from tissue
culture. , 2013. Disponvel em:
<http://http://link.springer.com/article/10.1007/s10616-013-
9591-1#page-1>. Acesso em: 27 abr. 2014.