BIOFILM

ALEX ESCOBAR
MARYURY ARBELAEZ BOTERO
JORGE RODRIGUEZ
FELIPE FIGUEROA GUZMAN
MONICA ORAMAS
LILIANA CARDENAS AMAYA

Las biopelculas son organizaciones microbianas compuestas por microorganismos que se adhieren a las
superficies gracias a la secrecin de un exopolmero.Se forman espontneamente en presencia de
humedad y pueden vivir con mnimas trazas de nutrientes. Se adaptan a un medio adverso mientras lo
cambian a su alrededor y se le vuelven a adaptar, esta cualidad se basa en la activacin de diversos
grupos de genes. A partir de ellos sintetizan las protenas que necesitan para numerosas acciones.
Se fijan fuertemente a una superficie, contra la repulsin inicial, y la modifican mientras captan ms
nutrientes y nuevas bacterias con las que iniciaran ms cambios como por ejemplo, la sntesis del
glicocalix, el polmero extracelular de tipo polisacrido que da estructura y proteccin a la comunidad.
Estas conformaciones microbianas presentan caractersticas como heterogeneidad, diversidad de
microambientes, resistencia a antimicrobianos y capacidad de comunicacin intercelular que las
convierten en complejos difciles de erradicar de los ambientes donde se establecen. En el hombre las
biopelculas se asocian con un gran nmero de procesos infecciosos que por lo general son de
transcurso lento, ocasionando que su control sea dispendioso. El estudio de las biopelculas es un rea
excitante en continua evolucin; tienen repercusiones importantes para la humanidad las implicaciones
que presentan estas asociaciones en los diversos mbitos de la medicina y la industria.
Qu es un Biofilm?
El trmino biopelcula (biofilm) hace referencia a una serie de microorganismos que se
encuentran agregados en un exopolmero compuesto de glicoclix (75%) y que se
organizan en forma de colonias adheridas a diferentes
Superficies, ya sean blandas, animadas e inanimadas2. El exopolmero que es producido
por los mismos microorganismos, forma una matriz adherente en donde estos quedan
atrapados y comienzan a organizarse en colonias con diferentes requerimientos
metablicos.
Los biofilms se crean cuando las bacterias libre flotantes perciben una superficie, se
adhieren a ella y, acontinuacin, elaboran seales qumicas para coordinar
diferenciacin y formacin de estructura,incluyendo el desarrollo de una cubierta
polisacrida protectora.
Los grmenes pueden crear condiciones para formar biofilms casi en cualquier ambiente
lquido.La interfase slido-lquida entre una superficie y un medio acuoso (vgr: agua,
sangre) proporciona unentorno ideal para la fijacin y crecimiento de
microorganismos. Por consiguiente, los biofilms
Son ubicuos en la Naturaleza y se encuentran prcticamente en todo cuerpo natural de
agua en el mundo
Cuadro 1
Adherencia
Heterogeneidad
Difererentes microambientes (pH,tensin O2 concentracin de
iones,Carbono,nitrgeno)
Sistema circulatorio primitivo
Resistente a las defensas del hospedero,agentes antimicrobianos y
detergentes
Quorum sensing.
Caractersticas de las biopeliculas
Productos bacterianos dentro de una biopelicula
1.Enzimas como colagenasas,fibrinolisinas que degradan epitelios
2.Liberacion de lipopolisacrido por grmenes Gram negativos
3.Produccin de leucotoxinas que lisan los leucocitos PMN
4.Proteasas que desdoblan IgG e IgA
5.Secrecin de desechos metablicos citotxicos como cido butrico y propinico.
Dnde pueden existir biofilms?
- Ubicuos
- Zonas Biticas o Abiticas
- Ambientes habitados por formas de vida superiores
- Ambientes inhspitos

Ejemplos:

Dnde pueden existir biofilms?
Ejemplos:
- Superficie interna de los floreros
- Interior de las tuberas
- Superficie de las
piedras de rios
- Placa dental
- Catteres
-

Quienes conforman los Biofilm?

Arqueas, bacterias, levaduras, algas: todos los organismos unicelulares
ensayados. Diversos protozoos pueden pastar sobre biofilms microbianos. La
velocidad de formacin de biofilms, sin embargo, depende del microorganismo,
superficie, nutrientes, temperatura, y otras condiciones ambientales.
La capacidad de formar un biofilm no est restringida a ningn grupo especfico de
microorganismos y se considera que bajo
condiciones ambientales
adecuadas todos los
microorganismos son capaces
de formar un biofilm
Clulas de Staphylococcus
aureus
adheridas sobre acero inoxidable, antes y
despus de un cepillado con agua y
detergente. Imgenes de microscopa de
fuerza atmica (AFM). (Verran, 2008)
De qu est compuesto un biofilm?
- Masa de clulas: una o mltiples especies
- Agua: 97%
- Matriz: que lo rodea, compuesta por:
Exopolisacaridos
Protenas
Ac. Nucleicos
Productos de la
lisis de bacterias

De qu est compuesto un biofilm?
La estructura de la matriz del biofilm no es slida y presenta canales
que permiten el flujo de:
- Agua
- Nutrientes
- Oxigeno
Hasta las zonas mas profundas del biofilm...
De qu est compuesto un biofilm?
... Sin embargo esto no evita que se puedan encontrar diferentes
ambientes dentro de un biofilm...
Depende de :
- Concentracin de nutrientes
- pH
- Oxigeno
Qu Formas puede tener?
Un Biofilm puede tener diferentes formas dependiendo de las condiciones
ambientales donde fue formado:

- Propiedades superficiales
- Propiedades internas
- Nutrientes disponibles
- Tipo de bacterias que los conforman
- Hidrodinmica

Etapas en la formacin de biofilm:
Acumulacin de pelculas de acondicionamiento
Deposicin o adsorcin de clulas planctnicas
Produccin de material extracelular adhesivo
Maduracin del biofilm (aumento de espesor, establecimiento
de
gradientes de oxgeno, nutrientes, pH, etc)
Atrapamiento y liberacin de clulas
Formacin del Biofilm
1. Adherencia:
Durante la primera fase, el substrato tiene queser adecuado para la adsorcin reversible y,
finalmente,
la adhesin irreversible de la bacteria a la superficie. Las bacterias, una vez percibida una
superficie, proceden a formar una unin activa va apndices, como fimbrias, flagelos o pili.
Mediante
microscopa electrnica se ha descrito que las bacterias adheridas se encuentran conectadas a
la
superficie por medio de finas fibrillas polimricas extracelulares. Las fimbrias, probablemente
luego de superar la barrera de repulsin electroesttica inicial que existe entre el germen y el
sustrato, contribuyen a la adhesin bacteriana.
La motilidad, otorgada por flagelos, ayudara a la bacteria a alcanzar la superficie en las etapas
inicia les de la adhesin,
siendo su funcin principal vencer las fuerzas de repulsin ms que actuar
como adherente. Sin embargo, la motilidad no pareciera ser un requisito esencial, puesto que
bacterias Gram positivas inmviles, como
estafilococos, estreptococos y micobacterias, tambin poseen la capacidad de formar biofilm. En
el
caso de las bacterias Gram positivas se ha descrito, en esta primera etapa, la participacin de
protenas de superficie.

Formacin del Biofilm
2. Divisin de los microorganismos

La bacteria comienza a dividirse y las clulas hijas se extienden
alrededor del sitio de unin formando microcolonias



Durante la segunda fase o de crecimiento, la bacteria, una vez adherida, comienza a dividirse y
las clulas hijas se extienden alrededor del sitio de unin, formando una microcolonia, similar al
proceso de formacin de colonias en placas de agar. A medida que las clulas se dividen y colonizan
la superficie, las bacterias comienzan a elaborar un exopolisacrido que constituye la matriz del
biofilm, y ste comienza a desplegarse en una formacin tridimensional, generando estructuras
similares a setas.
Formacin del Biofilm
3. Formacin de la matriz:
Las bacterias empiezan a secretar un exopolisacarido que
constituye la matriz del biofilm y forma canales La composicin
del exopolisacrido es diferente para cada bacteria: alginato, en
P aeruginosa; celulosa, en S typhimurium; exopolisacrido rico
en glucosa y galactosa en V. cholerae; poli-Nacetil-glucosamina,
en S aureus, etc. Adems, estudios recientes sealan que,
incluso una misma bacteria, dependiendo de las condiciones
ambientales en las que se encuentre, puede producir diferentes
exopolisacridos


Formacin del Biofilm
4. Liberacin
- Finalmente, luego que el Biofilm ha alcanzado la madurez,
algunas clulas, ya sea aisladamente o en conglomerados
bacterianos, se liberan de la matriz para poder colonizar nuevas
superficies, cerrando el proceso de formacin y desarrollo del
biofilm. El desprendimiento puede ser resultado de fuerzas
externas al biofilm o de procesos activos inducidos por ste

-Por medio de la produccin
de enzimas que degradan
de forma especfica el
exopolisacarido


Ventajas para los microorganismos de la vida en biofilms

Supervivencia en nichos favorables, sin ser arrastrados de all
por el flujo de lquido
Condiciones ambientales ms estables
Mayor resistencia a la desecacin
Mayor resistencia a biocidas, anticuerpos y macrfagos
Comensalismo o cooperacin con organismos de aptitudes
fisiolgicas diferentes
La proximidad favorece la transferencia horizontal de genes
Vivir en biofilms. Los atractivos de la vida sedentaria
Cambios fenotpicos en las clulas del biofilm

Adaptacin a mayor densidad celular
Prdida de motilidad
Produccin de polisacridos adhesivos
Adaptacin a diversos grados de anaerobiosis (multiples vas
metablicas)
Mayor resistencia a biocidas (distintos mecanismos)
Distintas modalidades de relaciones ecolgicas
De la mayor parte de los genes con expresin diferente en
biofilms no se conoce aun la funcin
Diferencia en susceptibilidad a antibiticos
entre clulas planctnicas y en biofilms de bacterias Gram+
Concentraciones en
g/mL.
Idem para Gram -
La proteccin: Resistencia a los biocidas
El exopolmero protege a los habitantes del biofilm de la dispersin de sustancias nutritivas,
del acceso de los biocidas y de la desecacin.
Los limpiadores qumicos mejoran la capacidad de arrastre de la suciedad por la propia agua.
All donde ella no puede, suspenden y disuelven los residuos alimentarios al reducir la tensin
superficial, por emulsin de las grasas y la peptizacin de las protenas. Pero an no sabemos
como los detergentes pueden eliminar el exopolmero asociado a los biofilms. Los fabricantes
de detergentes y desinfectantes an no tienen en cuenta la estructura glicoproteica que
mantiene el biofilm enganchado a la superficie. Haran falta nuevas formulaciones para poder
disolver estas sustancias.
Se ha podido demostrar que las clulas del biofilm pueden resultar entre 10 y 1000 veces ms
resistentes que las clulas planctnicas correspondientes (Brown et en el., 1988; Stewart, 1996;
Mah & OToole, 2001). Los biofilms presentan resistencias a un gran nmero de antibiticos
de amplio espectro (ampicilina, estreptomicina, tetraciclinas, gentamicina...) y de biocidas
oxidantes del tipo del cloro, el iodo o el ozono. Esta caracterstica los hace muy difciles de
eliminar, incluso de controlar, en medicina y en la industria. Ha podido demostrarse la
implicacin del biofilm en la resistencia de las bacterias a los antibiticos. La terapia
antibitica usual elimina las bacterias en estado planctnico, pero no puede acceder a las del
biofilm. Por otra parte, en l se han detectado enzimas hidrolticos del tipo de la -lactamasa
(Widner et en el. 1990), que seran sintetizados en poca cantidad pero que se mantendran
atrapados y concentrados en la matriz del biofilm, lo que contribuira a su proteccin.
Resistencia aumentada a biocidas. Hipoclorito sdico. E. coli
Comparacin del efecto bactericida. A la izquierda, clulas planctnicas; a la
derecha, biofilms
de 3 cepas de E. coli. En ordenadas, log10 CFU/cupn.



Se forman preferentemente en lugares donde se limpia poco, nada, mal o
muy de tarde en tarde: all tienen tiempo para crecer e incluso madurar.
L La matriz del biofilm es un gel cohesivo, a veces firme, difcil de
desprender.
Las clulas estn protegidas por la matriz frente a los agentes
antimicrobianos
y adems, al multiplicarse ms lentamente que las clulas planctnicas, son
menos vulnerables a ellos.
Los fragmentos de biofilm con clulas viables, al desprenderse pueden
dispersarse en lquidos y aerosoles.
Las gotculas de los aerosoles pueden mantenerse en suspensin incluso
horas; pueden depositarse sobre superficies en contacto con alimentos, o
sobre alimentos ya procesados.
Aunque las clulas sean destrudas por los desinfectantes, la matriz puede
permanecer intacta o dejar residuos.
Los restos de matriz facilitan la fijacin de nuevas clulas y el desarrollo de
nuevos biofilms.
Por qu existen y persisten los biofilms
en las plantas de procesado de alimentos?

Generalidades en la industria lactea
En la industria lctea es muy comn la presencia de
bioparticulas en conducciones, equipos y materiales ya que
pueden formarse en cualquier tipo de superficie, incluyendo
plstico, cristal, madera, metal y sobre los alimentos, adems
donde circula permanentemente el producto o en donde hay
posibilidad de acumular residuos de este.
En la industria lctea y en otras industrias alimentarias, se emplean los
sistemas de ultrafiltracin y de osmosis inversa durante el fraccionamiento
de la leche y otros lquidos as como para la clarificacin de zumos de
frutas.

Estos filtros y membranas tienen unos poros de muy pequeo dimetro y
estn continuamente en contacto con el alimento; la ms mnima
adsorcin microbiana bloqueara los poros y provocara la colmatacin del
filtro. Esto producira una reduccin del flujo con las consiguientes
prdidas de rendimiento y de producto (Piera Serra, 2003). Para la
prevencin de los riesgos y del coste de los daos que causan los biofilms
son necesarios procedimientos de limpieza y desinfeccin efectivos
(Silagyi, 2007).
Generalidades en la industria lactea

El dao de leche pasteurizada por bacterias Gram positivas y de esporas
termoresistentes es bien reco- nocido [32], su presencia se da por su
resistencia a tratamientos trmicos as como inadecuados mtodos de
limpieza y desinfeccin de superficies. El incremento del transporte de
leche cruda refrigerada desde las fin- cas productoras hasta las fbricas se ha
incrementado en las ltimas dcadas, generndose problemas de
contaminacin con Bacillus cereus, el cual promueve alteraciones de las
protenas de la leche y lpidos por proteasas y lipasas, disminuyendo la vida
til de los productos [33]; se ha encontrando que las superficies de equipos
post-pasteurizacin, as como otros equipos implicados en la cadena lctea
son reservorios de este microorganismo
Generalidades en la industria lactea
Con respecto a los problemas generados en las diferen- tes operaciones del procesamiento
lcteo, la formacin de depsitos en intercambiadores de calor, es un proble- ma que causa la
reduccin de la eficiencia y el aumento de la cada de presin, afectando la economa de las
plantas de procesamiento. Como resultado de la forma- cin de estos depsitos existe la
posibilidad del deterioro en la calidad del producto por que el fluido no se pude calentar a la
temperatura requerida y a que los depsitos desalojados por el flujo del fluido pueden causar
con- taminacin. Al ser la leche un fluido biolgico complejo, las respuestas trmicas de sus
constituyentes difieren uno del otro, pudindose clasificar los depsitos en dos tipos. El tipo A,
corresponde a protena y se llevan a cabo a temperaturas entre 75 -110C. Estos depsitos son
blancos, suaves y esponjosos y su composicin es de 50- 70% de protenas, 30-40% de
minerales y 4-8% de grasa. Los depsitos tipo B, corresponden a minerales y se presentan a
temperaturas superiores a 110C. Los depsitos son duros de color gris, y su composicin es
de 70-80% deminerales,15-20% de protenas y 4-8% de grasa [32]. La formacin de estos
depsitos promueve la adhesin de microorganismos a la superficie de la transferencia de
calor, formndose una bioincrustacin. La presencia de microorganismos en el flujo del
proceso y/o en la capa de depsitos no solo afecta la calidad del producto, sino que tambin
tiene influencia en el proceso.
Entre los mecanismos de remocin de estas biopelcu- las se pueden usar, el ozono, el agua
electrolizada y el lavado hidrulico, entre otros.
Generalidades en la industria lactea
Recursos bsicos contra biofilms en la industria alimentaria

1. Diseo de equipos e instalacin global fcilmente accesibles para la limpieza.
2. Mantener las superficies pulidas; evitar abrasin, corrosin, empalmes con holgura,
huecos o resquicios, perforaciones o soldaduras poco alisadas.
3. Reponer frecuentemente piezas de materiales agrietables o fcilmente daados.
4. Minimizar durante la produccin las salpicaduras, manchas, charcos, superficies
humedecidas con condensados y restos de lquidos en codos de conducciones.
5. Identificar en la planta los sitios mas favorables para el desarrollo de biofims.
6. Desmontar para limpiar lo que tenga resquicios no accesibles.
7. Evitar pelculas de acondicionamiento por limpieza insuficiente.
8. Eliminar mecnica- o qumicamente la matriz de los biofilms.
9. Controlar durante la limpieza los aerosoles, que transportan restos de biofilm.
10. Adoptar frecuencias de limpieza que eviten llegar a tener biofilms maduros.
Infecciones Asociadas a Biofilm

Caries dental
Periodonditis
Otitis Media
Osteomielitis
Lentes de contacto
Cistitis por catteres urinarios
DIU
Vlvulas mecnicas del corazn
Injertos vasculares
Dispositivos ortopdicos


GRACIAS!!