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O que ?
uma fita que se liga ao mRNA de um gene interrompendo
indiretamente a sntese protica;
Mediado por pequenos RNAs de fita dupla;
Silenciamento por inibio da traduo e/ou degradao do RNAm;
RNA de interferncia
Descrito pela primeira vez em petnias;
Plantas transgnicas, super expressando genes para produo de
pigmentos;
Apresentavam flores brancas devido inibio da sntese do pigmento
por silenciamento do transgene e do gene endgeno;
cossupresso;
Em 1998, o mecanismo de interferncia comeou a ser elucidado.
RNA de inteferncia
Importncia:
- Mecanismo de defesa do organismo (antiviral);
- Silenciamento ps-transcricional de genes;
- Permite estudar a funo de genes especficos.
RNA de interferncia
Caractersticas:
- Presente em muitos organismos;
- Atua como mecanismo de defesa endgeno em nematoides, plantas e
fungos;
- Os dsRNAs envolvidos neste processo, podem ser classificados em
trs principais:
miRNAs
siRNAs
shRNAs
miRNAs (microRNAS)
Pequenos dsRNAs endgenos;
Silenciadores ps-transcricionais,
inibindo a traduo do RNAm-alvo
em protena;
Sua descoberta: Caenorhabditis
elegans;
Conhecidos como reguladores
fundamentais da expresso gnica
em plantas e animais.
miRNAs (microRNAS)
Os genes que codificam miRNAs so transcritos pela RNA polimerase II;
Formam o pri-miRNA (longo microRNA primrio);
clivado por um complexo proteico: RNAse III (Drosha) e protena Pasha;
A clivagem resulta no microRNA precursor (pr-miRNA);
Contendo cap 5 e cauda poli(A)
O pr-miRNA exportado para o citoplasma (exportina-5);
clivado pela Dicer gerando um miRNA maduro;
A Dicer envolvida na incorporao de uma das fitas do miRNA a um
complexo denominado RISC;
.
miRNAs (microRNAS)
O complexo RISC permite o pareamento entre a fita do miRNA
incorporado e a regio homloga do RNAm-alvo por
complementaridade de bases.
Complementaridade total ocorre degradao do RNAm;
Complementaridade parcial ocorre represso da traduo e posterior
degradao do RNAm.
miRNAs (microRNAS)
siRNA (short interfering RNAs)
So molculas sintticas de dupla fita de RNA;
Atuam por meio de pareamento a sequncias complementares ao
RNA mensageiro alvo;
Causando sua degradao: silenciamento especfico do gene;
Silenciamento do gene-alvo possibilita a obteno de informaes sobre
a funo exercida na clula pela protena que esse gene codifica;
siRNA (short
interfering RNAs)
As protenas argonautas so tambm responsveis
pela seleo da fita do siRNA que ser incorporada
ao RISC.
Pareamento a sequncias complementares ao
RNA mensageiro alvo
Silenciamento especfico do gene
Existem trs atributos importantes para se projetar e selecionar um
siRNA:
- Potncia;
- Especificidade;
- Estabilidade s nucleases;
Um dos fatores crticos para o sucesso da tcnica de RNAi a
capacidade do siRNA em silenciar especificamente o RNAm-alvo;
Tambm podem reconhecer e interferir com a expresso de RNAs
mensageiros que apresentam homologia parcial com o RNAm-
alvo.
siRNA (short
interfering RNAs)
shRNAs (short hairpin RNAs)
So RNAs de dupla fita;
Construdos para apresentar uma estrutura semelhante aos miRNAs;
Podem ser introduzidos prontos na clula ou transcritos dentro da
clula;
O transcrito processado pela Dicer da mesma forma que os
miRNAs.
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