BIOTECNOLOGA

Unidad Temtica N 10
PRODUCCIN INDUSTRIAL
DE METABOLITOS TILES,
ALIMENTOS Y BEBIDAS
2
FERMENTACIN BUTRICA
ACETONA Y BUTANOL
COMBUSTIBLES Y PRODUCTOS QUMICOS:
ALCOHOL COMO COMBUSTIBLE
Lic. Liliana Edith Vergara
Profesor Adjunto
3
COMBUSTIBLES Y PRODUCTOS QUMICOS
Industria qumica caracterizada por producir sustancias muy
especficas para otras industrias.
Responde rpidamente ante cambios en demanda, a
variaciones de precios de materia prima y de energa.
Acta con versatilidad, desarrollando procesos tecnolgicos
nuevos y rentables.
Si hay cambios que revierten la situacin, los procesos antes
descartados podrn volverse a emplear.
4
En siglo XX se bas principalmente en el petrleo y sus
derivados.
La crisis de la dcada de 1970 alert sobre riesgos de la
dependencia de un recurso no renovable...
Pero el petrleo sigue siendo competitivo en precios.
Mediados del siglo XXI = disminucin o
agotamiento de las reservas mundiales
5
Va biotecnolgica...
Condicin: existencia de ruta metablica compleja que
comprenda varias etapas.
Permite utilizar un microorganismo para realizar toda la
secuencia de reacciones.
Adems... Mejoramiento gentico de las cepas
industriales por ingeniera gentica.

Va biotecnolgica: metabolitos primarios como algunos
solventes, cidos orgnicos y polmeros, cuya produccin
exige inversiones menores y operaciones simples,
6
Biomasa utilizable como sustrato:

=De 180 x 10
9
toneladas de material obtenido de plantas
producido anualmente sobre la tierra:

- 1 -2% se utiliza para nutricin humana y animal
- 1% para la produccin de fibra y energa.

7
Requerimientos para fermentacin rentable a partir
de carbohidratos de plantas:
Bajo costo de conversin de polmeros a mono y
disacridos.
Uso de cultivos mixtos para catabolizar sustratos diferentes.
Cepas termfilas.
Procesos anaerobios.
Adaptable a sistemas de cultivo continuo.
Bajos costos de recuperacin y concentracin.
8
Se producen en grandes cantidades a partir del petrleo...
Su obtencin por fermentacin microbiana puede resultar
rentable...
Se han usado en gran escala ciertos Clostridium spp.
Los solventes industriales acetona y butanol
Muchos clostridios:
Azcares = CO
2
,
+ H
2
+ cido butrico
Reacciones posteriores:
cido butrico Butanol
cido actico Acetona y etanol
9
FERMENTACIN BUTRICA
ACETONA / BUTANOL
10
Fermentacin butrica: Acetona / Butanol

+ Observada por primera vez por Pasteur (siglo XIX)
+ Antes de 1 Guerra Mundial: procesos microbianos para
obtener butadieno (para caucho sinttico)
Chaim Weizmann, (1874) investiga fermentacin
con Clostridium acetobutylicum (ferment. ABE)
Logr obtener acetona, utilizada para
produccin de trinitrotolueno (TNT)
Es considerado el Padre de la fermentacin
industrial
11
+ Despus de la guerra: butanol para produccin de lacas de
nitrocelulosa.
+ Fermentacin ABE fue utilizada hasta los aos 50...
+ Mayora de las plantas con fermentadores < 200m
3
fueron
cerradas.
+ Permanecen algunas plantas funcionando en pases tales
como Taiwn y Sudfrica.
Fermentacin butrica: Acetona / Butanol

12
Fermentacin de acetona-butanol con Clostridium acetobutylicum
Fermentacin del butanol-isopropanol con Clostridium butylicum
Fermentacin del actico-butrico con Clostridium butyricum
Fermentacin butrica: Acetona / Butanol

Acido butrico, butanol, acetona, isopropanol:
fermentacin
por clostridios
almidn, melazas,
sacarosa, hidrolizados
de madera y pentosas
13
NMuy comunes en la naturaleza (suelos, plantas, estircol, etc.)
NBacilos capaces de formar esporas en condiciones adversas
NSon anaerbicas
NTemperatura ptima de crecimiento es de 37C
NForman cido butrico
NCarecen de citocromos = obtienen ATP slo por fosforilacin
a nivel sustrato
Bacterias butricas
(Clostridium)
Clostridium perfringens
14
CIDO BUTRICO
GLUCOSA
DE: ttp://www.educa.madrid.org/web/ies.rayuela.mostoles/deptos/dbiogeo/recursos/Apuntes/ApuntesBioBach2/4-FisioCelular/Metabolismo.htm
15
Tabla 10.4. Caractersticas de algunos grupos del gnero Clostridium (Brock, 2000).
Caractersticas clave Otras caractersticas Especies
I. Fermentan carbohidratos
Fermentan celulosa
Productos de fermentacin: acetato,
lactato, succinato, etanol, CO
2
, H
2
.
C. cellobioparum
C. thermocellum
Fermentan azcares, almidn
y pectina

Productos de fermentacin: acetona,
butanol, etanol, isopropanol, butirato,
acetato, propionato, succinato, CO
2
, H
2
,
algunos fijan N
2
.
C. butyricum
C. acetobutylicum
C. pasteurianum
C. perfringens
II. Fermentan protenas
o aminocidos
Productos de fermentacin: acetato, otros
cidos grasos, NH
3
, CO
2
, a veces H
2
,
algunos fermentan azcares hasta
butirato y acetato; pueden producir
exotoxinas.
C.sporogenes
C. tetani
C. botulinum
C. tetanomorphum
III. Fermentan el etanol a cidos
grasos
Producen butirato, coproato y H
2
;
requiere acetato como aceptor de
electrones; no utiliza azcares,
aminocidos o purinas.
C. kluyveri
Clostridium botulinum
16
Produccin biotecnolgica de etanol...
Usado como aditivo a los combustibles de
automviles...
Hoy existe considerable inters industrial
en realizarla mediante la fermentacin
de la celulosa por clostridios.
Finalidad: usar restos de celulosa como
combustible para motores.
PROCESO DE PRODUCCIN
Acetona - Butanol
18

GLUCOSA
Gluclisis
Piruvato
-

Acetil-CoA + CO2 + Fdred
CH3COCH2 COCoA
HidroxibutirilCoA
H2O

BUTANOL
CH3CH2 CH2 CH2OH
ACETONA
CH3CO CH3



ISOPROPANOL
CH3CHOH CH3
ATP ADP
ADP ATP

H2
Pi
Acetil ~ P
Acetaldehdo
ETANOL
2 H
2 H
Acetoacetil-CoA
Acetil-CoA
Acetoacetato
-

CO2
2 H
CrotonilCoA
ButirilCoA
Butiraldehdo
2H
2 H
2 H
2 H
BUTIRATO
-

CH3CH2 CH2 COO
-


ACETATO
QUIMISMO
19
O Los cultivos de reserva de Cl. acetobutylicum se mantienen como
esporas en arena incluso durante 30 aos
O Tanto la produccin de esporas como la preparacin de los
inculos son crticas
O Los fermentadores de produccin deben ser inoculados con baja
relacin de inculo (1 : 3.000)
O Se prepara a partir de serie de cultivos de vol.
creciente y se aade mediante presin del gas
Inculo
Las condiciones anaerbicas se mantienen
desde el principio de la fermentacin por
produccin de CO
2

20
Materias primas y condiciones de la fermentacin
Las materias primas deben ser sometidas a diversos pretratamientos
antes de someterla a la fermentacin:
-Jugo de la caa de azcar: extraccin por molienda y lavado
-Cereales: molienda, amasado, calentamiento y conversin del
almidn en glucosa (sacarificacin enzimtica)
-Biomasa de lignocelulosa: drstico y procedimientos de hidrlisis.

(Mtodos para eliminar la lignina y exponer celulosa cristalina incluyen empleo
de cidos, bases, vapor y procedimientos mecnicos que aumentan
significativamente los costos)
21
Concentracin del azcar: 6%, lquidos de fermentacin
de maz, suplementada con sales de N y P
pH inicial: 5,8 - 6,0
Esterilizacin a 120C
Enfriamiento a 35-40C bajo presin positiva del gas de
fermentacin
Condiciones para la preparacin del medio
con Melazas
22
Deben resistir presiones de vapor de
esterilizacin de al menos 1 bar.
Deben trabajar posteriormente en
condiciones de anaerobiosis estricta.

N Una vez esterilizados, son gaseados
con CO
2
, y antes y despus de la
inoculacin en contenido del
fermentador es agitado con CO
2

Recipientes para la fermentacin de
acetona-butanol
23
La fermentacin tiene tres fases...

solvente
cidos
prod. de gas
valor de pH
Tiempo de fermentacin (h)
9 18
Unidades
relativas
pH
27 36
5,0
5,5
6,0
N Al finalizar la fermentacin, generalmente tras 40-48 horas, se
alcanza el mximo rendimiento tolerado de disolventes (2%)
24
La fermentacin de azcares por C. acetobutylicum y otros
clostridios sacarolticos produce gran variedad de compuestos...
Productos de la fermentacin acetona-butanol
(a partir de glucosa=100) (Brown, 1989).
CO
2

Butanol
Acetona
cido Actico
Etanol
Iso-Propanol
H
2

> 50
> 20
8
4
3
3
2
Las cantidades, y en realidad los propios compuestos, varan entre cepas,
especialmente la relacin acetona-butanol. No todos los compuestos que
se indican son producidos por todas las cepas de C. acetobutylicum.
25
En orden de temperatura creciente, se recogen del destilador:
1. Acetona
2. Mezcla de disolventes etanol y 2-propanol
3. El azetropo butanol/agua
N Adems, la biomasa microbiana producida proporciona una fuente valiosa
de riboflavina (vitamina B2).
26
A una concentracin < o,5% no influye sobre las clulas,
A > concentraciones causa dao a los
fosfolpidos de las membranas,

Por encima de 1,5% la produccin de butanol cesa,

Dependiendo de la cepa, y de las condiciones de
fermentacin, pueden producirse autolisinas.
El butanol sobre las clulas....
27
NActualmente: estudios para desarrollar un
proceso de fermentacin continua

NO para utilizar o clulas inmovilizadas...
NLa inmovilizacin de microorganismos dara
un nuevo impulso a la sntesis de solventes,
al aumentar la productividad en 60%.
28
PRECAUCIONES !!
=El medio utilizado para C. acetobutylicum es tambin
favorable para bacterias lcticas.
=Si comienzan a crecer, rpidamente inhiben el desarrollo de los
clostridios por produccin de cido lctico.
=Ms grave an: infeccin por bacterifagos...
NLa contaminacin por bacterifagos y lactobacilos es un problema
comn... y por consiguiente la esterilidad absoluta es una necesidad
29
La fermentacin de la acetona-butanol se realizar
con xito slo bajo condiciones de un cuidadoso control
microbiolgico.
El establecimiento de esta industria es importante en la
historia del desarrollo de la tecnologa de las
fermentaciones
Se destaca como el primer proceso a gran escala que
requiri CONDICIONES DE CULTIVO PURO
30
ACETONA: como solvente en manufactura de lacas, resinas,
cauchos, grasas y aceites.
BUTANOL: en produccin de lacas, rayn, detergentes, lquido de
frenos, aminas y como solvente general.
Hoy llamado BIOBUTANOL, es combustible no corrosivo,
Tiene el potencial de ser mezclado con las naftas en mayores
concentraciones que los actuales biocombustibles,
Sin necesidad de cambios en los vehculos.
Superior a mezcla nafta-etanol, rinde ms kilmetros por litro.

USOS
31
Los ltimos avances en la sacarificacin de maderas y en
general, en la hidrlisis de metales celulsicos, permite
suponer un mayor desarrollo futuro de la fermentacin de
estos residuos a productos qumicos tiles o combustibles.
32
Objetivo General
Desarrollar un mtodo de obtencin de bioetanol utilizando material
lignocelulsico proveniente de residuos agroindustriales, buscando el
progreso socio-econmico, medioambiental y productivo provincial y
nacional.
Objetivos Particulares
Buscar el tipo de material lignocelulsico que mejor se ajuste al proceso
productivo, teniendo en cuenta disponibilidad, costo y caractersticas
estructurales. La biomasa a tener en cuenta son pasto seco, paja, cscara de
arroz y aserrn proveniente de aserraderos de la zona.
Analizar las etapas posibles, buscando las que mejores se ajusten al mayor
rendimiento y rentabilidad del proceso como un todo. Las etapas
mencionadas son: pretratamiento, hidrlisis, fermentacin y separacin.
El diseo y/u optimizacin de los equipos necesarios.
Plan Beca de Doctorado
OBTENCIN DE ETANOL A PARTIR DE MATERIALES
LIGNOCELULSICOS
33
Referencias Bibliogrficas
Crueger, W.; Crueger, A. Biotecnologa. Manual de Microbiologa Industrial. 3 ed.
Acribia, Zaragoza. 1993.
Jagnow, G.; Dawid, W. Biotecnologa. Introduccin con experimentos modelo. Acribia,
Zaragoza, Espaa. 1991.
Madigan, M.; Martinko, J.; Parker, J. Brock. Biologa de los microorganismos. 8 ed.
Prentice Hall. Espaa, 2000.
Scragg, A. Biotecnologa para Ingenieros. Sistemas biolgicos en procesos tecnolgicos.
Limusa. Mxico. 1997.
Ward, Owen. Biotecnologa de la Fermentacin. Acribia, Zaragoza. 1991.
Alkalay, D. Universidad Tcnica Federico Santa Mara. Departamento de Procesos
Qumicos. Valparaso Chile. Aprovechamiento de desechos agropecuarios para la
produccin de energa. En: http://www.fao.org/docrep/006/AD098S/AD098S08.htm.
Muoz de Malajovich; M-A. Biotecnologa. 1 ed. Universidad Nacional de Quilmes.
Bernal. Buenos Aires. 2006.