ESPECTROSCOPIA NA LUZ

VISVEL E ULTRAVIOLETA

ESPECTROSCOPIA NA LUZ
VISVEL E ULTRAVIOLETA
1) Introduo:

Identificao de compostos orgnicos , inorgnicos e
ons

Anlise quantitativa de alguns grupos funcionais
orgnicos

Determinao quantitativa de espcies orgnicos,
inorgnicos e biolgicos




Existem vrios mtodos espectrofotomtricos
em anlise de alimentos:


Colorimetria visa determinar a
concentrao de uma substncia, em
condies bem definidas, pela medida da
absoro da luz, tornando referncia a
absoro da substncia numa concentrao
definida.
Mtodos Espectrofotomtricos

- Mtodo analtico sensvel

- Rpido

- Resultados precisos

- Utilizada na determinao da concentrao dos
constituintes do alimento
Mtodos Colorimtrico

- Leitura dos valores de absorbncia de solues
padres de concentraes conhecidas

- Curva padro

- Determinao da concentrao de uma
determinada substncia presente na amostra
2) Fundamentao Terica

2.1

Radiao Eletromagntica

Ondas eletromagntica: campos oscilantes

eltrico (E) e magntico (M)
A radiao eletromagntica se propaga numa
velocidade constante, mas depende do ndice de
refrao meio que atravessa

Equaes






Requisitos para que uma radiao seja absorvida por
uma molcula:

A radiao incidente deve ter a mesma freqncia
da freqncia rotacional, vibracional, eletrnica ou
nuclear da molcula

A molcula deve ter um dipolo permanente ou um
dipolo induzido, isto , deve haver alguma coisa para
a energia absorvida fazer: DEVE SER FEITO UM
TRABALHO (TRANSIO, ROTAO E
VIBRAO)






A regio do espectro do ultravioleta na faixa de 200 a 400 nm e a da luz
visvel entre 400 e 700 nm. Transies dos eltrons de valncia
2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel

O espectro de energia radiante dividido em vrias regies e
seus limites foram determinados por limites prticos de mtodos
experimentais apropriados de produo e deteco de radiao.
Diferentes regies espectrais tm significado na interaes fsicas.

Em anlise, o importante das solues coloridas ou
incolores que a radiao absorvida uma
caracterstica da amostra absorvente

Espectros (UV) e Visvel

resultado de transies eletrnicas
(eltrons da camada de valncia)
2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel
Radiao contnua de luz branca atravessa a amostra

Intensidade da radiao vai decrescer

A radiao emergente poder ser
colorida (regio visvel, porque na regio do visvel
veremos a cor da radiao emergente


2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel
Exemplo: amostra absorve luz de comprimento de onda da
luz azul
radiao emergente seu
complemento, que a luz amarela.

Corante TARTRAZINA

Cor amarela, pois a soluo est
absorvendo o complemento do amarelo que o azul
(430 nm), sendo transparente para as demais cores.

2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel
Qualquer material solvel pode colorido pode ser
analisado quantitativamente deste modo

BASE DA ESPECTROMETRIA DE ABSORO
VISVEL

Transformar uma substncia incolor ou pouco colorida
em colorida atravs de reaes qumicas e analis-las

BASE DA COLORIMETRIA
2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel
COLORIMETRIA

Exemplo: Determinao de Fsforo

Reao colorimtrica (soluo de molibdato de
amnia + metavanadato de amnia)

Formao de um complexo de cor amarela
* radiao absorvida deve ser complementar a
amarela, que a radiao azul com comprimento de onda
entre 450 480 nm
* leitura da absorbncia mxima para este complexo
ser de 470nm



Substncias incolores

Podem ser analisadas diretamente sem
nenhuma reao colorimtrica atravs de radiao
ultravioleta (UV)
BASE PARA RADIAAO ULTRAVIOLETA

Exemplo: Conservantes de alimentos
cido benzico e cido srbico so incolores e no
existe nenhuma reao colorimtrica para torn-los
coloridos

2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel

Radiao das regies do visvel e UV

Suficiente apenas para causar a excitao dos
eltrons das camadas externas (de valncia)

- Sigma () : ligaes simples C-C

Ligaes muito fortes absoro na regio do
UV difcil
Compostos saturados: propano 135 nm

2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel

Radiao das regies do visvel e UV

Suficiente apenas para causar a excitao dos
eltrons das camadas externas (de valncia)

Pi: ligaes dupla C= C

Ligaes mais fracas possuem grande
absoro nas regies do visvel e UV
Ex: Carotenides absorvem na regio do visvel
(380 700 nm)
2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel

Radiao das regies do visvel e UV

Suficiente apenas para causar a excitao dos
eltrons das camadas externas (de valncia)

Eltrons que no so de ligao os orbitais
atmicos eltrons no ligantes (n): elementos como O, S
etc.
Transio de n so mais difceis e se do na
UV do vcuo
Exemplo: anel benzeno, absorve na regio UV (200 380
nm)


2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel

Absoro nas regies do visvel e UV

Ligaes dupla conjugadas, com transies
eletrnicas

CROMFOROS grupos dos compostos que
possuem estas caractersticas e absorvem radiao UV/Visvel

* Transies n intensidade dos espectro fraca


2.2 Espectrometria de absoro nas regies ultravioleta
(UV) e Visvel
2.3 Lei de Beer-Lambert
- Lambert estudou a transmisso da luz por slidos
homogneos.
- Beer estendeu o trabalho de Lambert ao estudo
de solues.

Atravs dessa lei:

intensidade da radiao incidente e emergente
podem ser relacionadas com as concentraes do
material presente na amostra.
2.3 Lei de Beer-Lambert
quadro
2.3 Lei de Beer-Lambert
Consideraes:

So consideradas desprezveis os efeitos
de reflexo, difuso e fluorescncia.

Radiao incidente deve ser
monocromtica conter somente um
comprimento de onda.


Espectroscopia de Absoro
preciso determinar a quantidade de luz que a amostra ir
absorver, sendo descrito pela Lei de Beer-Lambert que a
relao entre a intensidade da luz incidida na soluo (P
0
) e a
intensidade da luz saindo da soluo (P).


-log (P/P
o
) = A = abc

A = absorvncia
a = absortividade molecular ou coeficiente de extino
c = concentrao do material absorvedor
l = espessura da amostra atravs da qual a luz passa (largura da
cubeta)

Pela Lei de Beer podemos concluir que a absorvncia de uma
soluo diretamente proporcional concentrao da espcie
absorvente quando se fixa o comprimento

Espectroscopia de Absoro

-log (P/P
o
) = A = abc

A = absorvncia
a = absortividade molecular ou coeficiente de extino
c = concentrao do material absorvedor
b = espessura da amostra atravs da qual a luz passa (largura da
cubeta)

Pela Lei de Beer podemos concluir que a absorvncia de
uma soluo diretamente proporcional concentrao da
espcie absorvente quando se fixa o comprimento do percurso;
e diretamente proporcional ao comprimento do percurso quando
se fixa a concentrao

Espectroscopia de Absoro

Assim a definio da absorvncia nas condies da validade da lei
de Lambert-Beer uma quantidade proporcional concentrao.
O espectrofotmetro se torna um medidor e concentrao
seletivo para uma determinada substncia, atravs da relao:


C = A/ab

A = absorvncia
a = absortividade molecular ou coeficiente de extino
c = concentrao do material absorvedor
b = espessura da amostra atravs da qual a luz passa (largura da
cubeta)



Desvios da Lei de Beer-Lambert
Desvios Qumicos:
Mudanas na concentrao da soluo por
interao das molculas do soluto entre si e
com o solvente, atravs dos efeitos de
associao ou dissociao.

Pode ser evitado trabalhando com solues
diludas (0,01M)

Desvios da Lei de Beer-Lambert
Desvios Instrumentais:
A iluminao no monocromtica,
isto , de um nico comprimento de onda

O sinal do detector no linear nem
proporcional a concentrao da soluo.

Anlise Qualitativa
A identificao do composto feita atravs da
comparao com padres do valor do comprimento de
onda

O solvente escolhido deve ser transparente na regio
escolhida (mximos de absoro afetadas pela natureza
do solvente)
Anlise Quantitativa
Quantidade do composto medida pelo valor de
absorvncia mxima (topo de um pico de absoro)

Razes:
a) A variao na absorvncia para uma dada mudana de
concentrao ser maior, resultando em sensibilidade e
preciso maiores
b) O efeito relativo de outras impurezas minimizado
c) A mudana da absorvncia com o comprimento de
onda menor devido ao espectro de absoro mdio
ser relativamente plano no topo do pico. Logo a medida
no seriamente afetada por pequenos erros de ajuste
do comprimento de onda.
Anlise Quantitativa
Quantidade do composto medida pelo valor de
absorvncia mxima (topo de um pico de absoro)

Concluso;

A escolha do comprimento de onda () mximo deve ser
onde haja mxima absorvncia (A) e,
consequentemente, mnima transmitncia (T)
Clculos da Concentrao (C), Utilizando a Lei de
Beer
A) Com valor de absortividade (a) da amostra
conhecido:

Usar a Lei de Beer-Lambert:

A= abc, e tirar o valor de c

A = absorvncia
a = absortividade molecular ou coeficiente de extino
c = concentrao do material absorvedor
b = espessura da amostra atravs da qual a luz passa
(largura da cubeta)

Com o valor de absortividade (a) da amostra
desconhecido:

- Fazer a curva padro
- Leva-se o valor da mxima absorvncia da amostra
para uma curva padro construda com concentraes
diferentes e tira-se a concentrao do composto
analisado.
- Importante verificar a linearidade da resposta em
relao curva padro pois, acima de uma certa
concentrao , a relao AxC deixa de ser linear (o
grfico uma reta)

Clculos da Concentrao (C), Utilizando a Lei de
Beer
Espectrofotmetro
Instrumento que registra dados
de absorbncia em funo do
comprimento de onda ().
A caracterstica mais
importante do
espectrofotmetro a seleo
de radiaes monocromticas.
O espectro de absoro
caracterstico para cada
espcie qumica, sendo
possvel a identificao de
uma espcie qumica atravs
do seu espectro de absoro.
Esquema dos principais componentes de
um espectrofotmetro
A amostra deve estar em um recipiente (cubeta) de
quartzo quando a radiao for na regio espectral do
ultravioleta. Quando for na regio da luz visvel usa-se
os de vidro por ter uma melhor disperso.
Os detectores devem ser altamente sensveis.
Os dados obtidos pelo detector so enviados para um
dispositivo de processamento de dados.
Fontes de Radiao
As fontes mais comuns baseiam-se na
incandescncia, mas devem atuar em
temperaturas elevadas para ter uma cobertura
aprecivel no ultravioleta.
So constitudas por filamentos de materiais que
so excitados por descargas eltricas com
elevada voltagem ou aquecimento eltrico.
Tipos:
Lmpada com descarga de hidrognio:
utilizada na regio UV
Lmpada de tungstnio: utilizada na regio
visvel

Fontes de Radiao
Condies para uma fonte ser de boa qualidade
para atuar nessa faixa:
gerar radiao contnua;
ter intensidade de potncia radiante suficiente
para permitir a sua deteco pelo sistema
detector;
ser estvel.

Alm disso deve ter um tempo de vida longo e
preo baixo.
Monocromadores
Funo: seleo do comprimento de onda em que se tem interesse
para a anlise.
Constituio:
fenda de entrada de um elemento de disperso de radiao
fenda de sada
Tipos:
prismtico
reticuladores
Monocromador Prismtico
A radiao policromtica vinda da fonte de
radiao passa pela fenda de entrada e incide
sobre a face de um prisma, sofrendo um desvio.

Os vrios comprimentos de onda tero
diferentes direes aps a incidncia no prisma.
Se for realizado um ajuste rigorosamente
controlado da fenda de sada, pode-se
selecionar o comprimento de onda desejado.
Monocromador Prismtico
Monocromador Reticular
O principal elemento dispersante a rede de difrao.
Essa rede consiste em uma placa transparente ou
refletora com muitas ranhuras paralelas e equidistantes.

Disperso resultante desta rede linear. Os vrios
comprimentos de onda dispersos so igualmente
espaados, por isso a fenda de sada isolar uma banda
de radiao de largura constante.

A resoluo muito mais elevado que os prismas.


Monocromador Reticular
Tipos de Espectrofotmetros para
a Regio Visvel e Ultravioleta

Espectrofotmetro mono-feixe :














a) Fonte: fonte de radiao


b) Monocromador: selecionar uma banda ou um nico comprimento de
onda


c) Cela para a amostra: cubetas

Regio visvel: material transparente como vidro ou
plstico

Regio ultravioleta: no pode ser de vidro, porque ele
absorve radiao nesta regio, sendo utilizada a cubeta de quartzo, que
mais cara













d) Detector

Fotoclulas que detectam a quantidade de radiao transmitida
aps a passagem pela amostra, porm o resultado pode ser convertido
em quantidade de radiao absorvida pela amostra.



e) Amplificador

Amplificao da resposta (ftons-multiplicadores)
Fton da radiao passa pelo amplificador e registrado com
maior nmero de eltrons


f) Registrador

Registrador transforma o sinal eltrico que chega ao detector e
amplificador em energia mecnica fazendo o registrador mover-se,

Solvente :

Regio visvel:
qualquer lquido que no tenha cor, e o mais
usado gua estilada.

Regio UV:
qualquer solvente que no absorva nesta
regio, que no tenha duplas ligaes
conjugadas, como, por exemplo, a gua ou
hidrocarbonetos saturados.




Etapas:

1) Coloca-se o solvente (branco) no caminho tico e
mede-se a intensidade da energia radiante,que atinge o
detector;

2) Substitui-se o recipiente com o solvente (branco) pelo
recipiente com a amostra e faz- se a determinao
propriamente dita da absorbncia.





Espectrofotmetros mono-feixe:

- No so cmodos pois a amostra e o
branco tem que ser colocados
alternadamente no nico feixe de
radiao;

- mais simples e baratos

- no registra espectro



Espectrofotmetro duplo-feixe
Dois feixes de radiao so formados no espao, por um espelho
que divide o feixe vindo do monocromador em dois. Um feixe passa
atravs da soluo referencia (branco) at o transdutor e outro, ao
mesmo tempo, passa atravs da amostra at o segundo transdutor.
As duas correntes sero determinadas e mostradas no indicador de
sinal. Com o auxlio de um dispositivo apropriado, calcula-se a
diferena de transmitncia entre os dois feixes, essa diferena ser
mostrada no indicador de sinal como absorvncia
REGISTRA APENAS O ESPECTRO DA AMOSTRA

Espectrofotmetro duplo-feixe

Espectrofotmetro duplo-feixe