Hemoparasitosis: paludismo, Enfermedad

de Chagas, Bartonelosis, Leishmaniasis.

Diagnstico de dengue, fiebre
amarilla, rubola, rickettsiosis,
leptospirosis, peste
Diagnstico de tuberculosis
El dengue es la arbovirosis ms importante en salud
pblica; reingres al Per en 1990 y se encuentra
presente en la Amazona y costa norte, incluyendo,
recientemente a Lima
DENGUE


El principal vector del
dengue es el mosquito
antropoflico Aedes
aegypti
Este, es un efectivo vector de
diversas arbovirosis, pero en la
actualidad su mayor importancia
epidemiolgica est ligada a su
papel como transmisor del dengue y
la fiebre amarilla urbana.

El virus del dengue (VD),
pertenece al genero de los
Flavivirus (del latn Flavus o
Amarillo),
Familia Flaviviridae un
grupo de ms de 68 agentes
virales
transmitidos por artrpodos
o zoonticamente y de los
cuales por lo menos 30
causan enfermedad en el
hombre
Tanto el dengue clsico (DC), y el
dengue hemorrgico (DH) como
el sndrome de choque por
dengue (SCD) son causados por
el virus del dengue (VD).
Un virus ARN positivo
unicatenario el cual posee cuatro
serotipos vinculados
antignicamente conocidos como
serotipos dengue 1, 2, 3, y 4
Pruebas de laboratorio
clnico
Examen de sangre,
leucocitos, plaquetas,
hematocrito , Albmina
Pruebas de la funcin
heptica
Orina verifique si hay
hematuria microscpica
Pruebas especficas para
dengue
Aislamiento del virus
Serologa

Recoleccin y procesamiento de muestras para el
diagnstico de laboratorio
Tipo de
especimen
Momento de recoleccin Tipo de
anlisis
Sangre de la fase aguda
(0 a 5 das despus de
la aparicin)


Sangre de la fase
convalesciente
(>6 das despus de la
aparicin)
Cuando el paciente se
presenta; recoger la segunda
muestra durante la
convalecencia


Entre los das 6 y 21
posteriores a la aparicin
Aislamiento del virus
y/o serologa


Serologa

Las pruebas para el diagnstico del dengue
dependen del momento de la enfermedad.

El virus se puede aislar con mayor facilidad
en muestras extradas en los primeros das
despus de la aparicin de los sntomas, si
bien se ha aislado tanto como 12 das
despus de la aparicin.
.
Tambin se debe extraer una muestra en la fase
convaleciente para ensayar la presencia de
anticuerpo IgM.
Esta muestra se debe extraer entre 6 y 21 das
despus de la aparicin de los sntomas.
Si el paciente se presenta seis o ms das
despus de la aparicin de los sntomas, la
muestra de sangre se debe extraer tan pronto
como sea posible. Esta muestra se deber
entonces ensayar para detectar la presencia de
anticuerpo IgM en el suero

PRINCIPIO DE LA TECNICA
Las tiras sern sensibilizadas con una Inmunoglobulina de
carnero anti IgM humana, la cual reaccionara con los
anticuerpos de clase IgM presentes en la muestra del
paciente.

Al adicionar el antgeno del virus del Dengue (VD) este
reaccionara con las Inmunoglobulinas M capturadas
previamente si estas son especficas para el VD.

Posteriormente se adiciona el conjugado, formado por
inmuglobulinas anti VD acopladas a la enzima peroxidasa del
rbano.


ELISA DE CAPTURA DE IGM

Si las reacciones previas han sido especficas
el conjugado reaccionar con el antgeno
del VD.

Cuando se adiciona el substrato este es
degradado por la enzima peroxidasa
traducindose en un cambio de color en la
reaccin en las muestras positivas
APLICACIN

La deteccin de IgM especfica
contra el virus del Dengue (VD).

Es un mtodo rpido, sencillo y
econmico, que tiene una
elevada sensibilidad y
especificidad, por lo que
constituye el sistema de
eleccin para la vigilancia
seroepidemiolgica del
Dengue.

Los resultados de esta
tcnica deben
interpretarse con
cuidado, porque
dependen en gran
medida del momento en
que se tome la muestra y
del tipo infeccin
(primaria o secundaria)
que presente la persona
afectadas
La presencia de IgM especfica contra
el virus del Dengue en una en
muestra de suero significa que, esta
persona se ha infectado
recientemente con este virus.

Los resultados negativos deben
interpretarse cuidadosamente. Una
muestra tomada antes del 7mo da
de iniciados los sntomas puede
resultar negativa.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS EN LA
DETERMINACION DE IgM ESPECIFICA CONTRA EL
VIRUS DEL DENGUE
En este caso debe tomarse
una segunda muestra o
auxiliarse de otro mtodo
diagnstico.
En las infecciones
secundarias o terciarias la
IgM puede fallar en un %
bajo, en ese caso se puede
auxiliar de otros mtodos
serolgicos que determinen
fundamentalmente IgG anti
virus del dengue.
PRINCIPIO DE LA TECNICA


Algunos virus poseen protenas en sus superficies
capaces de aglutinar a eritrocitos de ciertas especies.


El virus del Dengue aglutina a eritrocitos de ganso y
humanos del grupo O.
Producto de la infeccin del VD se forman
anticuerpos que se unen al virus e inhiben la
hemoaglutinacin
HEMAGLUTINACION E INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION
TRANSCRIPCION REVERSO - REACCION EN
CADENA DE LA POLIMERASA ( RT PCR)


El PCR es un mtodo "in vitro" que usa la
sntesis enzimtica para replicar selectivamente
una regin diana dentro de un DNA de doble
cadena, de forma similar la amplificacin de RNA
puede ser hecha proporcionando una copia de
DNA complementario (DNAc) que haya sido
previamente sintetizada por reverso
transcriptasa.

Placa ELISA
La prueba ELISA detecta la presencia
de IgM antidengue en la muestra de
sangre del paciente, lo cual indica una
infeccin reciente de dengue. Cuanto
ms intensa sea la reaccin de color,
tanto mayor ser el nivel de anticuerpo
IgM antidengue en la muestra.
FIEBRE AMARILLA
La Fiebre Amarilla es una enfermedad
infecciosa, producida por un virus, que aparece
de forma brusca, dura poco y su gravedad es
variable.
Los casos ms leves pueden presentar un
cuadro clnico indefinido.
Generalmente la enfermedad se caracteriza
por aparicin repentina de fiebre, escalofros,
cefalea, mialgias generalizadas, postracin,
nusea y vmito.
El pulso puede ser lento y dbil, la ictericia es
moderada en los inicios del cuadro y se
intensifica en etapas posteriores.
Pueden aparecer albuminuria (en ocasiones
intensa) y anuria.
Se presenta leucopenia al inicio, que es ms
pronunciada hacia el quinto da.
En algunos casos se produce una breve
remisin que vara desde varias horas a un
da, y evoluciona hacia la etapa de
intoxicacin, que se manifiesta por sntomas
hemorrgicos tales como epstaxis,
hemorragia gingival, hematemesis, melena e
insuficiencia heptica y renal.
Entre 20% y 50% de los casos con ictericia son
mortales. La tasa de letalidad puede ir desde
el 5% hasta el 20% a 40% en algunos brotes.
Escenarios epidemiolgicos: Salud, Escenarios epidemiolgicos: Salud,
Sociedad y Ambiente. Sociedad y Ambiente.
El Contexto El Contexto
Extrema Pobreza.
Polos de Desarrollo, migracin y
empleo temporal.
Problemas de accesibilidad
Econmica, Cultural y Geogrfica
a los Servicios de Salud.
Coberturas y capacidades
resolutivas de los Servicios de
Salud
Ambientes insalubres y Nichos
eco-epidemiolgicos
El agente infeccioso es el
virus de la fiebre amarilla, del
gnero Flavivirus, familia
Flaviviridae.

El Periodo de incubacin
tres a seis das
.
El periodo de incubacin
extrnseco en Aedes
aegypti suele ser de 9 a 12
das a las temperaturas
habituales de los trpicos.
Una vez infectado, el
mosquito permanece as
durante el resto de su vida.
La enfermedad confiere inmunidad durante largo tiempo. La
inmunidad pasiva transitoria de los nios nacidos de madres
inmunes puede persistir hasta seis meses.
En zonas endmicas son comunes las infecciones leves no
manifiestas.
La sangre de los enfermos es
infectante para los mosquitos
desde poco antes de aparecer la
fiebre y durante los primeros tres a
cinco das del cuadro
La enfermedad es altamente
transmisible en los sitios donde
coexisten muchas personas
susceptibles y abundantes
mosquitos vectores
periodo de transmisibilidad

El diagnstico de laboratorio se
hace por aislamiento del virus a
partir de la sangre.
Por demostracin del antgeno
vrico en sangre mediante la
tcnica de ELISA o en tejido
heptico por empleo de
anticuerpos especficos
marcados.
Por demostracin del genoma
vrico en la sangre y en el tejido
heptico.
El diagnstico
serolgico incluye la
demostracin de IgM
especfica en suero
obtenido durante la fase
inicial o una elevacin del
ttulo de anticuerpos
especficos en pares de
sueros obtenidos en la
fase aguda y en la de
convalecencia.

Diagnstico Diferencial
Las distintas formas clnicas de
la fiebre amarilla tambin
pueden identificarse en otras
enfermedades febriles que
evolucionan con ictericia,
manifestaciones hemorrgicas
o ambas.
En Amrica las principales
enfermedades que deben
considerarse en el diagnstico
diferencial de la fiebre amarilla
son:


Leptospirosis
Malaria grave
Hepatitis virales,
especialmente la
forma fulminante de
la hepatitis B y la
hepatitis por virus
delta
Fiebre hemorrgica
por virus dengue
fiebres hemorrgicas
boliviana, argentina y
venezolana

Resumen de criterios de laboratorio para el diagnstico de
casos
Aislamiento del virus de la
fiebre amarilla.
Presencia de IgM
especfica para el virus de
la fiebre amarilla
Aumento de por lo menos
cuatro veces en los niveles
de anticuerpos de IgC
contra el virus de la fiebre
amarilla (seroconversin),
en muestras de suero
obtenidas en las fases
aguda y de convalecencia,
por las pruebas de
inhibicin de la
hemaglutinacin, fijacin del
complemento o
neutralizacin.
Lesiones histopatolgicas
compatibles con las de la
fiebre amarilla o deteccin
de antgenos vricos por el
mtodo inmunohistoqumico
en muestras de tejido.
Deteccin por reaccin en
cadena de la polimerasa
(RCP) de secuencias del
genoma del virus en tejidos
o en sangre .


El Reservorio, en las zonas
urbanas, son los seres humanos
y los mosquitos Aedes aegypti.
En las zonas selvticas,
vertebrados no humanos,
principalmente los monos y tal
vez los marsupiales, y mosquitos
de la selva.
La transmisin transovrica en
los mosquitos quiz contribuya a
que se perpete la infeccin.
Los seres humanos no tienen
una funcin esencial en la
transmisin de la fiebre amarilla
selvtica, pero son los
principales huspedes
amplificadores en el ciclo
urbano.

Se Transmite, por la
picadura de mosquitos
Aedes o Haemagogus
infectantes.
Aedes albopictus se ha
introducido en Brasil,
Estados Unidos y Europa
y tendra la capacidad de
combinar los ciclos
selvtico y urbano de la
fiebre amarilla , aunque no
se ha demostrado aun la
participacin de dicha
especie en la transmisin
de la misma
FIEBRE AMARILLA
Reservorio: monos, marsupiales
Modo de transmisin: picadura de mosquitos
infectantes
Tiempo de incubacin: 3 a 6 das
Periodo de transmisibilidad: hasta 5 das
Susceptibilidad: universal
Arbovirus - Patognesis
Despus de la picadura
del mosquito el virus se
replica localmente en los
ndulos linfticos
regionales y se diseminan
por va del sistema
linftico hacia la sangre y
otros tejidos (viremia
primaria).
La viremia
primaria puede
afectar rganos
blanco donde los
virus se replican e
ingresan a la
circulacin
sangunea
PRINCIPALES CARACTERSTICAS HISTOPATOLGICAS
DE LA F.A.
HGADO
Necrosis coagulativa en los hepatocitos.
Estn preservadas las clulas alrededor de las venas centrales y de los espacios
portales (necrosis de la zona intermedia).
Cuerpos de Councilman.
Acumulacin de microvesculas de grasa en el citoplasma.
Inclusiones nucleares eosinfilas (Cuerpos de Torres).
Depsitos de pigmento en las clulas de Kpffer (Cuerpos de Villela).
Inflamacin escasa o nula.
Conservacin casi completa de la armazn de reticulina, no hay fibrosis post-necrtica.
RIN
Tumefaccin turbia, alteracin grasa y necrosis del epitelio tubular. Cilindros hialinos y
granulosos en la luz tubular. Coloracin biliosa del epitelio tubular. Reaccin de Schiff
positiva en la membrana basal glomerular. No existe inflamacin; no hay fibrosis post
necrtica.
CORAZN
Tumefaccin turbia, degeneracin, infiltracin grasa, necrosis de fibras musculares del
nodo sinoauricular y del fascculo auriculoventricular.

CEREBRO
Hemorragias petequiales perivasculares, eritrodiapdesis, edema perivascular e
intersticial.


MANIFESTACIONES EXTRAHEPTICAS
DE DAO HEPTICO
HEMORRAGIA
Disminucin de la sntesis de factores de coagulacin Vit. K
dependientes
Coagulacin Intravascular Diseminada
HIPOGLICEMIA
Disminucin de la neoglucogenesis y de la glucogenolisis.
Reduccin de la depuracin de insulina (?)
HIPOTENSIN
Disminucin de la detoxificacin de sustancias vasoactivas, endotoxinas (?).
Disminucin del flujo sanguneo heptico, secuestro portal (?). Hemorragia.
ACIDOSIS
METABLICA
Hipotensin.
Deterioro del metabolismo de los carbohidratos.
Insuficiencia Renal Aguda.

INSUFICIENCIA
RENAL
Hipotensin, disminucin del flujo sanguneo renal efectivo.
ENCEFALOPATA
Alteraciones metabolicas.
Menoscabo de la destoxificacin de sustancias neuroactivas (?)
Disminucin del flujo sanguneo enceflico (?)
RUBEOLA
El virus de la rubola, clasificado
como un Rubivirus, es un miembro
de la familia Togaviridae.

Fue aislado por primera vez en
1962, por Parkman, en clulas de
rin de mono verde africano
(AGMK).

Clnicamente, produce un cuadro
exantemtico agudo en nios y
adultos, la mayor parte de las veces
inaparente.

Se transmite por contacto con
secreciones nasofarngeas,
sobretodo en la primera semana
tras la aparicin del exantema.

Cuando la enfermedad se adquiere
en el transcurso del embarazo,
principalmente en el primer
trimestre de la gestacin, puede
producir diversas malformaciones
congnitas, descritas por vez
primera en 1941 por Sir Norman
Gregg, un oftalmlogo australiano
que observ un aumento de casos
de catarata congnita tras una
epidemia de rubola.

El desarrollo de tcnicas diagnsticas se ha
dirigido, segn las diferentes
manifestaciones clnicas, hacia:
a) La determinacin de la inmunidad frente a la
rubola
b) El diagnstico de rubola postnatal,
c) El diagnstico de la rubola congnita

La Rubola es una enfermedad
infecciosa, altamente contagiosa,
causada por el virus del mismo
nombre y transmitida por va
area; su perodo de incubacin
es de 14 a 23 das y los primeros
sntomas son malestar general
acompaado de cefalea, fiebre
leve, a veces conjuntivitis y coriza,
posteriormente, se presenta
erupcin cutnea eritematosa
transitoria, inflamacin de
ganglios, dolor articular y, a veces
artritis. Cerca al 50% de los casos
son asintomticos.
DIAGNSTICO DIRECTO

Dado que la infeccin es, en ocasiones, subclnica o leve, el aislamiento del
virus es difcil.
Se realiza a partir de secreciones farngeas, orina, lquido amnitico y
placenta, en cultivo celular tipo Vero, RK-13 o AGMK, siendo sta la lnea
celular estndar y el virus produce efecto citoptico
La presencia del virus se detecta por destruccin completa de la monocapa
celular y la confirmacin se realiza por neutralizacin con anticuerpos
especficos o el fenmeno de interferencia con otros virus, como los
Echovirus.
El diagnstico definitivo se realiza, en estos casos, por inmunofluorescencia
directa (IFD).
La amplificacin mediante PCR, aplicada a la deteccin del ARN del virus se
realiza transcribiendo a ADNc, que posteriormente se amplifica, pero su
aplicacin se limita a laboratorios de referencia.
En resumen, dada la complejidad tanto del aislamiento en
cultivo como de los mtodos de PCR, el diagnstico de
eleccin, en la actualidad, es el serolgico.
El virus rubola tiene antgenos con capacidad hemaglutinante, fijadora de
complemento, agregante de plaquetas y precipitante.

Posee tres grandes protenas estructurales: las glucoprotenas E1 y E2,
asociadas con la envueltura, y la protena C de la nucleocpside.

Las proyecciones virales contienen, fundamentalmente, la glucoprotena
E1(58.000 Da), donde se localizan, al menos, seis eptopos lineales, de los
que cuatro son hemaglutininas, otro es neutralizante y del sexto an no se
conoce su funcin.

En la glucoprotena E2 (42.000-47.000 Da) se han encontrado, hasta el
momento, cuatro diferentes antgenos especficos que han permitido
diferenciar otras tantas cepas diferentes de virus con idntica hemaglutinina
E1.

La protena C (33.000 Da) tiene dos eptopos para las clulas B, y uno para
las T.
ANTGENOS PARA EL DIAGNSTICO INDIRECTO
Existe una gran variedad de mtodos en el mercado
que nos permiten escoger entre:
inhibicin de la hemaglutinacin,
hemaglutinacin pasiva,
hemlisis radial,
fijacin de complemento,
inmunofluorescencia indirecta (IFI),
aglutinacin con ltex (AL)
enzimoinmunoanlisis (EIA),
as como mtodos ms precisos y laboriosos que
implican la separacin de las diferentes
inmunoglobulinas.
MTODOS DE DIAGNSTICO SEROLGICO


La prueba detecta anticuerpos frente a la hemaglutinina viral E1, por
bloqueo de la capacidad del virus de aglutinar hemates de determinadas
especies. Los empleados con ms frecuencia son los hemates de paloma,
de pollito recin nacido o humanos, del grupo O.

Se considera una Unidad Hemaglutinante (UH) la mxima dilucin de
antgeno capaz de hemaglutinar una suspensin de hemates al 0,25%;
para la titulacin de los sueros se emplean cuatro UH.

Este tipo de anticuerpos comienzan a formarse en los primeros das del
contacto con el virus, se encuentran, por lo general, presentes cuando
aparece el exantema, alcanzando la concentracin mas elevada en la fase
de convalecencia, y permanecen de por vida.
Inhibicin de la hemaglutinacin (IH)

El ttulo de anticuerpos ser la mxima dilucin a la
que se inhibe totalmente la hemaglutinacin. Se
considera que existe inmunidad, un ttulo igual o
superior a 1/8, que equivale a 15 UI/ml.
A pesar de la amplia utilizacin de esta tcnica
durante aos, y de ser el mtodo de referencia, la
complejidad de su desarrollo y la necesidad de
personal experto ha hecho que, en los ltimos
tiempos, se haya ido abandonando en favor de
tcnicas ms sencillas y automatizadas

Fijacin de complemento
Es un mtodo laborioso y est estandarizado desde
1965; presenta poca aplicacin prctica en el
diagnstico de rubola, por detectar anticuerpos a
partir de los 20 das de comienzo del cuadro clnico.
Slo es til cuando la muestra se recoge en la fase de
convalecencia y la seroconversin ya se ha producido.
Respecto a la deteccin del estado inmunitario, es
una prueba cara y que necesita personal
especializado, por lo que se ha utilizado poco.
Tiene gran utilidad para el conocimiento del estado
inmunitario frente a la rubola de la poblacin; es rpida y
econmica.

Emplea eritrocitos estabilizados y posteriormente
sensibilizados con antgeno de rubola.

Los eritrocitos aglutinan en presencia de anticuerpos
especficos, en placas de microtitulacin de fondo en V.

Deben de colocarse en cada ensayo controles positivos y
negativos y un control de hemates no sensibilizados.

Hemaglutinacin pasiva
Hemlisis radial
Es un buen mtodo para medir el estado inmunitario de la poblacin.
Est estandarizado por Russell desde 1978. Se utilizan hemates frescos
de cordero que, tras sensibilizarlos con el antgeno E1, se mezclan a 43
C con complemento de cobaya y con agarosa al 0,8%, vertindose en
placas de Petri, que pueden ser conservadas a 4C.
Aglutinacin con ltex
Es una prueba rpida, que se utiliza sobretodo para la determinacin
del estado inmunitario. Se basa en la unin del antgeno a una partcula
de ltex que, al ponerse en contacto con los anticuerpos, aglutina de
forma visible

UTILIZACIN DE LOS MTODOS DE DIAGNSTICO

Las pruebas de diagnstico directo estn reservadas para centros de
referencia, en el laboratorio clnico y de forma prctica podremos escoger
la tcnica serolgica que ms se adecue a nuestras necesidades
diagnsticas.


Determinacin de la inmunidad frente a la rubola
Se aplica a las gestantes en las que no se conoce su estado inmunitario o a
personas vacunadas, para valorar la eficacia de la vacuna. En este caso,
deberemos contar con tcnicas sensibles que nos permitan medir
cantidades mnimas de anticuerpos totales, sin ser necesaria una
cuantificacin de los resultados.
Se suele recomendar, en esta situacin, la IH, hemaglutinacin pasiva,
hemlisis radial, aglutinacin con ltex, o las tcnicas de IFI o EIA.
Diagnstico de la rubola postnatal

En este supuesto es imprescindible un mtodo que nos permita diferenciar
entre IgG e IgM especfica, o bien una tcnica que detecte anticuerpos de
forma sensible y temprana, como la IH, IFI, EIA. Es muy til poder contar con
una buena seroteca, o con un estudio previo del paciente frente a rubola,
pues la existencia de una muestra anterior de suero nos ayudara en gran
manera a llegar a un diagnstico de forma rpida, ya que el procesamiento
de esta muestra antigua en paralelo con la actual, en el caso de ser positiva
para IgG, nos descarta la existencia de una infeccin primaria.
En el caso de no tener un anterior control deber tomarse otra muestra a los
5-7 das de la primera.
En ausencia de datos previos, un resultado positivo para IgG y negativo para
IgM, debe de comprobarse con la 2 muestra; si a los 7-10 das del cuadro
clnico no detectamos IgM especfica, se descarta la infeccin por rubola. Si
se evidencia la presencia de IgM en la primera determinacin, en ausencia
de datos previos, la segunda muestra nos detectar la seroconversin de IgG
y nos confirmar el diagnstico de infeccin por rubola. La ausencia de
anticuerpos de las clases IgG e IgM en las dos muestras, descarta la
infeccin.
Diagnstico de la rubola congnita
Esta situacin puede producirse antes o despus del
parto.
En el supuesto de haber detectado una
seroconversin a la rubola en el transcurso de la
gestacin, la necesidad de diagnosticar la infeccin
fetal ha llevado a la realizacin de pruebas como la
cordocentesis que, en el caso de resultar negativa, no
excluye la infeccin.
En estas circunstancias, parece indicada la
realizacin de un estudio de ARN del virus en lquido
amnitico o sangre fetal.
son microorganismos que podran considerarse como
intermedios entre bacterias y virus ya que comparten
caractersticas de ambos.
En comn con las bacterias que tienen enzimas y pared
celular, utilizan oxgeno y responden a los antibiticos.
Con los virus pueden vivir y multiplicarse dentro de las
clulas.
Estos organismos normalmente viven en insectos como
caros, garrapatas, pulgas y piojos.
Las rickettsias
La transmisin a los humanos se realiza a partir de las
picaduras de estos insectos. Las rickettsias pueden
sobrevivir en el interior de las clulas que revisten los
vasos sanguneos provocando en ocasiones la
inflamacin u obstruccin de pequeos vasos.
Diversas especies de rickettsias son causantes de
enfermedades en humanos.
En general no existe la transmisin persona a persona
de estos microorganismos sino que el contagio se
realiza por la picadura de los insectos que les sirven
de reservorio.
Tambin pueden transmitirse por va sangunea a
travs de pinchazos, transfusiones, etc.

Clasificacin de enfermedades infecciosas
transmitidas por Rickettsias
Pueden dar lugar a diversas enfermedades infecciosas que se
clasifican en cuatro grupos:
1. Fiebres tficas
Tifus exantemtico epidmico producido por Rickettsia
prowazeki
Enfermedad de Brill-Zinsser (forma recurrente de tifus
exantemtico)
Fiebres tficas debidas a la Rickettsia typhi (tifus murino)
Tifus de las malezas debida a Rickettsia tsutsugamushi
(Rickettsia orientalis)
Fiebres tficas sin especificar

2. Fiebre de garrapatas
Fiebre de garrapatas producida por Rickettsia rickettsii
Fiebre de garrapatas producida por Rickettsia conori
Fiebre de garrapatas producida por Rickettsia sibirica
Fiebre de garrapatas producida por Rickettsia australis
3.Otros tipos de fiebre de garrapatas
Rickettsiosis por picadura de garrapata sin especificar

Fiebre Q
4. Otras Rickettsiosis Fiebre de las trincheras o
fiebre quintana
Rickettsiosis por Rickettsia akari (rickettsialpox)
Otros tipos de rickettsiosis especificadas
Rickettsiosis sin especificar

Diagnstico
Como siempre se establece un diagnstico de
sospecha por el cuadro clnico y la historia
epidemiolgica compatible. Ej: picadura de insecto
El diagnstico de confirmacin debe realizarse
identificando la rickettsia al microscopio, para ello se
utilizan cultivos especiales de muestras de sangre o
tejido o mediante serologa con la identificacin de
anticuerpos contra el organismo en una muestra de
sangre.
leptospirosis
La leptospirosis es la zoonosis ms
ampliamente distribuida en el
mundo, aunque la mayora de casos
ocurre en pases tropicales.
La produce la espiroqueta
Leptospira interrogans.
Las ratas constituyen el principal
reservorio.
La mayora de pacientes presenta
una forma leve de la infeccin,
consistente en un cuadro febril
autolimitado y sin ictericia.
Sin embargo alrededor del 10 %
sufre cuadros graves, con ictericia
intensa.

Tpicamente presenta dos fases:
la aguda o leptospirmica
la inmune o leptospirica
sin embargo en muchos casos las
dos fases son indistinguibles, y
en los casos leves no siempre se
presenta la segunda fase.

El diagnstico se realiza
mediante la serologa o mediante
el cultivo del microorganismo.

Leptospirosis: Diagnstico

La historia de exposicin a la
enfermedad es un
importante dato a tener en
cuenta cuando se plantea el
posible diagnstico de
leptospirosis.
El diagnstico de esta
infeccin se realiza mediante
la serologa o mediante el
cultivo del microorganismo.
La tcnica de serologa ms
empleada es la de la
aglutinacin microscpica,
que slo se realiza en centros
de referencia.

Si la clnica es muy sugestiva,
un nico ttulo de anticuerpos
superior a 1:400 es
prcticamente diagnstico de
la enfermedad.
Sin embargo siempre es
preferible, para establecer el
diagnstico, comprobar un
aumento del ttulo de
anticuerpos de cuatro o ms
veces, entre la muestra
obtenida en la fase aguda y la
de la fase de convalecencia.

Debe tenerse en cuenta que generalmente los anticuerpos no
aparecen hasta la segunda semana de la enfermedad, y que el
tratamiento antibitico precoz puede determinar una menor
respuesta de anticuerpos.
La aglutinacin microscpica en muchos casos permite
tambin determinar el serogrupo y el serotipo de L.
interrogans.
Otras modalidades de serologa ms recientemente
desarrolladas son la hemaglutinacin indirecta, la de ELISA, la
aglutinacin microcapsular y la aglutinacin con ltex11.
Con estas tcnicas se obtiene el resultado ms rpidamente
que con la aglutinacin
microscpica.
Es importante tener en cuenta que la serologa de
la leptospirosis es positiva en un alto porcentaje
de las personas que han estado expuestas a la
infeccin, pero que no han desarrollado nunca las
manifestaciones clnicas de la enfermedad.
L. interrogans puede aislarse en la sangre o en el
LCR durante la primera semana de la enfermedad,
y en la orina a partir de la segunda semana.
En la orina, en algunos casos, puede seguir
presente durante varias semanas, meses, e incluso
aos.
Tambin puede aislarse en otros tejidos o fluidos
corporales.
Habitualmente se emplean medios de cultivo
especializados, como el de Ellinghausen-McCullough-
Johnson-Harris, que slo suelen estar disponibles en
centros de referencia.
El crecimiento es lento en muchos casos, y por ello el
cultivo debe mantenerse durante un mes, antes de
considerarlo negativo.
El cultivo es el mtodo ideal de diagnstico, ya que es
el ms fiable y el que permite conocer con certeza el
serogrupo y el serotipo del germen. Otros mtodos
diagnsticos, como la inoculacin al cobaya o el
examen microscpico de campo oscuro, son poco
fiables y no se emplean habitualmente.


Otras medidas adecuadas
son la desratizacin y la vacunacin de los animales, aunque
esta ltima slo posee una eficacia parcial.

En diversas regiones del mundo se ha utilizado tambin la
vacunacin en personas, pero no se dispone por ahora de
suficientes datos sobre su eficacia y sobre la relevancia de sus
efectos secundarios.

En casos de exposiciones transitorias puede ser razonable el
empleo de quimioprofilaxis
Importante

Una lata de gaseosa puede estar infectada por la
orina seca de rata, La orina de rata contiene
sustancias mortales y txicas no conocidas por
muchsimas personas.


Peste

Es una infeccin bacteriana grave
y potencialmente mortal.
Est causada por una bacteria
llamada Yersinia pestis.
La enfermedad se adquiere por
mordedura de una pulga
infectada, por contacto con tejido
de animales infectados o con
secreciones respiratorias de una
persona enferma.
El contagio entre personas solo es
posible en los casos de afectacin
respiratoria.

Las ms frecuentes son las dos primeras. Las formas neumnicas y
neurolgicas normalmente son complicaciones de la septicmica.
La peste humana puede ser muy grave, con una tasa de letalidad del 30% al
60% si no se trata.
Las cuatro formas de peste son:
Peste bubnica que es una
infeccin de los ganglios
linfticos.
Peste septicmica que es una
infeccin de la sangre.
Peste neumnica que es una
infeccin de los pulmones.
Afectacin neurolgica:
meningitis por yersinia pestis
La peste bubnica es la forma ms comn y se debe a la picadura de pulgas
infectadas. El bacilo inoculado a travs de la piel por la picadura se
desplaza por el sistema linftico hasta el ganglio ms cercano, donde se
multiplica rpidamente, produciendo su inflamacin. El ganglio linftico
inflamado, denominado bubn, es muy doloroso y en la fase avanzada
de la infeccin puede abrirse a la piel y supurar.

La forma septicmica puede producirse cuando la infeccin se
disemina directamente a travs de la sangre, sin que existan bubones
evidentes, o ms frecuentemente en las fases avanzadas de la peste
bubnica, en las que tambin hay Y. pestis en la sangre.
La forma neumnica es la ms virulenta, pero tambin la menos
frecuente, y suele deberse a la diseminacin secundaria de una
infeccin bubnica avanzada. La peste neumnica primaria suele
deberse a la inhalacin de aerosoles de gotculas infectivas y
puede transmitirse de persona a persona sin la intervencin de
pulgas ni otros animales. En ausencia de tratamiento, la peste
neumnica tiene una tasa de letalidad muy elevada.
La confirmacin ptima consiste en el aislamiento e identificacin
de Yersina Pestis mediante cultivo de muestras del paciente.
Dependiendo de la forma de presentacin de la enfermedad, las
muestras ms apropiadas para las pruebas rpidas y el cultivo son
el aspirado de los bubones, la sangre o el esputo.
La infeccin tambin se puede confirmar examinando muestras de
suero obtenidas en las fases tempranas y tardas de la infeccin,
mediante la deteccin de anticuerpos contra la bacteria.
Hay tiras reactivas cuya utilizacin sobre el terreno ha sido validada
para detectar rpidamente la presencia de antgenos de Yersina
Pestis en los pacientes.
Ante la sospecha de peste se deben recoger muestras para enviar al
laboratorio. Es una enfermedad de declaracin obligatoria.
Pruebas de laboratorio

Vacunacin
Anteriormente se utilizaron mucho las vacunas contra la peste, pero no se
ha demostrado que constituyan una medida eficaz para prevenir la
enfermedad.
No se recomienda la vacunacin como forma de obtener proteccin
inmediata ante un brote.
La vacunacin slo se recomienda como medida profilctica para grupos
de alto riesgo, como el personal de laboratorio expuesto constantemente
al riesgo de contaminacin.
Vigilancia y control
Se deben realizar investigaciones para identificar las especies de pulgas y
otros animales implicados en el ciclo enzotico de la peste en la regin, y
elaborar un programa de gestin ambiental para reducir el riesgo de
diseminacin.

El establecimiento de una vigilancia activa a largo plazo de los focos
zoonticos y la respuesta rpida destinada a reducir la exposicin durante
los brotes epizoticos son medidas que han tenido xito en la lucha contra
la peste humana.
PALUDISMO
El paludismo o malaria es una enfermedad
tropical grave y frecuente que presenta una
prevalencia mundial que oscila entre 300 y
500 millones de casos clnicos cada ao y una
mortalidad entre 1,5 y 2,7 millones/ao. El
55% de la poblacin mundial habita en reas
de riesgo para la infeccin malrica
Diagnstico
Se basa en la sospecha clnica de un sndrome febril con antecedentes de viaje
al trpico confirmado por la presencia de parsitos en una extensin y gota
gruesa sanguneas.

La gota gruesa puede ofrecer rpidamente la positividad o negatividad del
paludismo y la extensin o frotis sanguneo puede ofrecer en los casos positivos
la especie infectante (tinciones utilizadas: Giemsa y Wright).

Estos mtodos de diagnstico son muy utilizados pero presentan el
inconveniente de que, en el caso de un paciente con baja densidad parasitaria,
sern necesarias diversas tomas al da durante varios das para poder llegar al
diagnstico.

Es importante cuantificar la parasitemia (tanto por ciento de hemates
parasitados) para poder seguir la evolucin del caso y, particularmente, la
respuesta teraputica.
Actualmente, en la prctica diaria, debemos afrontar un
buen nmero de casos que llegan parcialmente
tratados o que han realizado profilaxis incompletas o
anrquicas, por lo que, a menudo (an manteniendo
alta la sospecha diagnstica), hay que esperar das o
semanas a que se positivicen los anlisis de rutina.
En estos pacientes han mostrado utilidad los exmenes
serolgicos, de hecho, se han obtenido ya excelentes
resultados con un anticuerpo monoclonal utilizado en
un mtodo enzimtico de inmunoanlisis capaz de
detectar parasitemias inferiores al 0,001%.
Pero an as, los mtodos serolgicos que
detectan una repuesta inmune humoral no
pueden sustituir a la microscopia en el
diagnstico.

Hasta ahora se han utilizado tres mtodos:
hemoaglutinacin indirecta,
inmunofluorescencia indirecta y Elisa.
Recientemente ha surgido una nueva tcnica diagnstica de
paludismo que permite llevar a cabo un diagnstico rpido de
una forma sencilla y simultnea al estudio de la extensin
sangunea y gota gruesa en pacientes con sospecha clnica de
paludismo: es la prueba inmunocromatogrfica rpida en in
vitro para deteccin cualitativa en sangre del antgeno circulante
del Plasmodium falciparum y de un antgeno comn a las cuatro
especies de paludismo: Plasmodium falciparum, Plasmodium
malariae, Plasmodium vivax y Plasmodium ovale .

La prueba utiliza dos anticuerpos inmovilizados en la tira reactiva
de prueba: uno, especfico para el antgeno del P. f. HRPII) de
protena II rica en histidina, y otro, especfico para un antgeno
comn a P. f., P. m., P. v. y P. o.
Tcnicas moleculares

Se utiliza una tcnica de PCR mltiple que permite la deteccin del DNA genmico de
las cuatro especies parasitarias.
La amplificacin por PCR permite incluso la deteccin de 3-4 parsitos/m l
(parasitemias de 0,0005 a 0,0015%), as como la determinacin de infecciones mixtas.
Al ser una tcnica potencialmente cuantitativa, permite controlar la eficacia del
tratamiento, prediciendo las resistencias a los antipaldicos.


Serologa

La deteccin de anticuerpos anti P. falciparum en el suero de los pacientes tiene una
baja sensibilidad para el diagnstico de malaria.
Se utiliza en determinados casos en los que la microscopa es negativa por la toma de
medicacin, o en los bancos de sangre.
La tcnica habitual es una inmunofluorescencia (Falciparum-spot IF, bioMrieux). Ms
recientemente se ha introducido un enzimoinmunoensayo (Malaria IgG Celisa, BMD).
CHAGAS
DIAGNSTICO

En Guatemala y Bolivia, MSF toma muestras
para detectar la presencia de anticuerpos del
Chagas en nios de edades comprendidas entre
los seis meses y los 14 aos.
Mediante una lanceta, se extraen muestras de
sangre de un dedo y a continuacin se guardan
en un tubo capilar.
Una de las muestras se deposita en papel de
filtro secante para realizar pruebas de
laboratorio, mientras que la otra se deposita en
un kit de prueba rpida por cromatografa. Estos
kits ofrecen resultados positivos o negativos de
la presencia de anticuerpos del Chagas en
menos de quince minutos.
Si la muestra de la prueba rpida da positivo, se
toma una nueva muestra sangunea que se
somete despus a una prueba de laboratorio
ELISA completa, que determina el grado de
infeccin por Chagas
Diagnstico

El diagnstico de la enfermedad de Chagas se
puede hacer a travs de la observacin del parsito
en un frotis de sangre bajo el microscopio.

Para la visualizacin de los parsitos, se hace un
frotis de sangre delgado y otro grueso y se les tie.

Sin embargo, el frotis de sangre funciona bien solo
en la fase aguda de la infeccin, cuando se ven los
parsitos circulando en la sangre.

El diagnstico de la enfermedad de Chagas crnica
se hace despus de tener en cuenta el cuadro
clnico del paciente y la probabilidad de que est
infectado, por haber vivido en un pas donde la
enfermedad es endmica.

Trypansoma cruzi en
un frotis delgado de
sangre.
BARTONELLA
SINNIMOS: Bartonelosis
humana, fiebre de La
Oroya, enfermedad de
Carrin, verruga peruana,
anemia grave de Carrin

CARACTERSTICAS:
Bacilos Gram negativos;
mviles con flagelos
polares.
PROCEDIMIENTOS DE OBTENCIN DE MUESTRAS
OBTENCIN DE MUESTRAS
La efectividad y xito del diagnstico bacteriolgico
depende en gran medida de la obtencin y el
transporte oportuno de las muestras al laboratorio,
por esta razn el equipo de salud involucrado debe
entender la naturaleza crtica de mantener la calidad
de las muestras durante todo el proceso.
Objetivo
Describir los procedimientos para la obtencin de
muestras de sangre para el diagnstico directo
mediante coloracin Giemsa, aislamiento bacteriano
y pruebas moleculares.
Tipos de muestra
a) Para el diagnstico directo:
Frotis sanguneo de sangre perifrica en lminas
portaobjetos.
b) Para aislamiento - cultivo:
Sangre total con anticoagulante en tubos al vaco con
citrato de sodio, heparina o EDTA.
Sangre total inoculada directamente al medio de
cultivo bifsico (inmediatamente despus de la
extraccin de la muestra sangunea).
Biopsias de las lesiones, colocadas en recipiente
estril.
c) Para diagnstico histopatolgico:
Biopsias de las lesiones en formol al 10%
CONDICIONES GENERALES
Todas las muestras de sangre deben ser
consideradas como potencialmente patgenas,
por eso deben ser manipuladas tomando las
medidas de proteccin y tratadas como
altamente infecciosas, para evitar posibles
contagios de enfermedades como hepatitis viral
B, C, VIH, etc.
Se debe usar guantes durante todo el
procedimiento de obtencin de muestras.
COLORACIN DEL FROTIS
SANGUNEO CON GIEMSA
La coloracin de Giemsa es una
modificacin de la coloracin de
Romanowsky, est disponible en
cualquier laboratorio y nos permite
detectar los glbulos rojos
infectados por Bartonella
bacilliformis en sus formas
bacilares, cocobacilares o cocoides.
La muestra debe ser fijada con
metanol antes del proceso de
tincin.
Leishmania
Es una enfermedad
parasitaria producida
por un protozoo
llamado Leishmania
infantum, tambin por
L. tropica, L.
aetiopica, L. mayor y
L. donovani.
Afecta a varias especies animales
como perros, ratas, zorros, lobos y en
raras ocasiones al hombre.

Se contagia mediante la picadura de un
mosquito del gnero Phlebotomus
(vulgarmente llamados beatillas), que
una vez que ha picado a un animal
enfermo transporta en su interior las
leishmanias y la transmite a otro animal
sano cuando le pica.

No se transmite por contacto directo,
secreciones (saliva, etc), heridas, orina
ni heces
DIAGNOSTICO
El diagnstico definitivo de la Leishmaniasis
requieren la visualizacin del parsito.
Las muestras del sitio infectado se tien con
Giemsa o tincin de Romanowsky y los
amastigotes se examinan al microscopio,
observndose unas clulas ovaladas, de 2 a 4
mm de dimetro con un ncleo y un kinetoplasto
(este es una estructura mitocondrial
especializada que contiene un DNA especfico).

Otras posibilidades de diagnstico, consisten en el
cultivo del protozoo o el uso de la PCR (Polymerase
Chain Reaction) para amplificar e identificar el ADN
del parsito.
Entre los mtodos indirectos de diagnstico se
encuentran mtodos serolgicos tradicionales
(ensayos de anticuerpos mediante tcnicas de
inmunoflorescencia) que sin embargo no distinguen
entre enfermedad pasada o presente y nuevas
tcnicas en va de desarrollo como la produccin de
antgenos sintticos especficos
LA BACILOSCOPIA Y EL CULTIVO EN EL DIAGNSTICO DE LA
TUBERCULOSIS
La tuberculosis es una enfermedad que contina siendo un
problema serio de salud pblica para el mundo y que causa
millones de casos nuevos cada ao, a pesar de que se puede
prevenir y curar.

Se estima que una tercera parte de la poblacin mundial se
encuentra infectado por Mycobacterium tuberculosis.
Aproximadamente unos nueve millones de nuevos casos de
Tuberculosis y cerca de tres millones de personas murieron
de la enfermedad en 1995.

Es una enfermedad que afecta a grupos de edad
econmica mente activos (15-50 aos)
principalmente en los pases en desarrollo, las
defunciones por TB representan el 25% del total de
muertes evitables.
Se han identificado factores que influyen en la
morbilidad por Tuberculosis en el mundo como son;
la pobreza, negligencia en el diagnstico as como en
el tratamiento y la pandemia de VIH/SIDA
La baciloscopia, es la tcnica fundamental en
toda investigacin bacteriolgica de la
tuberculosis, en la deteccin de casos y
control de tratamiento.
Con un costo bajo y de rpida ejecucin, la
baciloscopia es una tcnica que permite
identificar al 70-80% de los casos pulmonares
positivos
El diagnstico de la tuberculosis extrapulmonar
depende de la probabilidad de encontrar los bacilos en
los sitios de infeccin, los cuales se encuentran en
cantidades muy pequeas, excepto si hay caesificacin
o formacin de cavidades, las biopsias del tejido pueden
rendir resultados positivos en comparacin a los fluidos
en donde el nmero de los bacilos se ve disminuido por
la dilucin.

El diagnstico de la tuberculosis extrapulmonar es difcil
a menudo por su localizacin en sitios del organismo de
acceso complicado, adems el carcter serio de esta
forma de tuberculosis se debe frecuentemente a su
diagnstico tardo
La tcnica de tincin utilizada es la de Ziehl-
Neelsen tradicional.
Cuando se examina muestras de esputo u otras
lesiones en donde estas bacterias se encuentran,
al microscopio, previa coloracin de los
extendidos, su caracterstica principal es su cido-
alcohol resistencia (AAR) ya que son difciles de
teir con fucsina pero una vez teidos resisten a
la decoloracin con alcohol-cido
La observacin debe establecer en primer trmino si
se encuentran BAAR en el extendido y si los hay, el
nmero aproximado de ellos por campo microscpico.
Cada campo microscpico debe observarse en
superficie y profundidad, para esto se utiliz
constantemente el tornillo micromtrico.
Los bacilos aparecen como bastoncillos delgados de
color rojo y con grnulos en su interior, aislados, en
pares o agrupados sobre un fondo azul claro de la
tincin de contraste.
La contabilidad debe seguir una pauta uniforme de
observacin leyendo de izquierda a derecha del
extendido un mnimo de 100 campos tiles
distribuidos en el total del extendido.
El criterio a seguir en la baciloscopia es:
El nmero de campos vara segn la cantidad de
bacilos encontrados:
1. Si no se encuentran bacilos debe examinarse por lo
menos 100 campos tiles.
2. Si se encuentran de 1 a 10 bacilos por campo es
suficiente observar 50 campos.
3. Si se encuentran ms de 10 bacilos por campo es
suficiente observar 20 campos.
Terminada la observacin de la baciloscopia es
requisito que se limpie con algodn el objetivo de
inmersin para evitar que se transporten fragmentos
de una baciloscopia a otra.
INFORME DE RESULTADOS.

Negativo: no se observan BAAR en 100 campos observados.

Positivo +: se observan menos de un bacilo por campo en
promedio en 100 campos observados.

Positivo ++: se observan de 1 a 10 bacilos por campo en
promedio en 50 campos observados.

Positivo +++: Se observan ms de 10 bacilos por campo en
promedio en 20 campos observados.
Es necesario encontrar como mnimo 4 BAAR en
la Bac para reportarlo positiva, si se encuentran
de 1 a 3 bacilos esta es la conducta a seguir:
1. Ampliar la lectura a 200 campos.
2. Si lo anterior no modifica la lectura repetir la
Bac.
3. Si se encuentra la misma cantidad de bacilos
(1 a 3) se reporta como negativo poniendo una
nota en el diario de trabajo sobre lo observado.
Porqu se presenta retraso en el diagnstico
El diagnstico clnico de la tuberculosis es difcil de
establecer. Incluso muchos autores la han
catalogado como la gran simuladora, ya que
muchas veces se presenta con cuadros clnico
radiolgicos completamente atpicos e inusuales,
que desconciertan al mdico en cuanto al
diagnstico, dichos hallazgos clnicos y radiolgicos
que se observan en los pacientes tuberculosos no
aportan siempre datos que permitan hacer un
diagnstico.
El diagnstico microbiolgico se hace a travs de baciloscopia
y el cultivo.
La baciloscopia, tiene por objeto la visualizacin del bacilo
por mediante examen directo de la expectoracin mtodo
especfico pero poco sensible, ya que solo cuando el nmero
de bacilos alcanzan ms de 10.000 por ml de muestra se
puede esperar que las muestras sean consistentemente
positivas, y no es til es TB extrapulmonar.

El cultivo para TB, aunque presenta mejor sensibilidad que la
baciloscopia, es un mtodo lento y demorado, los resultados
pueden tardarse hasta tres meses, y solo puede arrojar
resultados positivos cuando hay presencia mnimo de 10 a
100 bacilos viables
Diagnstico molecular

En la bsqueda de alternativas que permitan detectar en
tiempo corto y de manera segura la TB, se han venido
implementando el uso de tcnicas de amplificacin del DNA
de micobacterias, es decir lo que se conoce como diagnstico
molecular, que presenta alta sensibilidad y especificidad
diagnstica:

Tericamente es posible detectar desde 1 bacilo

Deteccin en muestras con baja carga bacteriana

Deteccin del bacilo en estadios tempranos de la infeccin


Diagnostico de TB en pocas horas (7 a 8 horas)

Aumento de sensibilidad y rapidez en la deteccin en
muestras extrapulmonares, facilitando un
tratamiento precoz.

Permite hacer una deteccin de TB en nios, que por
mtodos tradicionales es muy difcil

Evitar tratamientos empricos donde los mtodos
tradicionales no son muy efectivos (TB renal,
intestinal)

Siendo muy til para el diagnstico
rpido de muestras respiratorias
negativas, en casos difciles
(meningitis tuberculosa,
tuberculosis diseminada en
pacientes HIV, en nios infectados
donde la cantidad de bacilos no es
muy alta )y evita procedimientos
invasivos al paciente.
El diagnstico y estudio molecular
de la TB, aunque un poco ms
costoso que los mtodos
tradicionales viene
implementndose lentamente en
nuestros pases en desarrollo,
debido a las grandes ventajas que
presenta, es una cuestin de
costo beneficio.