En busca del Gene.

Breve
historia de la Biologa Molecular

M.C. Christian Neyoy Siari
De acuerdo con Francis Crick (Freeland,
J.H., 1979), es un trmino ambiguo que se
emplea en dos diferentes formas: la primera
en un sentido muy general, que es posible
aplicar a casi cualquier cosa, como puede ser
el entender algn problema biolgico a nivel
atmico o molecular. La segunda forma es
ms clsica, aunque es ms estrecha y se
refiere a la molculas biolgicas de gran
peso molecular tales como los cidos
nucleicos y las protenas. En un sentido
biolgico esto significa genes y su
"replicacin" y "expresin", o sea genes y sus
productos gnicos. En pocas palabras, un
tema de la biologa molecular del primer tipo
es el fenmeno de la contraccin muscular,
que comprende las estructuras moleculares y
un ejemplo del segundo tipo es la replicacin
del cido nucleico y la sntesis de protenas.

Otra observacin importante que hizo Crick,
dentro de las muchas que ofreci a la
biologa molecular, es que la simplicidad y la
universalidad de los mecanismos bsicos
que operan en biologa han permitido el
avance espectacular de la biologa molecular,
sobre todo en el sentido clsico del trmino.
Francis Crick
(1916-2004)
Definiciones de Biologa Molecular
Definiciones de Biologa Molecular
Biologa Molecular
funcional
Biologa Molecular
estructural
Qu es un gene?
Gregor Mendel en sus experimentos propuso la
idea original del gen, aunque l no los denomin
genes, sino factores, y vendran a ser los
responsables de la transmisin de los caracteres
de una generacin a la siguiente (lo que ahora
llamamos genotipo). El gen mendeliano es una
unidad de funcin, estructura, transmisin,
mutacin y evolucin que se distribuye ordenada y
linealmente en los cromosomas.
Qu es un gene?
La palabra gen fue acuada en 1909 por el botnico
dans Wilhelm Ludwig Johannsen a partir de una
palabra griega que significa "generar", refirindose a la
unidad fsica y funcional de la herencia biolgica.
Qu es un gene?
Hacia 1950, se impuso el concepto de gen como la cadena de ADN que dirige la sntesis de una
protena. ste es un concepto que proporciona una naturaleza molecular o estructural al gen. El gen
codifica protenas y debe tener una estructura definida por el orden lineal de sus tripletes o codones.
Qu es un gene?
Ms tarde surge el concepto de gen como lo que actualmente se llama un cistrn: la cadena de ADN
capaz de dirigir la sntesis de un ARNm que codifica para un polipptido (Dogma central de la biologa
molecular). Este concepto surge al comprobar que la mayora de las protenas estn formadas por ms
de una cadena polipeptdica y que cada una de ellas est codificada por un gen diferente.
Qu es un gene?
Actualmente se sabe que algunos genes codifican ms de un polipptido y que una protena puede ser
codificada por el conjunto de diferentes genes. La existencia de genes solapantes y el procesamiento
alternativo rebaten la hiptesis de un gen -> un polipptido.

Ms bien debe proponerse la relacin inversa, un polipptido -> un gen. Adems existen algunos genes
que no codifican protenas sino ARN con funcin propia (ARN transferentes y ARN ribosmicos, por
ejemplo) y que no se traducen, por lo que no es necesaria la traduccin para que un gen tenga una
funcin determinada. El gen es, pues, la unidad mnima de funcin gentica, que puede heredarse.
Por siglos, los seres humanos desconocieron los mecanismos por los cuales se heredan ciertas
caractersticas de una generacin a la prxima. Fue hasta 1865, cuando el monje austraco Gregor
Mendel, publico en una desconocida revista de su pas, los resultados de sus aos de investigacin con el
chcharo (Pisum sativum L.), con respecto a la herencia de caracteres dominantes y recesivos.
Las leyes de Mendel (1865)
Gregor Johann Mendel
(1822-1884)
En este pequeo jardn, adyacente al monasterio de Santo Toms, Gregor Mendel desarrollo
ms de 33500 plantas de chcharo entre los aos 1856 y 1863, incluyendo ms de 6400 plantas
que crecieron en un solo ao. Recibi la ayuda de dos monjes en sus experimentos. En el
monasterio existe un museo a la memoria de Mendel (llamado Mendelianum).
Hasta mediados del siglo XX no se supo con certeza en qu molculas residan los caracteres de la
herencia que Mendel haba identificado. A nivel celular ya se haba propuesto al ncleo como guardin de
la herencia (descubierto por Robert Brown en 1820). En 1869 Friedrich Miescher descubri los cidos
nucleicos en los glbulos blancos y en el esperma del salmn, sustancia a la que llam nuclena.
Miescher y la nuclena (1869)
Johan Friedrich Miescher
(1844-1895)
Laboratorio en la Universidad Tubingen, en donde Miescher hizo
el descubrimiento de la nuclena y un vial con muestras de la
nuclena.
En 1910, Thomas Hunt Morgan
estableci la relacin de los
genes con los cromosomas,
gracias a sus estudios con la
mosca de la fruta (Drosophila
melanogaster).
Thomas Hunt Morgan
(1866-1945)
Drosophila melanogaster o
mosca de la fruta
Los genes estn en los cromosomas (1910)
Experimento de Frederick Griffith
(1928)
Cmo se descubri que el ADN era la molcula encargada de guardar la
informacin gentica?
Frederick Griffith
(1879-1941)
Experimento Edward L. Tatum y
George W. Beadle (1941)
Edward L. Tatum
(1909-1975)
George W. Beadle
(1903-1989)
Erwin Schrdinger y sus contribuciones a la biologa molecular
Erwin Schrdinger
(1887-1961)
En 1944 se publica el libro Qu es la vida?, basado en una serie de
conferencias dictadas por el fsico austraco Erwin Schrdinger en el Trinity
College, de Dubln, Irlanda.

En su libro, Schrndinger pregunta: Cmo pueden los hechos, que toman
lugar dentro del mbito espacial y en el tiempo de un organismo vivo, ser
explicados por la fsica y la qumica? Contestando despus l, de forma
resumida, como una respuesta preliminar: La obvia incapacidad de la fsica y
de la qumica de ahora para explicar dichos eventos, no es razn para dudar
de que stos pueden ser explicados por estas ciencias.
Arco de entrada al Trinity College
(Dubln, Irlanda)
Estas fueron las preguntas que Schrdinger propuso en su libro:

1.Cul es la estructura fsica de las molculas que se duplican cuando se dividen los cromosomas?

2. Cul es el proceso de duplicacin que debe comprenderse?

3. Cmo estas molculas retienen su individualidad de generacin en generacin?

4. Cmo tienen xito para controlar el metabolismo de las clulas?

5. Cmo crean la organizacin que es visible en la estructura y funcin de los organismos superiores?
Schrdinger no contest estas preguntas, pero al plantearlas puso a la Biologa a buscar repuestas a estas
cuestiones, conducindola al nacimiento de la biologa molecular y descubrimientos tales como:

a) El descubrimiento de la doble hlice y la clave en tradas (cdigo gentico).

b) El anlisis preciso y la sntesis completa de los genes.

c) La medicin cuantitativa de la divergencia evolutiva de las especies.
El grupo de los fagos (dcada de 1940)
Max Delbrck
(1906-1981)
Salvador Edward Luria
(1912-1991)
En la dcada de 1940, Max Delbrck, Alfred Hershey
y Salvador Luria, forman el grupo de los fagos, dentro
del Laboratorio Cold Spring Harbor, en Nueva York,
logrando desentraar los mecanismos de replicacin
de los bacterifagos o fagos (virus que infectan
bacterias) y su estructura gentica. Los tres
recibieron el Premio Nobel de Medicina o Fisiologa
en 1969.
Laboratorio Cold Spring Harbor, en Nueva York
Alfred Day Hershey
(1908-1997)
Bacterifago
Estructura y micrografas de un bacterifago
El fago T4 de enterobacteria es un fago que infecta bacterias E. coli.
Su ADN mide 169-170 kb.
El fago T4 tiene algunas caractersticas nicas como:
Intrones al estilo eucariota.
Alta velocidad de copia de ADN con slo un error cada 300 copias.
Mecanismos especiales de reparacin.
Su ciclo vital (desde que entra en la bacteria hasta su destruccin) dura
cerca de 30 minutos (a 37 C) y consta de:
Adsorcin y penetracin (se inicia inmediatamente).
Secuestro de la expresin gnica del husped (se inicia inmediatamente).
Sntesis de enzimas (se inicia al cabo de 5 minutos).
Replicacin del ADN (se inicia al cabo de 10 minutos).
Formacin del virus (se inicia al cabo de 12 minutos).
Experimento de Avery, McLeod y
McCarty (1944)
Oswald T. Avery
(1877-1955)
Colin M. McLeod
(1909-1972)
Maclyn McCarty
(1911-2005)
Linus Pauling
(1901-1994)
Hlice alfa de las protenas
Linus Pauling y la hlice alfa (1951)
En 1951 Pauling y sus colegas propusieron la estructura de doble hlice y la hoja
beta para explicar la estructura secundaria de las protenas, con lo cual pudieron
describir la estructura de la hemoglobina, problema al que Pauling dedico varios
aos.

En base a esta estructura, Pauling propuso una estructura de helicoidal, adems
de sugerir una propiedad neutra y no cida, como se haba ido observando en
este cido nucleico. Al haber descrito la hlice alfa antes que los cientficos del
laboratorio Cavendish, su director, Sir Lawrence Bragg, proporciono a Watson y
Crick, las fotos y material sin publicar, sin la autorizacin de Maurice Wilkins y
Rosalind Franklin del Kings College. A partir del material proporcionado, en 1953
describieron correctamente la estructura del ADN, ganando diez aos despus el
Premio Nobel de medicina.
Experimento de Hershey y Chase (1952)
Martha Chase (1927-2003) y Alfred Hershey
Rosalind Franklin
(1920-1958)
Fotografa 51
La doble hlice (1953)
Maurice Wilkins
(1916-2004)
James D. Watson (1928) y Francis Crick (1916-2004) ante un modelo de
lmina de la estructura del ADN
La doble hlice (1953)
Sntesis In vitro de ARN y ADN (1955-1960)
En 1955 Severo Ochoa public
en Journal of the American
Chemical Society con la
bioqumica francorrusa
Marianne Grunberg-Manago, el
aislamiento de una enzima del
colibacilo que cataliza la
sntesis de ARN, el
intermediario entre el ADN y
las protenas. Los
descubridores llamaron
polinucletido-fosforilasa
a la enzima, conocida luego
como PNPasa, tratndose de
una polirribonucletido
nucleotidil-transferasa. El
descubrimiento de la
polinucletido fosforilasa dio
lugar a la preparacin de
polinucletidos sintticos de
distinta composicin de bases
con los que el grupo de Severo
Ochoa, en paralelo con el
grupo de Marshall Nirenberg,
llegaron al desciframiento de la
clave gentica.
Severo Ochoa
(1905-1993)
Sntesis In vitro de ARN y ADN (1955-1960)
En 1958, Arthur Kornberg, a
partir de 60 mg de Escherichia
coli, logr obtener miligramos
de una enzima que l
denomin ADN polimerasa;
sta era capaz de sintetizar
una nueva cadena de ADN a
partir de una cadena existente
y empleando nucletidos
trifosfato. Posteriormente, se
demostr que la nueva
molcula sintetizada en esas
condiciones era
biolgicamente activa, es decir,
conservaba en su totalidad la
informacin gentica. La
enzima ADN polimerasa
pareca ser la responsable de
la replicacin del ADN que
aos atrs haba postulado
James Watson y Francis Crick.
Arthur Kornberg
(1918-2007)
Replicacin del ADN (1957)
Matthew Meselson
(1930)
El experimento de Meselson y Stahl (1957) fue realizado para determinar
que el modo de replicacin del DNA era semiconservativo.
Franklin Stahl
(1929)
El modelo del Opern (1960)
El primer opern descrito fue el opern de la lactosa en Escherichia coli por F. Jacob, D. Perrin, C.
Snchez y J. Monod, publicado en la revista "Comptes rendus hebdomadaires des sances de l'Acadmie
des sciences" en 1960. En parte gracias a estos trabajos sobre regulacin gnica, Jacob y Monod fueron
galardonados con el Premio Nobel en Fisiologa o Medicina en 1965 junto con Andr Lwoff.
Andr Lwoff
(1902-1994)
Jacques Lucien Monod
(1910-1976)
Francois Jacob
(1920)
Un Opern se define como una
unidad gentica funcional formada por
un grupo o complejo de genes
capaces de ejercer una regulacin de
su propia expresin por medio de los
sustratos con los que interaccionan
las protenas codificadas por sus
genes. Este complejo est formado
por genes estructurales que codifican
para la sntesis de protenas
(generalmente enzimas), que
participan en vas metablicas cuya
expresin generalmente est regulada
por otros 2 factores de control,
llamados:

Factor promotor.
Operador.

El operador permite la
activacin/desactivacin del promotor
a modo de "interruptor gnico" por
medio de su interaccin con un
compuesto inductor. Y de esta manera
el promotor dar lugar a la
expresin/represin del resto de los
genes estructurales.
El cdigo gentico (1960-1966)
En menos de una dcada, un amplio grupo de investigadores, entre los que sobresalen Har Gobin
Khorana, Marshall W. Nirenberg y Robert W. Holley, descifran el cdigo gentico. Es un alfabeto que
utiliza cuatro letras, que combinadas en 64 tradas (grupos de 3 letras), son capaces de codificar los 20
aminocidos que construyen las protenas de todos los seres vivos (aunque existen algunas variaciones).
Har Gobin Khorana (1922), Marshall W. Nirenberg (1927-2010) y Robert W. Holley (1922-1993)
Cdigo gentico
El cdigo gentico es el conjunto de normas por las que la
informacin codificada en el material gentico (secuencias de
ADN o ARN) se traduce en protenas (secuencias de
aminocidos) en las clulas vivas. El cdigo define la relacin
entre secuencias de tres nucletidos, llamadas codones, y
aminocidos. Un codn se corresponde con un aminocido
especifico.

La secuencia del material gentico se compone de cuatro bases
nitrogenadas distintas, que tienen una funcin equivalente a
letras en el cdigo gentico: adenina (A), timina (T), guanina (G)
y citosina (C) en el ADN y adenina (A), uracilo (U), guanina (G) y
citosina (C) en el ARN.

Debido a esto, el nmero de codones posibles es 64, de los
cuales 61 codifican aminocidos (siendo adems uno de ellos el
codn de inicio, AUG) y los tres restantes son sitios de parada
(UAA, llamado ocre; UAG, llamado mbar; UGA, llamado palo).
La secuencia de codones determina la secuencia aminoacdica
de una protena en concreto, que tendr una estructura y una
funcin especficas.
SEGUNDA BASE
U C A G
P
R
I
M
E
R
A

B
A
S
E



U
UUU
Phe
UCU

Ser
UAU
Tyr
UGU
Cys
U

T
E
R
C
E
R
A

B
A
S
E

UUC UCC UAC UGC C
UUA
Leu
UCA UAA
FIN
UGA FIN A
UUG UCG UAG UGG Trp G


C
CUU

Leu
CCU

Pro
CAU His CGU

Arg
U
CUC CCC CAC CGC C
CUA CCA CAA Gln CGA A
CUG CCG CAG CGG G


A
AUU
Ile
ACU

Thy
AAU Asn AGU
Ser
U
AUC ACC AAC AGC C
AUA ACA AAA Lys AGA
Arg
A
AUG Met ACG AAG AGG G


G
GUU

Val
GCU

Ala
GAU Asp GGU

Gly
U
GUC GCC GAC GGC C
GUA GCA GAA Glu GGA A
GUG GCG GAG GGG G
Cdigo gentico
Dogma Central de la Biologa Molecular (1970)
El dogma central de la biologa molecular es un concepto que ilustra los mecanismos de transmisin y
expresin de la herencia gentica tras el descubrimiento de la codificacin de sta en la doble hlice del
ADN.

El dogma propone que existe una unidireccionalidad en la expresin de la informacin contenida en los
genes de una clula, es decir, que el ADN es transcrito a ARN mensajero y que ste es traducido a
protena, elemento que finalmente realiza la accin celular. El dogma tambin postula que slo el ADN
puede replicarse y por tanto, reproducirse y transmitir la informacin gentica a la descendencia. Fue
propuesto por Francis Crick en 1970, hacindosele algunas ligeras modificaciones, tiempo despus.
Francis Crick
(1916-2004)
Howard M. Temin
(1934-1994)
Primeros pasos de la ingeniera gentica (dcada de 1970)
En 1953 se descubri el
fenmeno llamado de
restriccin: ciertos fagos
(virus bacteriano) que
parasitan a E. coli podan
desarrollarse en ciertas
cepas de esta bacteria,
pero no podan hacerlo en
otras (se dice que estn
"restringidos" en
determinadas cepas).

A finales de los 60, Werner
Arber, en Basilea,
descubre las enzimas de
restriccin responsables
de ese fenmeno: la cepa
de bacteria restrictiva
produce unas
endonucleasas ("enzimas
de restriccin, o
restrictasas") que
escinden el ADN del fago
crecido en otra cepa
diferente.
Primeros pasos de la ingeniera gentica (dcada de 1970)
Esas primeras enzimas de restriccin eran
inespecficas en cuanto al sitio del ADN donde
cortaban, pero en 1970 Hamilton O. Smith, en
Baltimore, descubre un nuevo tipo de enzima de
restriccin totalmente especfica: capaz de
reconocer una determinada secuencia de ADN, de
unos pocos pares de bases, y de cortar en ambas
cadenas en lugares concretos.

En 1972, Mertz y Davis aadieron a una mezcla de
ADN de diferentes orgenes una enzima ADN-
ligasa, procurando que se reparasen los enlaces
fosfodister. Y esto les hizo darse cuenta de que
podan constituir la base para la produccin de
molculas recombinantes in vitro, con material
gentico de diferentes especies.

Pero este ADN recombinante, generado en el tubo
de ensayo, es inerte, no es ms que una
macromolcula hbrida que por s sola no hace
nada. Si queremos que el ADN recombinante haga
algo, hay que introducirlo en clulas vivas que sean
capaces de expresar su informacin gentica.

Esto nos lleva ya a la idea de lo que es la
Ingeniera Gentica: la formacin in vitro de nuevas
combinaciones de material gentico, por medio de
la insercin de un ADN de inters en un vehculo
gentico (vector), de modo que tras su introduccin
en un organismo hospedero el ADN hbrido
(recombinante) se pueda multiplicar, propagar, y
eventualmente expresarse.
Secuenciacin del primer genoma (1977)
Estructura de la cpside del fago Phi X174
El bacterifago Phi-X174 fue el primer
organismo en ser secuenciado su genoma,
en 1977, por Frederick Sanger.

Este bacterifago o fago tiene una muy
pequea cantidad de ADN. Se
identificaron 11 genes en 5.386 bases;
conformado por un solo cromosoma, en
una topologa circular. Muchas de sus
expresiones tiene similares funciones en
los dos grupos. El contenido genmico
(GC) es 44 % y el 95 % de los nucletidos
corresponde a genes codificantes.
Frederick Sanger
(1918)
Secuenciacin Sanger
Secuenciacin Sanger
Secuenciacin de ADN. Los sustratos normales para la
replicacin del ADN son los dNTPs. La estructura
ligeramente diferente de los dNTPs detiene la sntesis de
ADN. Cuando los dNTPs marcados son incorporados
dentro de la mezcla conteniendo cadenas sencillas de
ADN plantilla o copia de secuencias desconocidas, el
resultado es una coleccin de fragmentos de variadas
longitudes que pueden ser separados por electroforesis.
Polymerase Chain Reaction (PCR) (1986)
La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls
(Polymerase Chain Reaction), es una tcnica de biologa molecular descrita en 1986 por
Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN
particular, partiendo de un mnimo de ADN; en teora basta partir de una nica copia de ese
fragmento original o molde.

Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que, tras la
amplificacin, resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta probabilidad , virus o
bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadveres) o hacer
investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificacin
han hecho que se convierta en una tcnica muy extendida, con el consiguiente
abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Kary Mullis
(1944)
Termociclador
Bandas de ADN obtenidas en
un gel de agarosa por
electroforesis
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Edward W. Lewis desarroll trabajos en el campo de la gentica, con descripcin de la influencia de los
genes en el desarrollo embrionario del feto.

Junto con C. Nsslein-Volhard y Eric Wieschaus, obtuvo el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina en el
ao 1995.

Nesslein-Volhard y Wieschaus consiguieron identificar respectivamente en la Drosophila melanogaster
una serie de genes que determinan la evolucin de los distintos segmentos del animal y deciden su
conversin en organismos especializados.
Edward W. Lewis
(1918-2004)
Christiane Nsslein
(1942)
Eric Wieschaus
(1947)
Un gen codifica la forma del cuerpo (1995)
Comparacin de la estructura y la funcin de los genes hometicos de insectos y de mamferos.
Comparacin de las secuencias de genes Hox en distintos organismos.
La bioinformtica, segn una de sus
definiciones ms sencillas, es la aplicacin
de tecnologa de computadores a la gestin
y anlisis de datos biolgicos. Los trminos
bioinformtica, biologa computacional
y, en ocasiones, biocomputacin,
utilizados en muchas situaciones como
sinnimos, hacen referencia a campos de
estudios interdisciplinarios muy vinculados,
que requieren el uso o el desarrollo de
diferentes tcnicas que incluyen
informtica, matemtica aplicada,
estadstica, ciencias de la computacin,
inteligencia artificial, qumica

y bioqumica
para solucionar problemas, analizar datos,
o simular sistemas o mecanismos, todos
ellos de ndole biolgica, y usualmente
(pero no de forma exclusiva) en el nivel
molecular. El ncleo principal de estas
tcnicas se encuentra en la utilizacin de
recursos computacionales para solucionar
o investigar problemas sobre escalas de tal
magnitud que sobrepasan el discernimiento
humano. La investigacin en biologa
computacional se solapa a menudo con la
biologa de sistemas.

Bioinformtica
Mapa del cromosoma X del ser humano (extrado
de la pgina web del NCBI). La transcripcin del
genoma humano es uno de los mayores logros de
la bioinformtica.
Alineamiento de diferentes protenas de hemoglobina, realizado con el servicio web para ClustalW implementado en el Instituto Europeo
de Bioinformtica. El alineamiento de secuencias biolgicas es una de las herramientas bsicas de la bioinformtica.
Los principales esfuerzos de investigacin en estos campos incluyen el alineamiento de secuencias, la
prediccin de genes, montaje del genoma, alineamiento estructural de protenas, prediccin de estructura
de protenas, prediccin de la expresin gnica, interacciones protena-protena, y modelado de la
evolucin.
Biologa sinttica (2010)
En marzo de 2010, un grupo de investigadores encabezado por J. Craig Venter, notific que haban logrado la insercin
de ADN de sntesis artificial (un cromosoma sintetizado en el laboratorio) en una bacteria (Mycoplasma) y la misma se
dividi y reprodujo. Anteriormente, este mismo grupo de investigadores haban publicado la creacin del primer
cromosoma artificial y su transferencia exitosa a una bacteria del gnero Mycoplasma.
J. Craig Venter
(1946)