Foram agraciados com o Prmio Nobel de Qumica, em 2012, os

pesquisadores:

John B. Fenn;
Koichi Tanaka e
Kurt Wthrich

Por suas pesquisas envolvendo o uso de espectroscopia de massas e
ressonncia magntica nuclear aplicados a macrobiomolculas.
Bioqumica Prmio Nobel
.
Bioqumica, Prof. Magno
2014.1
Escola de Qumica - N
Seminrio
Pesquisadores envolvidos
Pesquisadores envolvidos
Como fazamos antes?
No fazamos
No havia um mtodo vivel para certos tipos de anlise.

Pequenas variaes na estrutura de uma protena determinam suas
funes.


O entendimento: Qual a conformao daquela molcula de protena
quando ela est no momento imediato de sua interao com outra?

O que acontece nesse momento decisivo?


Como diferentes protenas e outras substncias agem juntas na clula?

O mapeamento das sequncias gnicas estimulou as pesquisas.
Anlise Instrumental Aplicada
Com a evoluo de tcnicas instrumentais de anlise e a demanda por
informaes acerca das estruturas das macromolculas [protenas, em
especial], houve a necessidade de desenvolver metodologias que fossem
capazes de mapear centros ativos e nveis estruturas mais detalhadamente.

Desenvolvimento de frmacos;

Malria;

Cncer de ovrio, mama e prstata;

Controle das propriedades dos alimentos;

etc.
Histrico
JJ Thompson (1906 Prmio Nobel): Separao de
molculas por diferena de tamanhos e cargas;

70 anos depois um processo foi desenvolvido para
preparar molculas carregadas em uma fase gasosa
seguido da separao destas molculas no vcuo.

O desafio? Encontrar um procedimento vivel para
preparar as amostras de macromolculas.
Espectrometria de Massas
Imediatamente aps a ionizao da amostras, as molculas ionizadas e no
estado gasoso entram no setor de anlise do espectrmetro de massas.
Nesse os diferentes ons gerados na camara de ionizao sero separados
de acordo com a sua razo massa/carga.
Time of Flight
Antes de adentrar o analisador por tempo de
voo, os ons podem ser formados na fase
gasosa por diversas fontes: no vcuo por
ionizao por eltrons (EI) ou por dessoro
assistida por lazer (MALDI); ou por ionizao
por eletrospray (ESI) ou por ionizao qumica
(CI). Todos os ons que adentram ao TOF
recebem um pulso de energia igual (pulso de
extrao), mas so acelerados de maneiras
diferentes devido a sua razo massa/carga e
chegando ao detector em tempos diferentes.
Os ons com menor razo m/z tero maior
velocidade e chegaro primeiro ao detector e
assim por diante. Dessa forma, pela medida
do tempo de voo dos ons pode-se deduzir sua
m/z podendo analisar compostos de massas
baixas at macromolculas.
SVL
A dessoro refere-se ao fenmeno onde uma substncia adsorvida ou
absorvida por outro: a amostra a ser analisada dissolvida em uma matriz
(geralmente um cido orgnico), promovendo a protonao destas molculas.
Na prxima etapa o solvente evaporado, resultando em uma soluo slido-
slido que depositada sobre a superfcie da sonda e em seguida a mistura
submetida a laser de UV, que conduz volatilizao. Assim um gs com
molculas ionizadas gerado, sendo esta a condio bsica para anlise de
molculas por espectrometria de massas.
Ionizao por Eletrospray
No processo de ionizao por eletrospray, as gotculas carregadas evaporam
at um ponto em que o nmero de cargas eletrostticas repulsivas sobre a
superfcie torna-se to grande, em relao ao tamanho das gotculas, que uma
exploso ocorre. Isto produz um nmero de gotculas menores que tambm
possuem uma superfcie contendo cargas eletrostticas.

A teoria de Fenn era que diferentes estados de carga podiam ser interpretados
como medies independentes de peso molecular e que uma mdia dessas
medies podiam fornecer um valor de massa molecular bem preciso

Fenn demonstrou que possvel obter o peso molecular de uma macromolcula
com preciso de 0,01 % pela aplicao de um mtodo de clculo da mdia de
sinais para os vrios ons formados no processo de ionizao por eletrospray.

Ionizao por Eletrospray
O incio e o final do processo so definidos por um circuito eltrico que aciona a
pulverizao de gotculas carregadas. Neste processo, a biomolcula comea
geralmente carregada e dissolvida em um ambiente rico em gua.

No final do processo, a mesma biomolcula colhida atravs do orifcio de um
analisador de massa, como uma srie de ons multicarregados.

Uma vantagem adicional que com uma seleo adequada de condies, a
ionizao por eletrospray pode ser o menos invasivo de todos os mtodos de
ionizao. Ele ainda permite o estudo de complexos moleculares que tm
apenas fracas interaes no covalentes, tais como protena - protena e enzima
substrato.


Ionizao por Eletrospray
RMN
RMN
Espectro H-RMN do Etanol
Espectro H-RMN da Ubiquitina (70aa)
RMN
RMN
Se algum sabe de todas as medidas de uma casa pode-se desenhar uma imagem
tridimensional da casa. Da mesma forma, medindo um grande nmero de
distncias curtas de uma protena, possvel criar uma imagem tridimensional da
sua estrutura, como mostrado esquematicamente na figura.

RMN
Ganhos e Futuro