Facultad de Ciencias Agropecuarias

Ecuela de Ingenieria Agroindustrial

Curso:
AnIisis de los PAI
Profesor:
Ing. Barraza Jaregui, Gabriela
Integrantes:
Cortijo Mendoza, Paul
Haro Snchez, Ronald
Salazar Palma, ngel
Tambajulca Mantilla, Marlon
Valera Cceres, Flor
MTODOS
ANALTICOS PARA
DETERMINACIN DE
COMPONENTES
ACTIVOS DE
ALIMENTOS
FUNCIONALES
TITULO TIPO CARACTERSTICAS
REACTIVOS
UTILIZADOS
EQUIPO
UTILIZADO



IDENTIFICACIN DE
FITOESTEROLES POR TLC


Evaluacin del
contenido de
Fito esteroles,
compuestos
fenlicos y
mtodos
qumicos para
determinar la
actividad
antioxidante
en semilla de
sacha inchi
(Plukenetia
volubilis L.)
cromatogrfico
Para la cuantificacin de los
compuestos fenlicos se
realizaron pruebas preliminares
con estndares de cidos
fenlicos como clorognico,
cafeico y ferlico, logrndose
identificar y cuantificar dos de
ellos: cafeico y ferlico.
Asimismo, se identificaron y
cuantificaron hesperidina,
rutina y morina.
Membrana nylon
42mm de 45 um,
Acrodisk GHP 45um
de 25 mm,
Cromatofolios de
silicagel G f254.

Metanol HPLC, ter
etlico, hidrxido de
potasio, agua ultra
pura para HPLC,
etanol p.a.,
estndares de cidos
fenlicos: cafeico y
ferlico, estndares
de flavonoides:
hesperidina, rutina y
morina.
HPLC



Se realiz mediante el mtodo
descrito por Fierro et al.,
(2004)5 . Las muestras de torta
y aceite de sacha inchi fueron
pesadas en tubos diferentes y
se les agregaron metanol a una
concentracin de 10mg/ml.
Los tubos fueron agitados en
vortex por 30 minutos y 20
minutos sonificados; luego se
guard 24 horas. Despues se
procedi a sembrar en las
placas cromatogrficas con
micropipeta 10 ul. Se
utilizaron dos sistemas
cromatogrficos como fase
mvil. La primera fase mvil
fue (CHCl3 :CH3 OH:H 2O
10:1:0,05) y fue corrida hasta
la mitad de la placa
cromatogrfica. Luego la placa
fue secada y corrida
completamente en el segundo
sistema de solvente (CHCl3 ).
EMPLEO DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS
COMO HERRAMIENTA PARA LA DETERMINACIN
DE TXICOS EN ALIMENTOS: HACIA LA SEGURIDAD
ALIMENTARIA
FUNDAMENTO DE LOS DETECTORES DE
ESPECTROMETRA DE MASAS
La espectrometra de masas est basada en el diferente
comportamiento que presentan los iones que se forman
por las diferentes tcnicas de ionizacin, al atravesar
campos elctricos y magnticos As dichos iones son
separados en funcin de su relacin masa/carga (m/z) y
detectados posteriormente



El objetivo es obtener ms informacin estructural
mediante la fragmentacin de iones aislados, as
como mejorar la selectividad y sensibilidad para
el anlisis cuantitativo.

Dispositivo de introduccin de la muestra.



Cmara de ionizacin o fuente, donde se generan los
iones a partir de las sustancias qumicas a analizar



Analizador, que diferencia los iones generados en
funcin de su relacin m/z




Detector que produce una seal elctrica amplificada
para cada uno de los iones generados
Un espectrmetro
de masas consta de
varios
componentes
bsicos:
APLICACIONES DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS
COMO DETECTOR
Existe una gran variedad de compuestos qumicos que por
diferentes vas pueden llegar a los productos alimenticios que
se consumen cada da.


Dentro de stos se encuentran productos como plaguicidas,
medicamentos veterinarios, micotoxinas y acrilamida, para los
cuales el empleo de la espectrometra de masas ha posibilitado
una deteccin rpida y fiable, permitiendo determinar dichos
compuestos por debajo de los lmites regulados por los
organismos oficiales en un tiempo de anlisis relativamente
corto.
Tabla 1
Determinacin de contaminantes en alimentos mediante tcnicas cromatogrficas
acopladas a espectrometra de masas*

Fitoesteroles y escualeno como
hipocolesterolmicos en cinco variedades de
semillas de Cucurbita maxima
y Cucurbitamoschata (calabaza)
la semilla de calabaza se ha estudiado y utilizado en el tratamiento
de enfermedades parasitarias, hipertrofia benigna prosttica,
cistitis y como hipoglicemiante.

Sin embargo, se desconocen
investigaciones que refieran el uso de la semilla de calabaza y
sobre todo de los fitoesteroles y escualeno como elementos
hipocolesterolmicos en humanos.

se estudiaron semillas de calabaza de dos especies, Cucurbita
maxima y Cucurbita moschata, de Cuba y Mxico de las
variedades Fif, Marucha, INIVIT C- 88 (cubanas), Chata y Tapata
(mexicanas), se determin el perfil de fitoesteroles (beta-sitosterol,
campesterol, estigmasterol y estigmastenol) y escualeno mediante
cromatografa gas-lquido.

El objetivo se bas en determinar el contenido de fitoesteroles y
escualeno de cinco variedades de semilla de calabaza para su
posible uso como hipocolesterolmicos en humanos.


MTODOS
Toma de muestras
Se tomaron muestras de semillas de calabaza de 2
especies Curcubita maxima Duchesne
y C. moschataDuchesne de Cuba y Mxico, de las variedades
Fif (C. moschata de Cuba), Marucha (C. moschata de Cuba),
INIVIT C-88 (C. maxima de Cuba), Tapata (C.
moschata de Mxico) y Chata (C. maxima de Mxico). Se
tom en cuenta que las semillas de calabaza tuvieran el mismo
tiempo de almacenaje (12 meses), sin tratamiento qumico,
fsico o biolgico.
Anlisis qumico de las semillas de calabaza
El contenido de extracto etreo, grasa verdadera, material
insaponificable, perfil de fitoesteroles y escualeno se
determinaron en los laboratorios del Centro Tecnolgico y
Asistencia del Estado de Jalisco (CIATEJ), Mxico. Todos los
anlisis se realizaron por quintuplicado.


Extraccin de los lpidos
La extraccin de los lpidos de las semillas de calabaza se realiz
mediante el empleo de un extractor Soxhlet. Para garantizar una
adecuada condensacin se emple una corriente de agua fra.
Se utiliz ter etlico anhdrido como solvente y se regul la
temperatura a 47 C. El tiempo de extraccin fue
aproximadamente de 4 h.

Saponificacin de la muestra
Se pes 1 g de muestra en un matraz de fondo plano,
posteriormente se agregaron 50 mL de solucin metanlica de
KOH 2 M y se someti a ebullicin suave (55-60 C) durante 60
min.

Extraccin de materia insaponificable
La solucin obtenida en el punto anterior se coloc en una pera
de decantacin, a la cual se le agregaron 50 mL de agua
destilada y 40 mL de ter. La solucin se dej reposar hasta la
separacin de fases, esta tcnica se repiti tres veces
conservando las fracciones etreas.



Derivatizacin de la materia insaponificable
La materia insaponificable obtenida en la etapa anterior, es diluida en
una pequea cantidad de solvente y trasvasada a un tubo de ensayo,
para despus someter a secado con corriente de nitrgeno.
Se prepar del reactivo silante (TMS), en un tubo de vidrio mediante la
mezcla de hexametildisilazano como ingrediente activo,
triclorometilsilano como catalizador y piridina como solvente en
proporcin 2:1:10.
El contenido de fitoesteroles y escualeno fue determinado mediante un
cromatgrafo de gases Hewlett Packard 6890 (Palo Alto Ca.), equipado
con detector de ionizacin de flama, automuestreador HP 6890 series y
una columna HP-5 (30 m x 0,32 mm ID x 0,25 mm espesor de pelcula).

Anlisis estadsticos
Los datos se procesaron mediante anlisis de varianza de
clasificacin simple en un diseo totalmente aleatorizado, se
utiliz la prueba de Anova para la comparacin de medias.
Antes de realizar el anlisis de varianza se procedi a verificar la
normalidad de los datos

y

la uniformidad de la varianza, segn
el softwareestadstico SPSS versin 12.0. En los casos necesarios se
emple una comparacin mltiple de medias a posteriori.

RESULTADOS

Las variedades Tapata (C. moschata) e INIVIT C-88 (C. maxima)
mostraron el mayor contenido de extracto etreo (EE) y grasa
verdadera (GV); se detectaron diferencias significativas (p< 0,001)
con las dems variedades, la variedad Chata present el ms bajo
contenido.
La variedad Fif difiri significativamente (p< 0,001) para el resto de los
tratamientos, con contenidos superiores; la variedad Tapata
present el contenido ms bajo y las variedades cubanas mostraron
concentraciones superiores a las variedades mexicanas.
El perfil de fitoesteroles mostr diferencias significativas (p< 0,001)
para todas las variedades estudiadas . La variedad Marucha mostr
las mayores concentraciones de beta-sitosterol, campesterol,
estigmasterol y estigmastenol. Las variedades Tapata e INIVIT C-88
mostraron diferencias significativas (p< 0,001) en el contenido de
beta-sitosterol con respecto a las variedades Fif y Chata. Las
variedades Chata y la Marucha presentaron las concentraciones
ms altas de campesterol.
La mayor concentracin de escualeno fue detectada en la variedad
Marucha, que result la de mejor balance en el perfil de fitoesteroles
y escualeno; present diferencias significativas (p< 0,001) con las
variedades Fif, INIVIT C-88, Chata y Tapata.

Determinacin de la capacidad antioxidante
de flavonoides en frutas y verduras frescas y
tratadas trmicamente
RESUMEN
El objetivo principal del trabajo fue determinar la
capacidad antioxidante de los flavonoides en
manzanas rojas con y sin cscaras, fresas, tomates y
cebollas frescas y tratadas trmicamente: calor
hmedo (hervido y vapor), seco (horno) y alta
frecuencia (microondas). Se realiz la medicin en un
espectrofotmetro de fluorescencia y el anlisis
estadstico a travs de la Varianza y Prueba de Duncan
Conclusin: los flavonoides presentaron mayor actividad
antioxidante en estado fresco, disminuyendo al ser
sometidos a los distintos tipos de calor (coccin).
MATERIALES Y
MTODOS
Se utilizaron manzanas
rojas (Malus sylvestris),
fresas (Fragaria spp.),
tomates (Lycopersicon
esculentum) y
cebollas (Allium cepa)
en estado de
maduracin ptimo.
Luego se procedi a
lavar y eliminar partes
no comestibles. Cada
una fue dividida en 5
grupos de 150-200 gr.,
uno de ellos en estado
fresco y los otros
fueron tratados
trmicamente
estandarizndose las
temperaturas y
tiempos de coccin
correspondientes.

Las muestras frescas y cocidas se homogeneizaron a fin
de obtener los extractos de flavonoides. Al final de la
extraccin se obtuvieron 4 fases: clorofrmica, actica,
butanlica y acuosa. La capacidad antioxidante se
midi a travs de un Espectrofotmetro de Fluorescencia
(W excitacin 540 nm; W emisin 575 nm), previa
termostatizacin de las cubetas de 3 ml a 37 C. Se
trabaj nicamente en la fase actica, descartndose
las clorofrmicas y butanlicas debido a que estas
sustancias solas presentaron actividad antioxidante, y la
acuosa porque no present una lectura positiva. Los
datos obtenidos se expresaron en uM Equivalente Trolox,
compuesto anlogo de la Vitamina E.
Los resultados de las muestras se realizaron por triplicado
y fueron analizados estadsticamente mediante el anlisis
de Varianza (24) y Prueba de Duncan (25)
RESULTADOS

Las manzanas frescas con y sin cscaras no presentaron diferencias
estadsticamente significativas entre las muestras. Se observ una
disminucin de esta actividad en las tratadas trmicamente, sobretodo por
la aplicacin del calor seco (horno) en la manzana pelada y con cscara.

La mayor capacidad antioxidante en fresas fue en la muestra fresca
(0,278 M Equivalente Trolox), y la menor actividad, en las tratadas por calor
seco (0,077 M Equivalente Trolox), siendo igual que en las referidas
anteriormente.

En el tomate en estado fresco, la actividad antioxidante fue mayor
(0,165 M Equivalente Trolox), en relacin a los tratados por hervido (0,154
uM Equivalente Trolox), vapor (0,141 M Equivalente Trolox), microondas
(0,126 M Equivalente Trolox) y horno (0,048 M Equivalente Trolox).

La capacidad antioxidante de cebollas frescas fue de 0,223 M Equivalente
Trolox, siendo la menor actividad en las tratadas por hervido
(0,146 M Equivalente Trolox) y vapor (0,151 M Equivalente Trolox),
diferencindose de los casos anteriores.

Anlisis de
fitoesteroles en la
semilla del estropajo,
luffa cylindrica por
cromatografa de
gases capilar

Introduccion
Los fitoesteroles o esteroles vegetales estn
presentes en las plantas, aceites vegetales,
semillas, frutos secos, cereales y legumbres,
adems son importantes componentes para las
industrias de la salud en la fabricacin de
esteroides y la produccin de frmacos, la
nutricin y en la cosmtica. Este nuevo
espectro de aplicaciones ha generado la
necesidad de controlar y cuantificar este tipo
de sustancias.


Objetivos
En este caso se ha pretendido ampliar el
conocimiento sobre la semilla de estropajo,
que actualmente se presenta como un
subproducto no aprovechado por la industria
regional. Para ello se realiz la estandarizacin
de la tcnica de cromatogrfica, con el fin de
ampliar el portafolio de anlisis que permita el
soporte tcnico y cientfico del grupo de
investigacin, hacia la comunidad
acadmica e industrias productivas.
Procedimiento
Se extrajo aceite de las semillas de luffa cylindrica,
con rendimiento del 8,45%. El aceite fue
saponificado, se extrajo su materia insaponificable,
derivatizandola por silacin. Se evalu el
porcentaje de recuperacin de 82,96% por
extraccin en fase slida. Se estandariz la tcnica
de cromatografa de gases para el anlisis de
fitoesteroles en matrices oleosas, evaluando los
parmetros estadsticos: precisin, lmite de
deteccin y cuantificacin, sensibilidad, linealidad
y exactitud, logrando valores tolerables. El aceite
mostr al -sitoesterol y estigmasterol como
fitoesteroles mayoritarios en la semilla con 2551,1 y
211,1 ppms respectivamente, la confirmacin se
realiz por espectrometra de masas.

Resultados