DETERMIACION DE STAPHYLOCOCCUS

AUREUS
Docente: Ing. Nilda Quispe Alvarado
Ao y Seccin : 3 ao B
Integrantes:
La Torre Rueda, Danter
Mayorga Morales, Daniel
Ordoez Julca, Grecia

I. OBJETIVOS:
Aprender a determinar el microorganismo de staphylococcus aureus presentes
en los alimentos.
Aplicar las tcnicas para la determinacin y confirmar con la prueba de
coagulasa.


II. FUNDAMENTO:
Se basa en determinar la deficiente manipulacin de los alimentos a
travs del numero de staphylococcus aureus presentes causantes de
toxina.


III. MARCO TEORICO

Staphylococcus aureus, es una bacteria anaerobia
facultativa, grampositiva, productora de coagulasa, catalasa, inmvil y no
esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo,
estimndose que una de cada tres personas se hallan colonizadas, aunque
no infectadas, por ella.


Puede producir una amplia gama de enfermedades, que van desde
infecciones cutneas y de las mucosas relativamente benignas, tales
como foliculitis, forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de
riesgo vital, como celulitis, abscesos profundos, osteomielitis, meningitis,
sepsis, endocarditis o neumona. Adems, tambin puede afectar al
aparato gastrointestinal, ya sea por presencia fsica de Staphylococcus
aureus o por la ingesta de la enterotoxina estafiloccica secretada por la
bacteria.
En la actualidad, este microorganismo se encuentra como el principal
causante de las infecciones nosocomiales. Esta situacin se ve favorecida
por el hecho de que esta especie habita tanto en las mucosas como en la
piel de los seres humanos, lo que permite que a travs de las heridas
quirrgicas pueda penetrar en el torrente sanguneo del paciente por medio
del contacto directo o indirecto con el personal sanitario, con un objeto
contaminado o incluso con otro paciente.






Las cepas habituales de Staphylococcus aureus son resistentes a la
penicilina, dejando como los antibiticos ms eficaces para combatirlos a
los aminoglucsidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina. Adems
de la administracin del tratamiento antimicrobiano correspondiente, puede
ser conveniente, en funcin del caso, la eliminacin de puertas de entradas
como catteres venosos permanentes o drenajes quirrgicos.




Staphyl, CGP en racimos
De 0.5 1 m, anaerobios facultativos, algunos
aislamientos requieren de CO
2
.
Soportan Tp de 18-40C
Presentes en piel y mucosas de seres humanos.

CAPSULA
BIOPELICULA
PEPTIDOGLUCANO
PROTEINA A
COAGULASA
CAPSULA: 11 serotipos capsulares de S.aureus (5 y 7). Serotipos 1 y
2 (colonias de aspecto mucoide)
BIOPELICULA : (capa de polisacridos extracelular).
PEPTIDOGLUCANO: actividad endotoxignica.
ACIDOS TEICOICOS: polisacrido A (S.aureus) y polisacrido B
(S.epidermidis).
PROTEINA A: En mayora de cepas de S.aureus
COAGULASA: Factor de agregacin (Fibringeno Fibrina insoluble)
PROTEINAS ADHESINAS: MSCRAMM
TOXINAS ESTAFILOCOCICAS:
TOXINA ALFA: altera musculo liso, forma poros
en clulas husped.
TOXINA BETA: esfingomielinasa C; cataliza
hidrlisis de fosfolpidos
TOXINA DELTA: actividad citolitica, surfactante
que altera membrana c
TOXINA GAMMA: lisan neutrfilos y macrfagos.
LEUCOCIDINA DE PANTON -VALENTINE:
leucotoxica
las dos ultimas toxinas estn formadas por componente S y
componente, ambas forman poros que provocan
inestabilidad osmtica.
TOXINAS ESTAFILOCOCICAS:
TOXINAS EXFOLIATIVAS: Sndrome de la piel escaldada estafiloccica;
son dos (ETA y ETB) que se unen a glucolipidos GM4.

ENTEROTOXINAS: (A a E; G a I); y tres subtipos de enterotoxina C. la
enterotoxina a se asocia con mayor frecuencia a enfermedad, C y D a
productos lcteos contaminados y B produce colitis pseudomenbranosa
estafilococica.

TOXINA 1 DEL SINDROME DEL SHOCK TOXICO (TSST-1): es un
superantgeno que estimula la liberacin de citocinas y provoca
extravasacin de clulas endoteliales. A altas concentraciones tiene efectos
citotoxicos en clulas.

COAGULASA: ligada ( a
la pared de estafilococo, puede
convertir directamente
fibrinogeno en fibrina) o libre (
reacciona con un factor del
plasma para formar una
estafilotrombina.
CATALASA: cataliza la
conversin de H
2
O
2
en agua y
oxigeno.
HIALURONIDASA:
hidroliza los cidos hialuronicos
(matriz acelular del tejido
conectivo). Diseminacin de
S.aureus.
FIBRINOLISINA:
estafilocinasa; disuelve los
cogulos de fibrina
LIPASAS: importante en invasin
a tejidos cutneos y subcutneos e
infecciones cutneas superficiales (
fornculos, carbunco).
NUCLEASA: termoestable.
PENICILINASA ( lactamasa): la
presencia de plsmidos
transmisibles aseguro la distribucin
de esta enzima.
AGAR MANITOL SALADO
Colonias amarillas Colonias rojas
S.aureus S.epidermidis
COAGULASA
(+) (-)
S.aureus S. No aureus
a. Una endocoagulasa o "clumping factor" que est unida a la
pared celular (test en placa).

b. Una exocoagulasa o que acta mediante la activacin de un
factor (CRF), formndose un complejo coagulasa-CRF, el cual
reacciona con el fibringeno producindose un cogulo de fibrina
FUNDAMENTO
PRESENCIA DE DNAsa
(+) (-)
S.aureus
S.epidermidis
S.saprophyticus
S.haemolyticus
S.capitis
Enzima termoestable DNAsa es capaz de clivar los enlaces
fosfodiester internos de la molcula de ADN.
FUNDAMENTO
Se siembra una colonia de estafilococo en forma de moneda en
una placa de medio slido que contiene DNA y verde de metilo.
Se incuba 18 horas a 35.
PROCEDIMIENTO
CMO SE CONTAMINA UN ALIMENTO POR S. aureus?

Las principales fuente de contaminacin de los alimentos es el humano y los animales. El
humano al estar infectado o ser portador lo trasmite a los alimentos durante la elaboracin,
en el caso de la contaminacin por los animales la situacin ms frecuente es la mastitis
crnica o aguda del ganado lechero, la contaminacin es a travs de las maquinas
ordeadoras o de las manos de los ordeadores del ganado.Otros factores que contribuyen
a la contaminacin son el manejo inapropiado y la conservacin en condiciones
inadecuadas de los alimentos favoreciendo el desarrollo de los microorganismos. El
crecimiento de S. aureus en alimentos tiene gran importancia por tratarse de un
microorganismo capaz de producir toxinas que al ingerirse causa intoxicaciones
alimentarias (Fernndez, 2008).


CUL ES LA SINTOMATOLOGA?

El periodo de incubacin oscila entre 30 min y 6 horas, se presenta nausea, vmito, dolor
abdominal y diarrea. El perodo de incubacin y la sintomatologa dependen de la cantidad
de toxina
ingerida y de la susceptibilidad del individuo (Fernndez, 2008).
CULES SON LAS MEDIDAS PREVENTIVAS PARA EVITAR LA CONTAMINACIN DE LOS ALIMENTOS?

Cuando el microorganismo llega al alimento se debe controlar la temperatura de refrigeracin y no
romper la cadena del fro, de esta manera el microorganismo no ser capaz de reproducirse y formar la
toxina, si, por el contrario las condiciones lo permiten, el microorganismo se desarrollar en el alimento y
producir la toxina ocasionando intoxicacin cuando se ingiera. Otra medida de control es la de los
manipuladores de los alimentos, deben usar cofia, cubreboca y asegurarse de que se utilicen
adecuadamente.











CULES SON LOS PRINCIPALES ALIMENTOS INVOLUCRADOS EN LA INTOXICACIN ALIMENTARIA POR S. aureus?

Los alimentos perecederos que se identifican con mayor frecuencia en los brotes de intoxicacin,
consisten en jamn, salchichas, productos de pastelera, alimentos cocinados a base de carne de pollo, pavo

MATERIALES:
-Placas Petri
-Baln de vidrio
-Tubos de ensayo
-Pinzas
-Tijeras
-Licuadora
-Mechero
-Balanza mecnica
-Pipetas

MUESTRA Y REACTIVO
-Crema volteada (muestra)
-Agar Baird Parker
-Solucin salina peptonada

PREPARACIN DE LA MUESTRA:
-Obtener la muestra rotulado y estril
-Pesar 50 g de muestra mas 450 ml
de S.S.P en una licuadora
-Licuar para su homogenizado
-Dejar reposar para separar las
faces (dilucin 10^-1)
-Tomar 1 ml de la primera dilucin e
introducirlos en tubos de ensayo que
contengan 9 ml de S.S.P y llevarlos
hasta la dilucin 10^-4


SIEMBRA E INCUBACIN
-Agregar a la placas 15 ml del Agar Baird
Parker a 40 C, dejar solidificar.
-Tomar 0.1 ml de las tres ultimas diluciones
de la menor a mayor dilucin eh introducirlas
en la placa que contienen el agar solidificado.
-Expandir con ayuda de la esptula Drigalsky.
-Dejar solidificar eh invertir las placas.
-Incubar a 37 C/48h.
-Contabilizar las colonias de color negro con
halo de 20- 200 ufc

PRUEBA DE CONFIRMACIN COAGULASA
-Tomar un inculo con el asa de Kole de la
muestra e introducirlas en un tubo que
contenga infusin cerebro corazn e incubar a
37 C/24h.
-tomar 0.1 ml de la solucin que se incub y
adicionarlos en 0.3 ml de plasma de conejo e
incubar a 37 C/4h.
-observar si se formo cogulos.
-Si es el caso que no se formo ningn coagulo
dejar a temperatura ambiente por 24 horas
mas, y si aparece la formacin de cogulos
ser coagulasa positiva.
PLACA CANTIDAD DE
ESTAPHYLOCOCCUS AUREUS
Dilucin 10^-1 1
Dilucin 10^-2 1
Dilucin 10^-3 0
*Tomaremos la dilucin 10^-2 para determinar la
cantidad de microorganismos presentes en la
muestra.
10^-21 ufc/g
10^0.X ufc/g
X = 100 ufc/g
RESUSLTADO:
Numero de Estaphylococcus Aureus = 1x10^2
ufc/g
Se logro determinar staphylococcus aureus en los alimentos
analizados en el laboratorio.
Segn Pascual en microbiologa alimentaria: metodologa analtica
para alimentos y bebidas menciona para la contabilizacin de
Staphylococcus aureus se utiliza el agar Baird Parker enriquecida
previamente con telurito de potasio y solucin de yema de huevo; o
tambin se puede utilizar el agar Giolitti Cantoni.
Nuestra prctica se pudo realizar tal como lo menciona el autor, con la
utilizacin de Baird Parker Agar enriquecida con telurito de potasio y
solucin de yema de huevo.
Se recomienda usar siempre el metodo de asepsia al analizar el
alimento para evitar alguna otra contaminacion.
-Pascual Anderson (2000), microbiologa alimentaria:
metodologa analtica para alimentos y bebidas. Edit. Daz de
Santos. Madrid-Espaa.