BIENVENIDOS

ESTUDIO QUMICO Y EVALUACIN DE LA

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA
CORTEZA DE Zanthoxylum setulosum
(Rutaceae)

ESTUDIO QUMICO Y EVALUACIN DE LA
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA CORTEZA
DE Zanthoxylum setulosum (Rutaceae)
Miguel Jos Causil Vidal

Director:
Alberto Angulo Ortiz. M.Sc.

UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
DEPARTAMENTO DE QUMICA
MONTERA
2013


161 gneros y alrededor de 1700 especies.
Los trpicos y regiones templadas.
frica del sur y Australia.
Frutos ctricos, aceites esenciales y sustancias medicinales.
Campo industrial: Citrus (alimentos); Murraya (perfumes y
saborizantes); Amyris, Hortia y Zanthoxylum (maderas) y
entre otros usos.
Waterman, P. G., and Grundon, M. F. Academic Press. 1983, p.p. 11-12 y 301-308.
Angulo, A. A. Tesis de magster, Departamento de Qumica, Universidad Nacional de Colombia. 2001. p.p.
1-2, 17-18.

Arbolillos caducifolios de 4-6 m de altura, tallos
espinosos.
Amrica, Asia y frica.
Colombia (21 especies), en 23 departamentos.
Medicina tradicional.

Angulo, A. A., Cuca, L. E. Revista Colombiana de Qumica, 2002, 31, 87-93.


ESTUDIOS ESPECIES
Antimicrobial Z. xanthoxyloides
Citotxica Z. budrunga
Antiagregacin plaquetaria Z. integrifoliolum y Z. simulans
Antitumoral y letalidad hacia la Artemia
salina
Z. americanum
Antiplasmodial Z. syncarpum
Amebicida Z. liebmannianum
Antibacterial y antiinflamatoria Z. chalibeam
Antifngico Z. fagara, Z. elephantiasis y Z.
martinicense
Diguez, R., Rivas, Y., Prieto-Gonzlez, S., Garrido, G., & Molina-Torres, J. Acta farmacutica bonaerense,
2004, 23 (2), 243-251.

ESTUDIO QUMICO DEL GNERO
Zanthoxylum.
Alcaloides
O
C H
3
O
C H
3
N
+
CH
3
O
O
N
O
O
CH
3
O
CH
3
Queletrina
Fagarina
Yang, Y-P., Cheng, M-J., Teng, C-M., Chang, Y-L., Tsai, I-L., and Chen, I-S. Phytochemistry, 2002, 61, 567-572.
Muoz, M. A., Torrez, R., and Cassels, B. K. Journal of Natural Products, 1982, 45, 367-369.

Cumarinas
O O O C H
3
CH
3
CH
3
O
O
O
C H
3
CH
3
O
O O
C H
3
O
C H
3
O
O
CH
3
Aurapteno
9-[(3-metilbutil-2-enil) oxi]-7H-furo[3,2-]cromen-7-ona
Schinicoumarina
Louvores, E., Do Carmo, P., Da Silva, M. L., Da Silva, E. Revista Brasileira de Farmacognosia, 2002, 12, 29-30.
Chen, I-S., Lin, Y-C., Tsai, I-L., Teng, C-M., Ko, F. N., Ishikawa, T., and Ishii, H. Phytochemistry, 1995. 39, 1091-1097.
Flavonoides
O O H
OH
O
O
CH
3
C H
3
O
OH
OH
O O H
OH
OH
O
OH
OH
Hyperina
Quercetina
Arrieta, J., Reyes, B., Calzada, F., Cedillo-Rivera, R., and Navarrete, A. Fitoterapia, 2001, 72, 295-297.
Xiong, Q., Shi, D., and Mizuno, M. Phytochemistry, 1995, 39, 723-725.
Lignanos
O
O
O
CH
3
O
C H
3
OH
O
CH
3
O
C H
3
O H
O
O
O
CH
3
O
C H
3
O
CH
3
O
C H
3
Siringaresinol
Metilarctigenina
Patio Ladino, O. J., Cuca Surez, L. E. Scientia et Technica, 2007, 33, 171-172.
Angulo, A. A., Cuca, L. E. Revista Colombiana de Qumica, 2002, 31, 87-93.
Terpenos
CH
3
OH
C H
3
CH
3
O
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
O
CH
3
CH
3
H
O H
C H
3
C H
3
H
CH
3
H
CH
3
H
CH
2
C H
3
CH
3
C H
3
Timol
Cineola
Germacrona
Lupeol
Ngane, A. N., Biyiti, L., Amvam, P. H., and Bouchet, Ph. Journal of Ethnopharmacology, 2000, 70, 335-342.
De Garca, I., Calle, J., Reguero, M., and Nathan, J. Fitoterapia, 1989, 5, 447-448.
Patio, O., y Cuca, L. Biochemical Systematics and Ecology, 2010, 38, 853856.
Amidas
CH
3
N
O
H
CH
3
C H
3
O
NH
O
C H
3
O
C H
3
O
O
O
O NH
O
O
CH
3
Sanshool
Sinacarpamida
Armatamida
Ross, S. A., Sultana, G.N., Burandt, C.L., Elsohly, M.A., Mavais, J.P., and Ferreira, D. Journal of Natural Product, 2004,
67, 88-90.
Navarrete, A., and Hong, E. Planta Medica, 1996, 62, 250-251.
Kalia, N., Singh, B., and Sood, R. Journal of Natural Product, 1999, 62, 311-312.
Limonoides, cromonas y esteroles
O
O
CH
3
CH
3
H
O H
C H
3
C H
3
CH
3
O
O
CH
3
H
H
O
CH
3
O O
C H
3
OH O
CH
3
CH
3
CH
3
C H
3
O H
CH
3
H
CH
3
H
H
H
C H
3
21-acetil-3-oxo-glabretal
5-hidroxi-7-metoxi-2-pentilcromona
-sitosterol
Arruda, M., Fernandes, J., Viera, P., Da Silva, F., and Pirani, J. Phytochemistry, 1994, 36, 1303-1306.
Jimnez, C., Marcos, M., Villaverde, M., Riguera, R., Castedo, L., and Stermitz, F. A. Phytochemistry, 1989, 28, 1992-1993.
Arrieta, J., Reyes, B., Calzada, F., Cedillo-Rivera, R., and Navarrete, A. Fitoterapia, 2001, 72, 295-297.
TAXONOMA Y FITOQUMICA DE
Zanthoxylum setulosum.
Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Sapindales
Familia: Rutaceae
Gnero: Zanthoxylum
Especie: Setulosum
Nombre comn: "Aguijn amarillo", "Arcab", "Acab",
"Alcab", "Barbasco", "Tachuelo".
Angulo, A. A. Tesis de magster, Departamento de Qumica, Universidad Nacional de Colombia. 2001. p.p. 1-2, 17-18.
FITOQUMICA DE Zanthoxylum setulosum

N
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
N
O
O
O
Kokusaginina
Skimmianina
Kusunokinina
Angulo, A. A., Cuca, L. E. Revista Colombiana de Qumica, 2002, 31, 87-93.
Mora, S., Castro, V., Poveda, L., Chavarra, M., Murillo, R. Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas
Medicinales y Aromticas. 2011, 10(2), 155-158.
O
O
O
O
O
O
H
H
O
O
O
O
H
H
O
O
FITOQUMICA DE Zanthoxylum setulosum

Sesamina
ter isopentlico del pluviatol
Mora, S., Castro, V., Poveda, L., Chavarra, M., Murillo, R. Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas
Medicinales y Aromticas. 2011, 10(2), 155-158.
Walkera, T. M., Voglera, B., Moriarity, D. M., Haberc, W. A., Setzer, W. N. Natural Product Communications. 2011,
6 (12), 1807 1808.

FITOQUMICA DE Zanthoxylum setulosum

O
O H
O
H
OH
O
-phelandreno
(-)-loliolide
-pineno
Sesquichamaenol
Boehme, A. K., Noletto, J. A., Haberz, W. A., and Setzer, W. N. Natural Product Research, 2008, 22(1), 3136.
Okunade, A. L., and Wiemer, D. F. Journal of Natural Products. 1985, 48, 472-473.
Walkera, T. M., Voglera, B., Moriarity, D. M., Haberc, W. A., Setzer, W. N. Natural Product Communications. 2011, 6
(12), 1807 1808.
O O H
OH O
H
H
H
OH
O O H
OH O
H
H
H
OH
FITOQUMICA DE Zanthoxylum setulosum

O
O H
(2S)-naringenina
(2R)-naringenina
22-oxo-24-metilcolest-5en-3-ol
Angulo, A. A., Cuca, L. E. Revista Colombiana de Qumica, 2002, 31, 87-93.
O O O
O O
H
NH
NH
O
O
O
O
FITOQUMICA DE Zanthoxylum setulosum

Lichexantona
Acetato de aurantiamida
Mora, S., Castro, V., Poveda, L., Chavarra, M., Murillo, R. Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas
Medicinales y Aromticas. 2011, 10(2), 155-158.
Walkera, T. M., Voglera, B., Moriarity, D. M., Haberc, W. A., Setzer, W. N. Natural Product Communications. 2011,
6 (12), 1807 1808.


Antioxidantes
Naturales
Polifenlicos Flavonoles
Vitaminas y
anlogos
Sintticos
Zamora, J. D. Revista chilena de nutricin, 2007, 34, 23-25.
Bendala-Tufanisco, E., and Grisola, S. Archivos de la Sociedad Espaola de Oftalmologa. 2007, 82, 92-96.
Galleano, M., Verstraeten, S.V., Oteiza, P.I., Fraga, C.G. Archives of Biochemistry and Biophysics. 2010, 501(1), 23-30.
Balsano, C., Alisi, A. Current Pharmaceutical Design. 2009, 15(26), 3063-73.
Polifenlicos
cidos ferlico Protocatequico
Flavonoles
Myrcetina
Vitaminas y anlogos
cido ascrbico -caroteno
Avello, M., Suwalsky, M. Atenea, 2006, 494,161-172.
Middleton, E. J., Kandaswami, C. Chapman and Hall, 2001, 619-652.
EXTRS OXIDATIVO

R

, (

O
2
)
-
,

OH
y H
2
O
2

Dao oxidativo
a molculas
celulares
Etiologa de
varias
enfermedades
Yun-Chin, C., Chin-Tzu, C., Kai-Yun, T., Su-Tze, C. Food Chemistry. 2006, 97, 418425.
Eiji, Y., Minoru, I., Osamu, K., Tetsuji I. Food Chemistry. 2007, 100, 171177.
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Mtodos
espectrofotomtricos
Reaccin con el
radical catinico
ABTS
Reaccin con el
radical DPPH
Rojano, B. A., Gaviria, C. A., Gil, M. A., Saenz, J. A., Schinella, G., Tourner, H. Vitae, Revista de la Facultad de
Qumica Farmacutica, 2008, 15, 173-181.
Changha, L., Jeyong, Y. Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry. 2008, 197, 232238.
OBJETIVOS
GENERAL

Realizar un estudio qumico y evaluacin de la actividad
antioxidante de la corteza de Zanthoxylum setulosum (Rutceae),
utilizando los mtodos de radical DPPH y radical catinico ABTS.
OBJETIVOS
ESPECFICOS

Extraer y purificar metabolitos secundarios de la corteza de
Zanthoxylum setulosum (Rutaceae), mediante el uso de tamizaje
fitoqumico y diferentes tcnicas cromatogrficas.

Establecer la estructura de los compuestos aislados, mediante el
empleo de tcnicas espectroscpicas (RMN-
1
H y RMN-
13
C mono
y bidimensional).

Identificar las sustancias contenidas en la fraccin voltil, mediante
la utilizacin de cromatografa de gases acoplada a espectrometra
de masas.
OBJETIVOS
ESPECFICOS


Evaluar la capacidad antioxidante de extractos y metabolitos
secundarios aislados por medio de los mtodos de radical 2,2-
difenil-1-picril-hidrazilo (DPPH

) y radical catinico 2,2-azino-

bis-3-etilbenztiazolin-6-sulfonato (ABTS
+
).

Contribuir al conocimiento qumico de la familia Rutaceae
fundamentalmente del gnero Zanthoxylum.



Cromatplacas de slica-gel 60 F
254
.
Cromatplacas de slica gel 60 HF
254
de 1 mm.
Slica-gel 60f
254
de 0.063-0.2 mm.
Etanol 96% (EtOH).
Diclorometano (DCM).
acetato de etilo (AcOEt).
Hexno (Hex.).
Eter de petrleo.

Metanol (MeOH).
Cloroformo (CHCl
3
).
Cloroformo deuterado (CDCl
3
).
Dimetilsulfxido.
El radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH)
El radical catinico cido 2,2-azino-bis-(3-
etilbenzotiazolin-6-sulfnico) (ABTS)
Persulfato de potasio
Agua estril U.S.P.

Rotavaporador Buchi B-480.
Balanza Analtica.
Espectrofotmetro de luz UV Thermo Espectronic
(GENESIS 20, modelo 4001/4).
Cromatgrafo de gases Agilent 7890A acoplado a un
espectrmetro de masas Agilent 5975C con una fuente
de ionizacin a 70 eV.
Columna capilar HP5MS, 30 m, 0.25 mm de dimetro
interno y 0.25 mm de espesor de pelcula.
Bruker space 400, operando a 400 MHz para
1
H y 100
MHz para
13
C.
OBTENCIN DEL EXTRACTO ETANLICO
DE LA CORTEZA DE Z. setulosum.
Corteza
Z. setulosum
Material vegetal
(4658g)
EtOH 96%
Concentrado
Secado
Pulverizado
Extracto
ter de petrleo
(125,6g)
Marco
ter de petrleo
Extracto Etanlico
(110,92g)
Marco
PARTICION DEL EXTRACTO
ETANOLICO DE LA CORTEZA
FRACCIONAMIENTO DEL SUBEXTRATO
DE DICLOROMETANO
Extracto DCM (ZCD)
(5.13g)
CC: Silicagel; DCM/AcOEt (1:0, 95:5, 9:1, 8:2, 6:4, 0,1)
632 Fracciones
CCD
34 subfracciones
ZCD-6
(65mg)
ZCD-7
(38mg)
ZCD-10
(120mg)
ZCD-8,9
(281mg mg)
Cristalizacin, (MeOH-DCM)
CC: Sephadex (LH-20); MeOH
Compuesto A
(28.1mg )
Compuesto A
(26.9mg )
CC: Sephadex; Hex/AcOEt (8:2)
23 Fracciones
CCD
ZCD-8,9-1
(70mg)
ZCD-8,9-2
(110mg)
ZCD-8,9-3
(7mg)
ZCD-8,9-4
(94mg)
Cristalizacin, (MeOH-DCM)
Compuesto B
(50.1mg )
Cristalizacin,
(Hex, MeOH-DCM)
Compuesto B
(48.5mg )
ZCD-15
(90mg)
ZCD-15-3
(19mg)
Cristalizacin,(MeOH)
CC: Sephadex (LH-20); MeOH
(CCDP), CH
2
Cl
2
/MeOH; (99:1).
ZCD -15-3-P
3
(6.5mg)
OBTENCIN DE LA FRACCION VOLATIL
DE LA CORTEZA DE Z. setulosum.
EXTRACTO DE TER
DE PETRLEO
(300mg)
40 Fracciones
CC: Silicagel; ter de petrleo
7 Subfracciones
CCD
ZCEp-2
(40mg)
Fraccin voltil
CG-EM

Extracto etanlico, y subextractos de hexano, diclorometano,
cloroformo y acetato de etilo. Compuesto B.

Mtodos de ABTS y DPPH.

Pruebas y anlisis por triplicado.
100 * 1 %
(
(

|
|
.
|

\
|

=
ferencia re
blanco muestra
A
A A
Inhibicin

Formacin de la solucin radical ABTS

a. Reaccin del ABTS +
persulfato de sodio.

b. Oscuridad por 24h.
Calibracin: Absorbancia 0,700 0,05 a 732nm

c. Ajustar blanco en el
equipo.

d. Diluir con solucin
buffer fosfato (pH: 7.3
7.4)
Medicin en las muestras
M = 40 mL m + 1960 mL
ABTS
+

B = 40 mL m + 1960 mL
buffer fosfato
R = 40 mL DMSO + 1960
mL ABTS
+

Oscuridad (30min.)
Absorbancia a 732 nm
Reaccin (M)
Blanco (B)
Referencia (R)
Muestra (m)

Formacin de la solucin radical DPPH

a. Solucin de DPPH en
metanol.

b. Oscuridad por 24h.
Calibracin: Absorbancia 0.300 0,05 a 517 nm

c. Ajustar blanco en el
equipo.

d. Diluir con metanol.
Medicin en las muestras
M = 40 L m + 1960 L
DPPH
B = 40 L m + 1960 L
metanol
R = 40 L DMSO + 1960
L DPPH
Reaccin (M)
Blanco (B)
Referencia (R)
Muestra (m)
Oscuridad (30min.)
Absorbancia a 517 nm
RESULTADOS Y ANLISIS
ELUCIDACIN ESTRUCTURAL
DEL COMPUESTO A.
Elucidacin estructural del compuesto A.
Espectro RMN-
1
H (CDCl
3
, 400MHz). Compuesto A.
Elucidacin estructural del compuesto A.
Espectro RMN -
13
C (CDCl
3
, 100 MHz) Compuesto A.
COMPUESTO A.
(3, 13)-Lup-20(29)-en-3-ol
Lupeol
CH
2
C H
3
CH
3
H
CH
3
CH
3
O H
C H
3
CH
3
H
H
H
CH
3
Gallo, M. B., Sarachine, M. J. International Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences. 2009, 3, 46-66.
Silverstein, R. Webster, F., Kiemle, D. Seventh edition. John Wiley & Sons. United States of America. 2005, p.p. 140 -
176; 204 - 228; 245 - 284.
ELUCIDACIN ESTRUCTURAL
DEL COMPUESTO B.
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro RMN-
1
H (CDCl
3
, 400MHz), compuesto B.
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro RMN-
1
H (CDCl
3
, 400MHz), compuesto B.
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro RMN-
1
H (CDCl
3
, 400MHz), compuesto B.
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro RMN-
13
C (CDCl
3
, 100 MHz), compuesto B.
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro DEPT 135 ( = 35 138 ppm), compuesto B.
Elucidacin estructural del compuesto B.
El compuesto B esta constituido por:


6- Cuaternarios (C) Aromticos
2- Cuaternarios (C) Alifticos
6- Terciarios (CH) Aromticos
2- Terciarios (CH) Alifticos
4- Secundario (CH
2
)
20- Carbonos
(C)
172.5
149.1
148.3
147.9
146.5
131.4
128.1
125.8
(CH)
137.2
126.0
122.0
109.1
108.7
108.6
108.4
39.8
(CH
2
)
101.7
101.0
69.4
37.5
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro HMQC (
1
J
C-H
) del compuesto B.
ppm (t2)
6.60 6.70 6.80 6.90 7.00 7.10
105.0
110.0
115.0
120.0
125.0
ppm (t1)
C
H
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro HMQC (
1
J
C-H
) del compuesto B.
C H
137.2 7.48
126.0 7.07
122.0 6.63
109.1 6.66
108.7 6.86
108.6 7.03
108.4 6.73
101.7 6.04
101.0 5.93
69.4 4.24
39.8 3.73
37.5 2.98 y
2.57
C
H
Elucidacin estructural del compuesto B.
En base al anlisis realizado a los espectros de RMN (RMN-
1
H, RMN-
13
C, DEPT
135, HMQC), se plantearon estructuras parciales:
O
O
H
H
H
O
O
H
H
H
H
H
H
O
O
H
H
H
7.07
6.86
7.03
6.63
6.66
6.73
2.57
2.98
3.73
109.1
108.4
122.0
4.24
69.4
39.8
37.5
172.5
108.6
108.7
126.0
7.48
137.2
Estructura parcial A
Estructura parcial E
Estructura parcial C
Estructura parcial D
Estructura parcial B
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro HMBC (
2 y 3
J
C-H
) del compuesto B.
7.48
108.6
172.5
126.1
C
H
Elucidacin estructural del compuesto B.
O
O
H
H
H
H
O
O
H
H
172.5
108.6
126.0
7.48
Correlaciones ms importantes en el HMBC (
2y3
J
C-H
) del compuesto B
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro HMBC (
2 y 3
J
C-H
) del compuesto B.
C
H
4.24
37.5
172.5
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro HMBC (
2 y 3
J
C-H
) del compuesto B.
C
H
2.98 2.57
109.1
122.0
131.4
Elucidacin estructural del compuesto B.
O O
H H
H
H
H
O
O
H
H
H
4.24
2.98
2.57
37.5
172.5
109.1
122.0
131.4
Correlaciones ms importantes en el HMBC (
2y3
J
C-H
) del compuesto B
Elucidacin estructural del compuesto B.
En base al anlisis del espectro HMBC, que permiti conectar las estructuras
parciales se plantean la siguiente estructura:
O
O
CH
2
O
O
H
H
H
H
H
H
O CH
2
O
H
H
H
H
H
H
108.6
126.0
7.48
172.5
4.24
109.1 122.0
2.57
2.98
39.8
37.5
131.4
147.9
5.93
6.04
149.1
Correlaciones ms importantes en el HMBC (
2y3
J
C-H
) del compuesto B
O
O
CH
2
O
O
H
H
H
H
H
H
O CH
2
O
H
H
H
H
H
H
Elucidacin estructural del compuesto B.
Espectro COSY (
2y3
J
H-H
) (ampliacin 2.40 7.70ppm). Compuesto B.
7.48
4.24
3.73
6.73
6.63
7.07
6.86
3.73
2.98
2.57
Elucidacin estructural del compuesto B.
O
O
CH
2
O
O
H
H
H
H
H
H
O CH
2
O
H
H
H
H
H
H
7.07
6.86
6.63
6.73
7.48
2.57
2.98
3.73
4.24
Correlaciones COSY del compuesto B.
7,8-deshidrohinokinina (Savinina)
Yang, C.H., Cheng, M.J., Lee, S.J., Yang, C.W., Chang, H.S., Chen, I.S. Chemistry & Biodiversity. 2009, 6(6), 846-57.
Mora, S., Castro, V., Poveda, L., Chavarra, M., Murillo, R. Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales
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Datos espectrales de RMN
1
H y
13
C del compuesto B (savinina).
PROPOSICIN DE ESTRUCTURA DEL
COMPUESTO ZCD-15-3-P
3
.
PROPOSICIN DE ESTRUCTURA DEL
COMPUESTO ZCD-15-3-P
3
.
Espectro RMN-
1
H (CD
3
OD, 200 MHz) de la fraccin ZCD-15-3-P
3
.
4.84
COMPUESTOS PRESENTES EN LA
FRACCIN VOLTIL (ZCEp-2)
COMPUESTOS PRESENTES EN LA FRACCIN
VOLTIL (ZCEp-2)
Perfil cromatogrfico de los componentes de la fraccin voltil (ZCEp-2)
1 2
3
4
5
6
8
7
9
10
11
12
13
COMPUESTOS PRESENTES EN LA
FRACCIN VOLTIL (ZCEp-2)

Espectro de masas del Germacreno D. IE, 70 eV.
(M-C
3
H
7
)
+

M
+

+

m/z 204
CH
+
CH
3
-
m/z 189
CH
+
CH
+
m/z 119
m/z 147
-
C H
2
CH
2 -
CH
+
CH
+
-C
3
H
7
m/z 161
m/z 133
C H
2
CH
2
.
-
-
C H
2
CH
2 -
[C
8
H
9
]
+
m/z 105
-C
3
H
6
[C
7
H
7
]
+
m/z 91
Esquema de la ruta de fragmentacin del
Germacreno D. EI, 70 eV
Steliopoulos, P. and Mosandl, A. European Journal of Mass Spectrometry. 2001, 7, 503 508.

ENSAYOS PRELIMINARES
ZCE, ZCH, ZCD, ZCC y ZCA. Mtodos ABTS y DPPH.
Capacidad antioxidante de la savinina.
La metodologa ABTS que superaban 90% de inhibicin.
Metodologa DPPH, el extracto de hexano no supero el 20%.
El ensayo preliminar a la savinina, no supero el 10% de inhibicin.
Anlisis de varianza (ANOVA) de un factor y la prueba de Tukey
(=0,05; p<0,05).
Concentracin inhibitoria media (IC
50
) se utiliz regresin lineal.
Concentracin (mg/L)
1 4 7 10 15 Referencia
Abs. 1 0,535 0,454 0,383 0,282 0,150 0,555
Asb. 2 0,538 0,452 0,380 0,285 0,155 0,556
Asb. 3 0,537 0,448 0,391 0,287 0,155 0,555
Promedio 0,537 0,451 0,385 0,285 0,153 0,555
Blanco 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001
%Inh. 2,76 18,32 30,51 48,89 72,55
ENSAYO DE ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE PARA ZCE
Ensayo con la metodologa ABTS.
ENSAYO DE ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE PARA ZCE
R = 0,9978
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 2 4 6 8 10 12 14 16
%

I
N
H
I
B
I
C
I

N
CONCENTRACIN (mg/L)
ENSAYO ABTS (ZCE)
Grfica %Inh Vs Concentracin del extracto etanlico de la corteza de Z. setulosum.
IC
50
= 10.47 mg/L
ENSAYO DE ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE PARA ZCE
Concentracin (mg/L)
40 60 80 90 100 Referencia
Abs. 1 0,184 0,137 0,102 0,080 0,073 0,290
Asb. 2 0,183 0,140 0,104 0,079 0,068 0,295
Asb. 3 0,186 0,133 0,104 0,080 0,073 0,309
Promedio 0,184 0,137 0,103 0,080 0,071 0,298
Blanco 0,003 0,005 0,005 0,005 0,006
%Inh. 39,15 55,82 67,00 74,94 78,08
Ensayo con la metodologa DPPH.
ENSAYO DE ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE PARA ZCE
Grfica %Inh Vs Concentracin del extracto etanlico de la corteza de Z. setulosum.
R = 0,9964
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
0 20 40 60 80 100 120
%

I
N
H
I
B
I
C
I

N
CONCENTRACIN (mg/L)
ENSAYO DPPH (ZCE)
IC
50
= 53,05 mg/L
ENSAYO DE ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE
Valores de IC
50
para los diferentes extractos con las metodologas ABTS y DPPH.
Extractos IC
50
(mg/L)
(ABTS)
IC
50
(mg/L)
(DPPH)
ZCH 31,09 NS
ZCD 22,74 82,85
ZCC 12,25 62,54
ZCA 8,24 32,78
ZCE 10,47 53,05
Savinina NS NS
CONCLUSIONES

Del subextracto de diclorometano de la corteza de Zanthoxylum
setulosum se aislaron dos sustancias, una de ellas se trata del
triterpeno lupeol, y la otra sustancia se trata del lignano savinina.

El lignano savinina se reporta por primera vez en la corteza del
tallo de la especie Zanthoxylum setulosum.

Del subextracto de diclorometano de la corteza de Zanthoxylum
setulosum, tambin se aisl compuesto ZCD-15-3-p
3
, que por poca
informacin espectroscpica no fue identificado.
De la fraccin voltil obtenida a partir del extracto de ter de
petrleo (desengrase de la corteza) de Zanthoxylum
setulosum, fueron detectadas 13 sustancias, de las cuales se
identificaron 11. Todas las sustancias identificadas de la
fraccin voltil son de naturaleza sesquiterpeno.

Los ensayos de actividad antioxidante para el extracto
etanlico y sus subextractos presentaron buenos resultados
con las metodologas ABTS y DPPH, siendo el subextracto ZCA
el ms promisorio de todos los ensayados.

Los ensayos de actividad antioxidante para la savinina no
fueron satisfactorios, ya que en los ensayos preliminares el
porcentaje de inhibicin no supero el 10% con ambas
metodologas.

La confiabilidad de los resultados en los ensayos de actividad
antioxidante fue comprobada realizando un anlisis de
varianza de un factor (diseo experimental completamente
aleatorizado) para cada ensayo, obteniendo buenos resultados
con un grado de confianza del 95%.



1. Se recomienda continuar con el proceso de aislamiento y
purificacin de los extractos ZCC y ZCA que no se alcanzaron a
procesar, para obtener los compuestos responsables de la buena
actividad antioxidante presentada por los diferentes extractos.
Similarmente continuar el aislamiento y purificacin de los
subextractos de ZCD que no fueron trabajados.

2. Purificar ms cantidad de la sustancia ZCD-15-3-P
3
y completar
el estudio espectroscpico para la elucidacin de la estructura
completa.

3. Realizar otras pruebas de actividad biolgica sobre el extracto
inicial y los compuestos aislados, para contribuir en la bsqueda
de sustancias biolgicamente activas de plantas colombianas del
genero Zanthoxylum.

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