Planejamento e Sntese de Novos Derivados

Aminoguanidnicos Visando Atividade

Leishmanicida

Paulo Henrique Barcellos Frana
Orientador: Prof. Dr. Joo Xavier de Arajo-Jnior
Co-orientador: Prof. Dr. Thiago Mendona de Aquino
Universidade Federal de Alagoas
Instituto de Qumica e Biotecnologia
Programa de Ps-Graduao em Qumica e Biotecnologia



Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Base forte (pka 13,6) => encontra-se protonado em pH
fisiolgico
Estabilizao por deslocalizao da carga





Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Possibilidade de diferentes tipos de interaes em
macromolculas
Interao eletrosttica (protonao)
Ligaes de hidrognio
Interao p-ction
Empilhamento p
Interao ction-ction





Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Interao eletrosttica





Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Ponte salina





Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Interao p-ction




Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Empilhamento p




Introduo
Consideraes gerais sobre o grupo guanidina

Interao ction-ction




Introduo
Mtodos de obteno de guanidinas

Eletrfilos contendo dois ou mais tomos de nitrognio
Procedimento de Rathke 1884


SCH
2
CH
3
HN
NH
2
HCl
NH
3
NH
2
HN
NH
2
HCl
C
2
H
5
SH
Rathke, B. Chem. Ber., v. 17, p. 297, 1884
Introduo
Introduo
Mtodos de obteno de guanidinas: tioureias

Grande variedade a partir de isotiocianatos



Converso direta guanidina

Converso do tomo de enxofre em um grupo abandonador

S R
1
HN
NHR
2
H
2
N R
2
R
1
N C S
Introduo
Mtodos de obteno de guanidinas: tioureias

Formao de intermedirio carbodiimida


Grupos protetores aumentam a
reatividade
Cunha, S.; Rodrigues, M. T. Tetrahedron Letters, v.
47, p. 6955-6956, 2006
S XHN
NHX
X= Boc, Cbz
Introduo
Obteno a partir de isotioureias

S-alquilao: formao de um grupo abandonador
Rendimentos elevados
Facilidade de preparao
Variedade de aminas

Liberao de metanotiol

Introduo
Consideraes gerais sobre leishmaniose

Causada por mais de 20 espcies de Leishmania

Diferentes manifestaes clnicas






Doena negligenciada


Cutnea
Mucocutnea Visceral
Introduo
Consideraes gerais sobre leishmaniose



Nona maior causa de
doena infecciosa no
mundo

20.000 mortes
por LV
anualmente

1.000.000 de
casos de LC
entre 2008-2013

310.000.000
indivduos em
reas de risco

Introduo
Consideraes gerais sobre leishmania

Medicamentos utilizados

Antimoniato de meglumina Estibogliconato de sdio
Anfotericina B
Pentamidina
Introduo
Consideraes gerais sobre leishmania

Medicamentos utilizados

Miltefosina
Paromomicina
Introduo
Consideraes gerais sobre leishmania

Problemas dos medicamentos: elevada toxicidade e
resistncia

Antimoniais pentavalentes: flebotoxicidade, cardiotoxicidade em
at 9% dos pacientes
Anfotericina B: toxicidade aguda, nefrotoxicidade
Pentamidina: hipoglicemia, pancreatite aguda, nefrotoxicidade
Miltefosina: longo tempo de meia-vida, teratognico
Paromomicina: resistncia in vitro




Introduo
Guanidinas com atividade leishmanicida
CI
50
(mM) amastigotas = 5,2
CI
50
(mM) amastigotas = 9
CI
50
(mM) amastigotas = 2,39
CI
90
(mM) amastigotas = 11,27 CI
50
(mM) amastigotas = 3
CI
50
(mM) promastigotas = 29
Introduo
Guanidinas com atividade leishmanicida
CI
50
(mM) amastigotas = 2,59
CI
50
(mM) promastigotas = 6,02
CI
50
(mM) amastigotas = 0,65
CI
50
(mM) promastigotas = 1,75
CI
50
(mM) amastigotas = 3,7
Objetivos
Sntese de derivados aminoguanidnicos com potencial
atividade leishmanicida

Sntese de derivados 2-arilidenoaminoguanidinas

Sntese de derivados 2-benzilidenoaminoguanidinas N-
substitudas

Realizar um estudo qualitativo da relao estrutura-atividade

Planejamento
Variao de duas regies






Substituio do anel aromtico e a substituio da fenila por
alguns heterociclos.
Substituio da amina w guanidina
Planejamento
Sntese de guanidinas monossubstitudas

18 anlogos
iniciais
Anis
diversamente
substitudos
Heterociclos
Planejamento
Sntese das benzilidenoaminoguanidinas N-substitudas
Compostos ativos da primeira srie

Avaliar efeitos estricos sobre a atividade
NR1R2 =
Metodologia
Manuteno da linhagem de macrfagos e infeco

Manuteno em 10% SFB, 2% urina, 2mM de piruvato e 2 mM
de L-glutamina

Semeadas em meio DMEM com 10% SFB (3x10
5
clulas/poo)

Infeco com formas promastigotas (10 parasitas: 1
macrfago)

Incubao a 37 C e 5% CO2

Lavagem dos macrfagos com DMEM
Metodologia
Manuteno da linhagem de macrfagos e infeco

Cultura dos macrfagos em DMEM com aminocidos e
piruvato

Manuteno a 37 C e atmosfera mida contendo 5% CO2

Lavagem com DMEM

Acrscimo de meio de Schneider, 10% SFB, 2% de urina e
aminocidos e incubao a 27 C

Manuteno das promastigotas em meio de Schneider

Metodologia
Avaliao da atividade leishmanicida

Manuteno em meio de Schneider com 10% SFB, 2% urina e
2 mM de L-glutamina

Promastigotas de L. brazilliensis semeadas (1x10
5

clulas/poo)

Adio em concentraes crescentes dos derivados (0,1 100
mM)

Contagem de promastigotas aps 48 horas
Resultados e Discusso
Comparao dos rendimentos


Substncia Rend (%)
MO
Rend (%)
Refluxo
a
Substncia Rend (%)
MO
Rend (%)
Refluxo
a
1 83 89 10 92 91
2 94 95 11 96 92
3 94 93 12 80 89
4 98 92 13 94 83
5 88 98 14 90 71
6 94 98 15 85 92
7 92 81 16 85 90
8 93 89 17 90 71
9 91 71 18 85 91


a
Tempos reacionais maiores que 19 horas, conforme Epifnio (2011)
Resultados e Discusso
***p < 0,01 em relao ao grupo DMSO 0,1%
Substncia CI
50
(mM) EM (mM)

Substncia CI
50
(mM) EM (mM)

Pentamidina
4,70 0,49 92,20 4,13***

1
- -
10
0,80 0,06 79,68 0,70***
2
- -
11
82,13 1,56 62,17 1,32***
3
>100 NA
12
- -
4
>100 NA
13
0,57 0,03 90,19 0,18***
5
- -
14
- -
6
4,00 0,67 -
15
- -
7
- -
16
- -
8
0,49 0,03 67,60 0,46***
17
- -
9
5,6- 0,55 85,46 0,46***
18
- -
Atividade leishmanicida de 2-arilidenoaminoguanidinas


Resultados e Discusso
Relao estrutura-atividade


Resultados e Discusso
Sntese dos produtos finais
Resultados e Discusso
Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas:
proposta inicial
Maior reatividade

Intermedirios comuns
Equilbrio tautomrico em isotiossemicarbazonas
Resultados e Discusso
Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas:
proposta inicial
Formao de vrios produtos colaterais

Dificuldade de purificao
Resultados e Discusso
Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas
Resultados e Discusso
Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas
Resultados e Discusso
Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas



Substncia Rendimento
(%)
a

Substncia
(%)
Rendimento
(%)
b

Substncia
(%)
Rendimento
(%)
c

8a 35 10a
d
13a 53
8b 48 10b 44 13b 34
8c 20 10c 30 13c 34
8d 48 10d 11 13d 51
8e 67 10e 48 13e
d

a
Tempo reacional menor 15 horas;
b
Tempo reacional menor que 20 horas;
c
Tempo
reacional maior que 24 horas;
d
No foi possvel calcular rendimento, pois o produto
apresentava impurezas aps cromatografia, incluindo produto de partida at 48 horas
de reao.
Resultados e Discusso
Rasmussen et al (1988) sintetizaram 99 guanidinas N,N,N-
trissubstitudas

Rendimentos variveis (10 98%)





A introduo de substituintes aromticos em R
3
prolonga os
tempos reacionais








Resultados e Discusso
Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas:
micro-ondas




Composto Rendimento (%)
33
45
40
minutos
Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: 2-arilidenoaminoguanidinas

Todos os espectros esto em conformidade com Epifnio
(2011)


Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: tiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: tiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: tiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: Elucidao estrutural: 2-
benzilidenoaminoguanidinas N-substitudas


Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: 2-benzilidenoaminoguanidinas N-
substitudas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: 2-benzilidenoaminoguanidinas N-
substitudas

Resultados e Discusso
Elucidao estrutural: 2-benzilidenoaminoguanidinas N-
substitudas

Concluses e Perspectivas
De acordo com os resultados obtidos conclui-se que a metodologia utilizada para
a sntese das arilidenoaminoguanidinas em micro-ondas permitiu a diminuio
considervel dos tempos reacionais para a obteno dessas substncias,
mantendo ao mesmo tempo, os rendimentos elevados do mtodo em refluxo

Os 18 prottipos arilidenoaminoguanidnicos apresentaram elevada potncia
contra promastigotas de L. braziliensis. No obstante a necessidade de utilizar
menores concentraes para determinar a CI
50
de vrios dos prottipos
sintetizados, a reside a possibilidade de se obter substncias to potentes
quanto a anfotericina B.

As novas modificaes que resultaram na preparao das
2.benzilidenoaminoguanidinas N-substitudas visam avaliar o efeito da
introduo de um segundo anel aromtico sobre a atividade, j que muitas das
substncias descritas na literatura apresentam aneis benznicos ou equivalentes
heterocclcicos. Portanto, espera-se avaliar o efeito dessa nova srie de anlogos
sobre espcies de leishmania e estabelecer a relao estrutura-atividade desses
compostos.
Agradecimentos
Prof. Dr. Joo Xavier de Arajo-Jnior
Prof. Dr. Thiago Mendona de Aquino
Prof. Antnio Euzbio Goulart Santana
Profa. Dra. Elita Scio Fontes
Profa. Dra. Isis Martins Figueiredo
Profa. Dra. Magna Suzana Alexandre Moreira
Mariana da Silva Santos