TEMAS A DESARROLLAR

Conceptos generales

Clasificacin
La elucin en cromatografa en columna
Resolucin
Sistemas cromatogrficos (reparto, adsorcin,

intercambio inico y exclusin molecular)

Cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC)

Cromatografa de gases

Origen
A principios del siglo XX, el botnico
ruso Tswett separ pigmentos
vegetales pasando soluciones de
estos pigmentos por una columna
de vidrio empaquetada con CaCO3.
Las especies separadas aparecan
como bandas de colores, lo que dio
origen al nombre del mtodo

chroma = color graph = escribir

Un sistema cromatogrfico consta de dos

fases

Fase mvil (lquida o gaseosa): contiene los

componentes a separar y fluye a travs de la fase
estacionaria

Fase estacionaria (lquida o slida): a travs

de la cual fluye la fase mvil y donde quedan
momentneamente retenidos los componentes
de la muestra

Definicin
Cromatografa: tcnica separativa donde
los componentes de una muestra se
distribuyen entre dos fases (FM y FE), como
consecuencia de su diferente afinidad hacia
dichas fases. La separacin se basa en las
distintas velocidades de migracin de los
analitos, determinadas por el tiempo que
permanecen en cada fase

Clasificacin
FM

FE

Mtodo

Interaccin

lquida

L-L y L-FL

slida

L-S

resina i.i.

Inter. Inico

gel poroso

exclusin

otras

afinidad

Gaseosa

lquida

G-L y G-FL

particin G-L

(cromatografa
gaseosa)

slida

G-S

adsorcin

Lquida
(cromatografa
lquida)

particin L-L
adsorcin
intercambio
inico
tamizado
reaccin
especfica

Fluido supercrtico (cromatografa de fluidos supercrticos)

Clasificacin
De acuerdo a la disposicin fsica de la FE
Planar

papel

capa
delgada

Columna

Cromatografa en columna: elucin

FM

Muestra

FM

FM

FM

A+B
B
A
B
A
B

A
t0
t1
Anlisis cualitativo y
cuantitativo

t2

t3

Detector

t4

Objetivo de la cromatografa
resolver los componentes de una muestra
Cromatograma con
picos no resueltos
Mejora por aumento
en la separacin de
bandas
Mejora por
disminucin del ancho
de bandas

Concentracin (CE)

Distribucin de A y B dentro de la columna

t1
t2
t3
BA

Distancia de migracin (L)

El ensanchamiento de cada banda se produce a

una velocidad menor que su desplazamiento se
logran separaciones exitosas

Teoras del proceso cromatogrfico

La teora del proceso cromatogrfico debe
explicar las variables que influyen en la velocidad
de migracin de los analitos y en el
ensanchamiento de las bandas
Teora de los platos: concepto de N y H (similitud
con columna de destilacin fraccionada). Explica la
forma gaussiana de las bandas pero no su
ensanchamiento durante el proceso cromatogrfico.
Teora cintica: La columna opera en situacin de
no-equilibrio. Nuevo concepto de N y H

SEAL DETECTOR

Cromatograma
tR
tR

tM

compuesto
no retenido
por FE

analito

TIEMPO

Isotermas de reparto y adsorcin

Cromatografa lquida

Cromatografa de adsorcin
mda/mte

CE

CM

CM
masa adsorbida/masa adsorbente

Constantes termodinmicas
CE Mide la distribucin del
Constante de reparto K =
CM analito entre FE y FM
nE Describe la velocidad de
Factor de retencin
k= n
(factor de capacidad)
M migracin del analito en
la columna
kB Mide la selectividad de
Factor de separacin
(factor de selectividad) a = kA la columna de un
analito respecto a otro

Relacin entre las constantes termodinmicas y

el tiempo de retencin
velocidad lineal del soluto

v = L/tR

velocidad lineal de la FM

u = L/tM

velocidad relativa del analito dentro de la columna

L/tR
v/u =
L/tM

v/u = tM/tR

La velocidad relativa tambin se puede definir a

partir de la fraccin molar del soluto en la FM
v/u =

nM
nM + nE

1
1 + nE/nM

1
1+k

Relacin entre las constantes termodinmicas y

el tiempo de retencin
velocidad relativa
v/u = tM/tR

v/u =

1
1+k

Igualando los segundos miembros de ambas

expresiones
tM
tR

1
1+k

tR = tM (1 + k)

tR = tM (1 + K VE/VM)

k=

tR - tM
tM

seal detector

Ancho de banda

punto
de
inflexin

W= 4t

tiempo

Parmetros relacionados con el ancho de banda

Eficiencia

NyH

N = L/H
N = 16 (tR/W)2

N = 16 (tR / W)2
Demostracin

H = s2 /L
s2 t2
s t
= 2
=
2
L
tR
L tR

s L
=
t
tR

recordando que: W = 4t
2

H
W
=
L 16 tR2

L
tR
= 16
H
W
N

H
t2
= 2
L
tR

t = W/4
2

N = 16 (tR / W)2

Ecuaciones relacionadas con la eficiencia

Relacionan la altura de plato terico con los
procesos dispersivos que ocurren dentro de la
columna (A, B y C) y la velocidad de la fase mvil
Ecuacin de van Deemter
H = A + B/m + Cm
resistencia a la
difusin en
transferencia de
difusin
remolino
longitudinal masa

Otra ecuacin

H = A + B/m + CEm + CMm

Difusin en remolino

3
3
2

A = 2 dp
constante de
empaque

dimetro
medio de
partculas

Direccin de FM

Difusin longitudinal

B = 2 DM

factor de obstruccin
coeficiente difusin del
analito en FM

Resistencia a la transferencia de masa

Desde y hacia la FE: CE
direccin de elucin

t1

t2

FM
FE

FM
FE

Resistencia a la transferencia de masa

2

FE lquida

FE slida

qkdf
CE =
(1+ k)2DE

CE =

2tdk
(1 + k) 2

Resistencia a la transferencia de masa

Dentro de la FM: CM

soporte

soporte
2

CM =

2
m
f(dp, , dc )

DM

Ecuacin de van Deemter

H = A + B/m + CEm + CMm

H

H mnimo

CE m

m ptimo

CMm
B/m

Seal del detector

Resolucin
tr
1

WA

WB

Tiempo

2 tr
R=
(WA+ WB)

R=

N
4

a-1
a

kB
1+k
B

Optimizacin de la columna

aumentar la separacin disminuir el ancho de

entre bandas (tR)
bandas

Modificar variables
termodinmicas (K, k
y a) modificando FM,
FE y temperatura

Modificar variables
que permiten H y
N (ecuacin tipo
van Deemter)