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I. DEFINICIN
II. APLICACIONES
Un sistema comn es utilizar bacterias
(generalmente, Escherichia coli) y sus
plsmidos. Para clonar genes u otros
fragmentos de ADN en el laboratorio,
primero se asla un plsmido de una
clula bacteriana y luego se introduce el
ADN extrao. El plsmido resultante se
convierte en una molcula de ADN
recombinante, que contiene ADN
procedente de dos fuentes distintas. Se
vuelve a introducir el plsmido en la
clula bacteriana para obtener una
bacteria
recombinante,
que
se
reproduce formando un clon de clulas
idnticas. Debido a que las bacterias en
procesos de divisin replican el
plsmido recombinante y lo transfieren
a sus descendientes, el gen extrao es
clonado al mismo tiempo; es decir, el
clon de clulas contiene muchas copias
del gen.
PRODUCCION DE
CLONES EN CELULAS
Se comienza con el
aislamiento del plsmido
bacteriano de las clulas
de E. coli y del ADN que
contiene
el
gen
en
cuestin
de
clulas
humanas cultivadas en el
laboratorio. El plsmido ha
sido sometido a ingeniera
gentica para portar dos
genes que ms adelante
sern tiles.
La misma enzima de
restriccin digiere tanto el
plsmido como el ADN
humano
y
produce
extremos cohesivos. La
enzima corta el ADN del
plsmido en el nico sitio
de restriccin dentro del
gen lacZ, pero tambin
corta el ADN humano en
mltiples sitios, generando
varios
miles
de
fragmentos.
El ADN preparado en el
paso 3 se mezcla con
bacterias portadoras de
una mutacin en su propio
gen
lacZ,
que
las
incapacita para hidrolizar la
lactosa. Bajo condiciones
experimentales
adecuadas, las clulas
adquieren el ADN extrao
por transformacin.