TERAPIA GENICA

Transferencia de material gentico para tratar/corregir una

enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento
de un gen.
EX-VIVO vs IN- VIVO
CLULAS SOMATICAS vs CLULAS MADRE/
PRECURSORAS (STEM CELLS)

USO DE
RETROVIRUS EN
TERAPIA GENICA

Vector Viral Recombinante que

contiene el gen terapetico
Infeccin in vitro
de clulas
Ex-vivo
In vivo

Seleccin de las
clulas corregidas

Consideraciones:
- Riesgo de efectos secundarios
- Eficiencia de la transferencia de
genes

- Expresin contnua del gen

terapetico

CONSIDERACIONES EN LA TERAPIA GENICA

- Conocer y entender la causa de la enfermedad
- Conocer la estructura y funcin del gen a introducir

- Eficiencia de la transferencia del gen en clulas blanco

- Control de la expresin del gen
- Prevencin y control de la respuesta inmune

- Riesgo de efectos secundarios (ej: uso de vectores virales)

- Ensayos en animales
- Ensayos clnicos

ESTRATEGIAS DE TERAPIA GENICA

Reemplazo del gen
Incremento de la expresin del gen (Gene augmentation
therapy, GAT), por ej.: fibrocis cistica.
Correccin del gen
Eliminacin dirigida de celulas blanco especficas
(ej. uso combinado de virus + prodrogas)
Inhibicin de la expresin de un gen (gen
ablation)- ej: antisense, ribozimas, RNA de interferencia
.

Inhibicin de la expresin
Ribozymes ( Ribozimas)
pueden cortar el mRNA especfico
Antisense oligos (oligonucletidos antisentido)
inhiben la traduccin del mRNA
siRNA (small interference RNA)
RNA pequeo de interferencia dirigido a un mRNA especfico
induciendo el corte del mRNA en fragmentos pequeos (de
aprox. 23 pb)

Mecanismo de corte por ribozima

5- - c g g a g u c a c u u c g - - 3 mRNA
3 G C C U C A
U G A A G C 5
A
C U
I
G
A
A
U
G
AG
CG
GC
GC
CG
GC
G U
CU

Ribozima

Targeted Killing Genetic Pro-drug Activation Therapy

viral vector

tumour cell

ganciclovir

tk

thymidine kinase
gene

ganciclovir phosphate
(Txico slo si ha sido fosforilado)

Transferencia del Gen

In vivo:

el vector se trasfiere directamente al

paciente (inyectable, respirado)

Ex vivo: se modifica las celulas del paciente en

el laboratorio antes de re-introducirlas (ej.
hepatocitos, fibroblasto, celulas hematopoyeticas,
etc.)

METODOS DE TRANSFERENCIA DEL DNA EXOGENO

A CELULAS EUCARIOTES
I. Metodos fisicos:
- transfeccin
- microinjeccin
- bombardeo de partculas de DNA recubiertas con
tungsteno, oro (gene gun)
- electroporacin
II. Metodos no virales: liposomas, transferencia mediada por
receptores.

III. Metodos virales: virus de DNA, virus de RNA.

METODOS DE TRANSFERENCIA

I. Metodos fsicos
No limitado por el numero de genes o tamao de
fragmento. Poco eficiente.

- Inyeccin de DNA desnudo

- Electroporacin
- Gene gun

Gene Gun (pistola de genes)

EFECTO DE LA ELECTROPORACION EN MEMBRANA

II. Metodos no virales

-

liposomas
transferencia mediada por ligandos o receptores
especficos

Desventajas:
- Expresin transiente
- Baja eficiencia de transferencia de genes

III. Metodos Virales

- Mayor eficiencia de transduccin
- Mayor riesgo
Retrovirus : ej.:- Moloney murine leukaemia virus
(Mo-MuLV), HIV

Adenovirus
Herpes Simplex (HSV)
Virus Adeno-asociados (AAV)
Lentivirus

Retrovirus

- Alta eficiencia
-Requiere que la clula est en divisin
- Hasta 8 kb

- Integracin al genoma del hospedero

- Alto riesgo

Adenovirus: Alta eficiencia de transduccin

Hasta 8 kb
Infecta celulas diferenciadas y tambien en replicacin
Desventajas: - Expresin transiente (gen no integrado al genoma)
- Las proteinas virales pueden ser expresadas
- Problemas por la respuesta inmune

Herpes Simplex: fragmentos largos

- expresin por mayor tiempo
- sistema nervioso central

- poco eficiente

Adenovirus
Se puede direccionar al
virus hacia un tejido o tipo
de clula en particular,
acoplando ligandos para
receptores especficos.

CELULA DE
EMPAQUETAMIENTO
(para la produccin de
particulas virales
recombinantes)

CELULA DE
EMPAQUETAMIENTO
(liberacin de
particulas virales
recombinantes,
infectivas pero no
replicativas)

CONSIDERACIONES EN LA TERAPIA GENICA

- Conocer y entender la causa de la enfermedad
- Conocer la estructura y funcin del gen a introducir

- Eficiencia de la transferencia del gen en clulas blanco

- Control de la expresin del gen
- Prevencin y control de la respuesta inmune

- Riesgo de efectos secundarios (ej: uso de vectores virales)

- Ensayos en animales
- Ensayos clnicos

CLONACION
TERAPEUTICA

Primer Protocolo de Terapia Gnica (1990)

Sindrome de Inmunodeficiencia
Combinada Severa (SCID)

Defecto en la actividad
de la Adenosina
Deaminasa (ADA)

Protocolos de Terapia Gnica en Cancer.

RNA de interferencia en la terapia para Cancer

Gene Therapy Journals

(Scientific, peer-reviewed publications targeted to clinicians and researchers.)

Cancer Gene Therapy - From the publishers of Nature.

Current Gene Therapy - From Bentham Science Publishers.
Gene Therapy - From the publishers of Nature.
Human Gene Therapy - Journal published by Mary Anne
Liebert, Inc.
The Journal of Gene Medicine - Official journal of the European
Society of Gene Therapy (ESGT), Japan Society of Gene
Therapy (JSGT), and the Australasian Gene Therapy Society
(AGTS).
Molecular Therapy - A monthly journal published by the
American Society of Gene Therapy (ASGT).
Other Publications